培養(yǎng)基配方及配制方法

1、培養(yǎng)基配方1斜面菌種保存培養(yǎng)基培養(yǎng)基（馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基）稱取200g馬鈴薯，洗凈去皮切碎，加水1000ml煮沸，紗布過濾，濾液補足1000ml,再加15g葡萄糖和15-20g瓊脂， 充分溶解后趁熱紗布過濾，分裝試管，每試管約5-10ml（視試管大小而定），121C滅菌20分鐘左右后取出試管擺斜面，冷卻后貯存?zhèn)溆?。麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基麥芽汁的制備：干麥芽首先進行粉碎（不能太粗，也不必太細。太粗影響糖化效率，過細影響過濾速度），按麥芽重量的34倍加水,攪拌均勻后，37c左右浸泡1小時，然后緩緩加溫至5563c（在升溫過程中應(yīng)不斷攪拌使溫度均勻），保溫46小時（用摩爾/升碘液測定為黃色至無色時），

2、糖化結(jié)束。在糖化過程中，應(yīng)每小時攪拌一次。取過濾后的清液，加力瓊脂，分裝試管，每試管約5-10ml（視試管大小而定），121C滅菌20分鐘左右后取出試管擺斜面，冷卻后貯存?zhèn)溆谩?基菌落總數(shù)檢測平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基將？胰蛋白月東5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、瓊脂15.0g加入蒸儲水1000ml中， 煮沸溶解后， 調(diào)pH,然后在121c下滅菌15min,取出，稍微冷卻后，帶熱倒入培養(yǎng)皿中。3志賀氏菌檢測GN增菌液成分：胰蛋白月東：20g,葡萄糖：1g,甘露醇：2g,檸檬酸鈉：5g,去氧膽酸鈉0.5g,磷酸二氫鉀4g,磷酸氫二鉀1.5g,氯化鈉5g,蒸儲水1000ml。制法：將上述物品加

3、入蒸儲水中，加熱溶解煮沸，調(diào)pH為，分裝，在115c高壓滅菌15min。HE瓊脂成分： 月東：12g,牛肉膏3g,乳糖12g,蔗糖12g,水楊素2g,膽堿20g,氯化鈉5g,瓊脂1820g,蒸儲水1000m10,%M麝香草酚藍溶液16ml,Andrade指示劑20ml.,甲液20ml,乙液20ml。制法：將上述前七種成分加入400ml蒸儲水中作為基礎(chǔ)液，將瓊脂加入到600ml蒸儲水中加熱溶解， 加入甲液乙液到基礎(chǔ)液中， 調(diào)pH,再加入指示劑，并與瓊脂液合并，待冷卻至5055C,傾注澆平板。注1:此培養(yǎng)基不能圖溫火菌。注2:甲液的配置：硫代硫酸鈉：34g,檸檬酸鐵鈉：4g,蒸儲水：100ml。注

4、3:乙液的配置：去氧膽酸鈉：10g,蒸儲水：100ml。注4：Andrade指示齊ij的配置：酸性復(fù)紅：0.5g,1mol/l的氫氧化鈉溶液：16ml,蒸儲水：100ml。將酸性復(fù)紅溶解于蒸儲水中，加入氫氧化鈉溶液，數(shù)小時后如復(fù)紅褪色不全，再加氫氧化鈉溶液12ml。SS瓊脂3.3.1基礎(chǔ)培養(yǎng)基：成分：牛肉膏：5g,月東：5g,三號膽鹽：3.5g,瓊脂：17g,蒸儲水：1000ml。制法：將牛肉膏蛋白月東，三號膽鹽加入到400ml蒸儲水中，將瓊脂加入到600ml蒸儲水中，煮沸使其溶解，然后液混合，于121c下滅菌15min,保存?zhèn)溆谩?.3.2完全培養(yǎng)基成分：基礎(chǔ)培養(yǎng)基：1000ml,乳糖：10

