脈君安片主要降壓成分葛根素和氫氯噻嗪在大鼠體內的藥動-藥學學報

1、· 1056 ·藥學學報Acta Pharmaceutica Sinica 2009, 44 (9): 1056- 1060·研究簡報 ·脈君安片主要降壓成分葛根素和氫氯噻嗪在大鼠體內的藥動學研究張仙, 韓鳳梅, 杜鵬, 陳勇*(湖北大學中藥生物技術省重點實驗室, 湖北武漢430062)關鍵詞 : 葛根素 ; 氫氯噻嗪 ; 脈君安片 ; 藥動學中圖分類號 : R917文獻標識碼 : A文章編號 : 0513-4870 (2009) 09-1056-05Pharmacokinetics of puerarin and hydrochlorothiazide

2、 from Maijunan tablets in ratsZHANG Xian, HAN Feng-mei, DU Peng, CHEN Yong*(Hubei Province Key Laboratory of Biotechnology of Traditional Chinese Medicine, Hubei University, Wuhan 430062, China)Abstract : After oral administration of low, middle, high dose of simulative Maijunan tablets to SD rats a

3、ndpuerarin, hydrochlorothiazide at middle dosage to SD rats separately, plasma samples were collected at differenttimes and treated with acetonitrile toprecipitate protein.The contents of puerarin and hydrochlorothiazideinplasma were determined by HPLCmethod.The mean plasmaconcentration-timeprofiles

4、 of puerarin andhydrochlorothiazide at different dosages of medication administration were processed by 3P97 pharmacokineticsoftware and SPSS statistics 17.0 software.The results indicated that the in vivo kinetic processes of puerarin inrats were allfitted to a two-compartment open modeland hydroch

5、lorothiazidefittedto a one-compartmentopen model.Hydrochlorothiazide in vivokinetic process in rats wasin accordance with the linear dynamics.Thecombination of hydrochlorothiazideand rhynchophylla withpuerariapromoted the absorption, reducedtheelimination rate and prolongedthe actiontimeofpuerarinin

6、vivo.Meanwhile,the combination alsopromoted the absorption rate and the bioavailability,prolonged the actiontimeand the accumulation timeofhydrochlorothiazide in vivo .Key words : puerarin; hydrochlorothiazide; Maijunan tablet; pharmacokinetics脈君安片是由葛根、氫氯噻嗪和鉤藤三味藥組成的復方制劑 , 臨床用于高血壓、 冠心病等有較好的療效。葛根素是葛根中

7、的主要黃酮類化合物, 對心腦血管疾病有顯著的治療作用 1 。氫氯噻嗪為中效利尿劑, 它通過抑制腎小管對鈉和水的再吸收 , 從而達 到降壓作用。 鉤藤能降低 大腦皮層 的興奮性 , 擴張周圍血管 , 有明顯的 鎮(zhèn)靜和降壓作用 2 。目前 , 對葛根素、氫氯噻嗪藥動學 研究較多 3- 8 。本文研究了 復方脈君安片中葛根素和氫氯噻嗪的藥動學以及配伍 對葛根收稿日期 : 2009-01-05.基金項目 : 2008 年湖北省高等學 校優(yōu)秀中青年團隊計劃項目(T200807).* 通訊作者 Tel: 86-27-88663590, E-mail: cy101610素和氫氯噻嗪藥動學 性質 的影響 ,

8、從藥動學 角度探討了脈君安片 配伍的合理性 , 尚未見文獻 報道。材料與方法儀器與試劑 Agilent 1100 型 HPLC (美國安捷倫公司 , 美國 ); Agilent ChemStation 色譜工 作站 (美國安捷倫公司 , 美國 ); UV-1601 紫外分光光度計 (SHIMADZU, 日本 ) 。葛根素對 照品 (批號 : 753-200007) 、氫氯噻嗪對照品 (批號 : 100309-200001) 均購于中國藥品生物制品檢定所 ; 對羥基苯甲酸購 于天津市 化學 試劑一廠(分析純 ); 脈君安片 (產品批號 為 700120)、鉤藤藥 材張 仙等 : 脈君安片主要 降

9、壓成 分葛根素和氫氯噻嗪 在大鼠體內 的藥動學 研究· 1057 ·購于武漢中 聯(lián)藥業(yè)集團股份有限公司 ; 鉤藤總堿自制。鉤藤總堿制備方法9取鉤藤藥 材粉末 100 g,用 95%乙醇 ( 含 0.1%鹽酸) 加熱回流提取 3 次, 過濾后的提取液減 壓 60 回 收乙醇 , 再用 0.1% 酸水溶解、過濾, 過濾后的濃濾液 100 mL (pH 2 3) 置分液漏斗中 , 用濃氨水堿化調至 pH 1011, 然后經 氯仿萃取 , 萃取液減 壓回收氯仿, 得總生物 堿。上述 方法制備的鉤藤 總堿提取 物中 總堿 的含量參照文獻 10 方法測定, 含量為 61.4%。實驗動物

10、 SPF級健康 SD大鼠 40 只 , 雌雄各半 , 體重 (230 ±20) g, 購于華中科技大學同濟醫(yī)學院實驗動物學 部, 合格證 號: SCXK ( 鄂) 2003-0005。復方脈君安灌胃樣品的制備參照文獻 11 - 13 方法測得 3 個批號脈君安片中葛根素、 氫氯噻嗪、鉤藤總堿的平均含量比例 為 13.3 3.6725。按此比例加入適量 葛根素標準品、氫氯噻嗪 標準品和鉤藤 總堿提取物配制成模擬復方脈君安片 灌胃樣品 。其中, 葛根素、氫氯噻嗪和鉤藤 總堿的含量分別為 229, 63 和 436mg·g- 1。SD 大鼠藥代動力學實驗取 40 只大鼠分成 5組

11、, 第 13 組分別灌胃 低、中、高劑 量模擬 脈君安片 0.437, 0.874 和 1.311 g·kg- 1, 第 4 組灌胃葛根素 0.2 g·kg- 1, 第 5 組灌胃氫氯噻嗪 0.055 g·kg- 1 。每只 大鼠分別于給藥后 10, 20, 30, 45, 60, 90, 120, 240, 300,360, 480, 600, 720 和 1 440 min 眼眶取 血約 0.5 mL, 肝素抗凝 , 4 下 以 3 000 r·min - 1 離心 15 min, 分離血漿 0.2 mL, 按 “血 漿樣品處理” 方法處理后進行 H

12、PLC 測定。色譜條件Agilent Zorbax Eclipse plus C18 (150mm × 4.6 mm ID, 5 m) 色譜柱; 菲羅門保護柱(3mm × 4.0 mm); 乙腈- 1%冰醋酸 (11 89, v/v) 流動相; 流速 1.0 mL·min- 1 ; 檢測波長分別為: 013.8 min,250 nm, 13.8 17 min, 270 nm, 17 20 min, 250 nm; 柱溫 25 ; 進樣體積 20 L 。對照品及內標溶液配制精密稱 取葛根素對 照品 5.24 mg, 用 50%乙醇溶解 并定容于 10 mL 量瓶中,

13、即為葛根素對 照品 儲備液 ; 精密稱 取氫氯噻嗪對 照品 3.77 mg, 用 50%乙醇溶解 并定容于 10 mL 量瓶中,即為氫氯噻嗪對 照品 儲備液 ; 精密稱 取對羥基苯甲酸對照品 6.00 mg, 用乙腈- 1%冰醋酸 (11 89) 溶解并定容于 10 mL 棕色量瓶中, 即為內標儲備液 。血漿樣品處理 14 - 17 精密吸取血漿 200 L, 依次加入 50%乙醇溶液 50 L,內標溶液 (3.0 g·mL - 1對羥基苯甲酸 ) 50 L, 渦旋振蕩 1 min 后, 加入乙腈 0.8 mL 沉淀蛋白 , 再渦旋振蕩 3 min 后于 12 000 r·

14、min- 1 離心 10 min, 取上清液, 45 下 于離心真空濃縮儀揮干 溶劑 , 殘渣 用流動相 100 L 溶解 , 12 000r·min- 1 離心 10 min, 取上清液 20 L 進樣分析 。數(shù)據(jù)處理所得血藥濃度數(shù)據(jù)采用中國藥理學會 3P97 藥代動力學軟件進行曲線 擬合, 計算藥動學參數(shù)。采用 SPSS statistics 17.0 統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析 , 低、中、高劑量模擬 脈君安片組 間葛根素、氫氯噻嗪藥動學 參數(shù)采用單因 素方 差分析 (one-wayANOVA) 結合均值間多重比較 (multiple comparisons);對中劑 量模擬

15、脈君安片和中劑 量葛根素、氫氯噻嗪的藥動學 參數(shù)均采用單因素方差分析結合 Dunnett 雙側檢驗。結果1 方法專屬性大鼠血漿中葛根素和氫氯噻嗪的 色譜分 離見圖1。內標 對羥基苯甲酸 的保留時間 約為 12.81 min, 氫氯噻嗪的 保留時間 約 14.69 min, 葛根素的 保留時間約為 18.75 min 。在葛根素、氫氯噻嗪和 內標的色譜峰處血漿中內源性雜質不干擾 其測定。2 標準曲線制備取空白血漿 200 L, 加入不同濃度氫氯噻嗪 /葛根素系列對照溶液 50 L 和 3.0 g·mL- 1 內標溶液 50L,配制如下 濃度梯度氫氯噻嗪 /葛根素血 漿樣品 :0.075

16、 4 / 0.104 8, 0.226 2 / 0.314 4, 0.754 0 / 1.048 0,1.885 0 / 2.620 0, 3.770 / 5.240 0, 7.540 0 / 10.480 0 g·mL - 1 , 每一濃度平行做 3 份 (n = 3), 按“血漿樣品處理” 項操作 , 建立標準曲線 。以血漿 樣品中待測物濃度 (x) 為橫坐標, 待測物與內標的峰面積 比值為縱坐標 (y) 作圖, 求得氫氯噻嗪 標準曲線 y = 1.172 4x +0.017 3 (r = 0.999 9), 線 性范 圍為 0.075 4 7.54 g·mL- 1 ,

17、 最低定量限 (LOQ) 為 0.075 4 g·mL- 1。葛根素標準曲線 y = 1.395 2x - 0.085 (r = 0.999 9), 線性范圍為 0.104 8 10.48 g·mL - 1, 最低定量限 (LOQ) 為 0.104 8 g·mL- 1。3 精密度與穩(wěn) 定性試驗依法制備氫氯噻嗪 /葛根素 低、中、高 3 種濃度(0.226 2 / 0.314 4, 0.754 0 / 1.048 0, 1.885 0 / 2.620 0g·mL - 1 ) 的質量控制 (QC) 樣品 , 按血漿樣品制備方法于 1日內重復測定 3次, 連續(xù)

18、測定 3天, 計算日內及日間精密度見表 1。同時, 考察了上述 3 個濃度質量控制樣品在不同保存條件下的穩(wěn)定性。血 漿樣· 1058 ·藥學學報Acta Pharmaceutica Sinica 2009, 44 (9): 1056- 1060Figure 1 Chromatograms of puerarin and hydrochlorothiazide in rat blank plasma (A), the blank plasma spiked with IS (B), the blank plasma spiked with IS, hydrochlorothi

19、azide and puerarin (C), the plasma sample at the time of 1 hour after oral administration of simulativeMaijunan tablets (D).1: p -Hydroxybenzoic acid (IS); 2: Hydrochlorothiazide; 3: PuerarinTable 1 Precision for determining puerarin and hydrochlorothiazide concentrations in plasma samples (n = 3, x

20、 ±s)CompoundAdded/g·mL- 1Intra-dayInter-dayFound/g·mL - 1RSD/%Found/g·mL - 1RSD/%Puerarin0.314 40.323 8±0.005 71.770.342 8 ± 0.027 88.111.048 01.005 0±0.037 13.691.035 1 ± 0.086 48.352.620 02.012 0±0.036 01.791.943 2 ± 0.115 95.96Hydrochlorothiazide0

21、.226 20.188 9±0.006 13.240.192 6 ± 0.003 31.720.754 00.738 6±0.015 02.020.759 1 ± 0.050 96.701.885 01.458 0±0.047 73.271.423 1 ± 0.071 95.05品室溫放置 15 h 葛根素 相對標準 偏差 (RSD) 分別收率分別為 84.4% (RSD = 4.2%), 76.1% (RSD = 6.0%)為 1.86%, 3.59%, 2.36%; 氫氯噻嗪 RSD 分別為和 86.7% (RSD = 5.2%)

22、, 內標溶液經同樣提取 處理,2.27%, 3.67%, 2.15% 。血漿 樣品處理后室溫放置 8 h其回收率為 84.9% (n = 5, RSD = 2.8%) 。將 以上各個葛根素 RSD 分別為 5.50%, 3.89%, 3.15%; 氫氯噻嗪樣品進樣后 所得峰面積值代 入回歸方程計算濃度,RSD 分別為 2.68%, 3.90%, 2.79% 。血 漿樣品凍融循所得濃度與實際濃度的比值即為方法回收率。葛根素環(huán) 3 次后 葛根素 RSD 分別為 6.75%, 4.61%, 3.76%;低、中、高 3 種濃度下樣品的回收率分別為 115.3%氫氯噻嗪 RSD 分別為 3.56%, 4

23、.98%, 3.91% 。樣 品中(RSD = 7.4%), 111.8% (RSD = 5.8%), 87.1% (RSD =葛根素和氫氯噻嗪 基本 穩(wěn)定。3.5%)。氫氯噻嗪 低、中、高 3 種濃度樣品的回收率4 絕對回收率 與方法 回收率 試驗分別為 85.9% (RSD = 7.6%), 94.4% (RSD = 9.2%),配制氫氯噻嗪 / 葛根素 低、中、高 3 種濃度91.4% (RSD = 1.6%)。(0.226 2 / 0.314 4, 0.754 0 / 1.048 0, 1.885 0 / 2.620 05 藥時曲線和藥代動力學 參數(shù)g·mL- 1) 的質量控

24、制 (QC) 樣品, 以提取后 的與未實驗數(shù)據(jù)采 用中國藥理學會 3P97藥代動力學軟經提取 直接進樣獲得的色譜峰面積 之比, 計算樣品件擬合, 以曲線擬合優(yōu)度和 AIC 值為擬合度指標進的絕對回收率。每一濃度進行 5 樣本分析 。葛根素 低、行模型識別, 確定房室模型 , 求算葛根素和氫氯噻中、高 3 種濃度下樣品的提取回 收率分別為 87.7%嗪在大鼠體內 的各項藥動學 參數(shù), 并繪制其各時間(RSD = 4.4%), 85.5% (RSD = 3.9%) 和 87.9% (RSD =點平均藥時曲線 (圖 2), 所得藥動力學參數(shù)見表 2、4.1%)。氫氯噻嗪 低、中、高 3 種濃度樣品的

25、提取回表 3。結果表 明, 大鼠灌胃 低、中、高 3 種劑量模擬張 仙等 : 脈君安片主要 降壓成 分葛根素和氫氯噻嗪 在大鼠體內 的藥動學 研究· 1059 ·Figure 2Mean plasmaconcentration-time profiles of puerarinafteroraladministrationof Maijunan tabletsat low ( ), middle(),highdosages ( ) and puerarin at middledosage () to SDrats (n = 8,x ±s)Figure 3 Mean

26、 plasma concentration-time profiles of hydro-chlorothiazide after oral administration of Maijunan tablets atlow ( ), middle ( ), high dosages ( ) and hydrochlorothiazide at middle dosage ( ) to SD rats ( n = 8, x ±s)Table 2 Meanpharmacokineticparameters forpuerarinin rat plasma after oraladmini

27、strationof simulativeMaijunan tablets at low,middle, high dosages and puerarin at middle dosage ( n = 8,x ±s)ParameterMaijunan tabletPuerarinLow dosageMiddle dosageHigh dosageKa /min - 10.120 ±0.099?0.172±0.1850.238±0.2020.098±0.049Lag time /min1.447±2.4171.924±2.7

28、013.957±3.6041.252±2.244V/Fc /L ·kg- 1142.153±37.040160.561±55.592 *156.479 ±57.910196.919± 43.996t1/2 /min360.698±217.658353.368±292.579172.947 ±33.353155.626± 56.876K21 /min - 10.029±0.0230.030±0.0290.032±0.0240.070±0.101-

29、10.004±0.0020.005±0.0020.008±0.0040.006±0.002K10 /minK12 /min - 10.019±0.0180.016±0.0190.034±0.0490.016±0.026AUC 0- 6 h /g·mL - 1 ·min190.720±60.920?284.569±87.976 *305.052 ±48.657181.022± 28.403CL/ F s /L ·kg- 1 ·min- 1

30、0.568±0.1630.749±0.175 *1.006±0.1651.124±0.139tmax /min26.135 ±11.87928.139 ±19.61120.212±15.59631.148±10.499Cmax /g·mL - 10.512 ±0.121?0.982±0.337*1.522±0.4160.812±0.092* P < 0.05, * P < 0.01 vs middle dose of puerarin;? P <

31、0.05 vs middle and high dose of simulative Maijunan tabletsTable 3 Meanpharmacokineticparameters forhydrochlorothiazide inrat plasma after oraladministrationof simulative Maijunantablets at low, middle, high dosages and hydrochlorothiazide at middle dosage (n = 8,x ±s)ParameterMaijunan tabletHy

32、drochlorothiazideLow dosageMiddle dosageHigh dosage- 12.879±1.777?5.740±4.2892.527±1.4553.454 ±2.267Ka /hKe /h- 10.145±0.0450.208±0.0970.161±0.0810.134 ±0.025Lag time /h0.031±0.0260.094±0.028 *0.042±0.0350.044 ±0.035t1/2 (Ke) /h5.149±1

33、.3294.517±3.3375.146±1.9995.340 ±1.044tmax /h1.332±0.5420.792±0.3201.406±0.5611.117 ±0.305Cmax /g·mL - 11.088±0.349?2.595±0.590 *3.246±0.6861.581 ±0.419AUC 0- 24 h /g·mL- 1 ·h9.379±2.017?17.376±7.06529.151±10.70313.

34、907 ±3.272CL/ F s /L ·kg- 1- 13.038±0.5703.682±1.6363.206±1.2284.152 ±0.984·hV/Fc /L ·kg- 122.700 ±7.74819.882±9.130 *21.225±5.54131.892 ±9.354* P < 0.01 vs middle dose of hydrochlorothiazide;? P < 0.05 vs middle and high dose of simu

35、lative Maijunan tablets脈君安片 以及 中劑 量葛根素和中劑 量氫氯噻嗪 后 ,討論葛根素的藥 時曲線 均符合開放二 室模型 , 權重為 1C,大鼠灌胃模擬 脈君安片 低、中、高 3 個劑量后 , 葛氫氯噻嗪的藥 時曲線 均符合開放一室模型,權重為根素在大鼠體內 的藥時過程均符合一級吸收的開放二1。室模型,氫氯噻嗪 在大鼠體內 的藥時過程均符合一級· 1060 ·藥學學報Acta Pharmaceutica Sinica 2009, 44 (9): 1056- 1060吸收的開放一室模型。3 組中氫氯噻嗪的 t1/2 (Ke) 無顯著性差異 , 隨給藥

36、劑量增加, AUC 0- 24 h 線性增大。因此,可以判斷 氫氯噻嗪 在大鼠體內 的藥時過程符合線性動力學過程 。低、中劑量組葛根素的 t1/2無顯著性差 異, 但高劑量組 t1/2變小; AUC0 - 6 h 隨給藥劑量增加而增大,因此, 不能判斷葛根素 體內藥動學過 程是否是線性動力學過程 。同時, 灌胃不同劑量模擬脈君安片時, 葛根素和氫氯噻嗪的藥動學 參數(shù)存在一定的差異。不同劑量復方給藥組葛根素、氫氯噻嗪的 AUC0 - t、Cmax 存在統(tǒng)計學意義 (P < 0.05), 隨著給藥劑量的增加, 葛根素、氫氯噻嗪在體內 的吸收、達峰濃度也隨之增加。氫氯噻嗪和葛根素吸收 速率 K

37、a 有統(tǒng)計學意義 (P < 0.05), 因而在體內的達峰時間隨劑量改變; 氫氯噻嗪 Ke 沒有統(tǒng)計學意義 , 因而平均滯留時間不隨劑量改變。由表 2 可知, 與葛根素給藥組相比, 復方給藥組 AUC0 - 6 h 明顯變大 (P < 0.01), Cmax 有所增加 (P < 0.05), 說明配伍對葛根素在體內的吸收具有顯著的 促進作用。配伍后葛根素的 K21 變小、 V/Fc 明顯變小, 說明配伍可以影響 葛根素 在體內 的分布情況 。配伍 后 CL/ Fs 明顯變小 (P < 0.01), t1/2 延長, 說明配伍 可以降低 葛根素的消除 速率, 增加葛根素的

38、 體內 作用時間 。由表 3 可知 , 與氫氯噻嗪給藥組相比, 復方給藥組氫氯噻嗪 AUC0- 24 h 變大、Cmax 明顯變大, tmax 變小 , 說明配伍可以促進氫氯噻嗪的吸收 速度與生物利用 度。配伍前后 Ke, t1/2 (Ke), CL/ Fs 雖然無顯著性差異, 但配伍后 Ke 變大, t1/2 (Ke) 變小, 說明配伍可以在一定程度上促進氫氯噻嗪的腎 清除速率, 但配伍后 CL/Fs 變小, Lag time顯著變大 (P < 0.01), 提示配伍可以延長氫氯噻嗪在體內的滯留時間。References1 Wang YX, He LR. Pharmaceutical

39、action of puerarin oncardiovascularsystemanditsmechanismJ.ShanghaiJTradit Chin Med (上 海中醫(yī)藥 雜志 ), 2004, 38: 62 - 64.2 Liu J, Fu ZJ. General sitution of the study on the UncariarhynchophyllaJ.Strait Pharm J (海峽 藥學 ), 2006, 18: 90-92.3 Quan DQ, Xu GX. Formulation optimization of self-emulsifying prepar

40、ations of puerarin through self-emulsifying performances evaluation in vitro and pharmacokinetic studies in vivo J. Acta Pharm Sin ( 藥學學報 ), 2007, 42: 886 - 891.4Yan B, Sun H, He XH, et al.Studies on pharmacokinetics ofpueraria flavonoid in normal and cerebral ischemia-reperfusion rats J. Chin Pharm

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42、pairHPLC J. Chin Hosp PharmJ (中國醫(yī)院藥學雜志), 2006,26: 48 - 50.7 Beermann B, Groschinsky-Grind M.Pharmacokinetics ofhydrochlorothiazide in man J.Eur J Clin Pharmacol, 1977,12: 297 - 303.8 Roux A, Liboux A, Delhotal B, et al. Pharmacokinetics in man of acebutolol and hydrochlorothiazide as single agents andin combination J. Eur J Clin Pharmacol, 1983, 24: 801 - 806.9Liang Y, Wen