5、g,檸檬酸鈉：8.5g,硫代硫酸鈉：8.5g,10%宇檬酸鐵溶液：10ml,1%M生紅溶液：，%煌綠溶液：。制法：加熱融化基礎(chǔ)培養(yǎng)基，按比例加入處染料以外的所有成分，攪拌均勻，調(diào)，加入中性紅溶液和煌綠溶液，混合均勻后澆平板。注1:配制好的培養(yǎng)基宜當(dāng)日使用，或保存于冰箱48h內(nèi)使用。注2:煌綠溶液配好后，應(yīng)在10日內(nèi)使用。注3:可以購買SS瓊脂的干燥培養(yǎng)基。麥康凱瓊脂成分：蛋白月東：17g,月東：3g,豬膽鹽（牛、羊膽鹽）：5g,氯化鈉：5g,瓊脂：17g,蒸儲水：1000ml,乳糖：10g,%吉晶紫水溶液：10ml,%中性紅水溶液：5ml。制法：將蛋白月東、月東、豬膽鹽、氯化鈉溶解于400ml

6、蒸儲水中，調(diào)，將瓊脂加入到600ml蒸儲水中加熱溶解，將兩液混合均勻，于121c下滅菌15min備用。臨用時加熱融化瓊脂，趁熱加入乳糖，等冷卻到5055c時，加入結(jié)晶紫和中性紅水溶液，攪拌均勻后澆平板。注：結(jié)晶紫和中性紅水溶液配好后，須經(jīng)高壓滅菌。伊紅美藍瓊脂（EMB成分：蛋白月東：10g,乳糖：10g,磷酸氫二鉀：2g,瓊脂17g,2%尹紅Y溶液：20ml,噱藍溶液：10ml,蒸儲水1000ml,。制法：將蛋白月東、磷酸鹽、瓊脂溶解于蒸儲水中，調(diào)pH,于121c下滅菌15min備用。臨用時加熱融化瓊脂，并加入乳糖，冷卻至5055c時加入伊紅和美藍溶液，混合均勻后澆平板。三精鐵瓊脂成分：蛋白月

7、東：20g,牛肉膏：5g,乳糖：10g,蔗糖：10g,葡萄糖：1g,氯化鈉：5g,六水硫酸亞鐵鏤：0.2g,硫代硫酸鈉：0.2g,瓊脂:12g,酚紅：0.025g,蒸儲水：1000ml,。制法：將除瓊脂和酚紅以外的各種成分溶解于蒸儲水中，調(diào)pH,然后加入瓊脂，加熱溶解，加入姍紅水溶液，搖勻，分裝時量多一點，于121c下滅菌15min,擱高層斜面?zhèn)溆?。葡萄糖半固體發(fā)酵管成分：蛋白月東：1g,牛肉膏：0.3g,氯化鈉：0.5g,%（甲酚紫酒精溶液：，葡萄糖：1g,瓊脂：0.3g,蒸儲水：100ml,。制法：將蛋白月東，牛肉膏，氯化鈉加入水中，調(diào)pH后，加入瓊脂，煮沸溶解，再加入指示劑和葡萄糖。分裝

8、，于121c下滅菌15min,備用。半固體管成分：蛋白月東：1g,牛肉膏：0.3g,氯化鈉：0.5g,瓊脂：0.4g,蒸儲水：100ml,。制法：將上述成分溶于水中，加熱煮沸，并調(diào)pH后分裝小試管，121C高壓滅菌15min,直立凝固備用。尿素瓊脂成分：蛋白月東：1g,氯化鈉：5g,葡萄糖1g,磷酸二氫鉀：2g,%紅溶液：3ml,瓊脂：20g,蒸儲水：1000ml,20流素：100ml,士。制法：將除尿素和瓊脂以外的成分配好，調(diào)pH,加入瓊脂后加熱使其溶化并分裝小瓶，121c高壓滅菌15min,冷卻至5055c后，加入經(jīng)過濾滅菌的尿素溶液，最終尿素濃度為2%最終的pH應(yīng)為士。分裝于滅菌試管內(nèi)，

9、擱斜面?zhèn)溆?。西蒙氏檸檬酸鹽瓊脂成分：氯化鈉：5g,七水硫酸鎂：0.2g,磷酸二氫鏤：1g,磷酸氫二甲：1g,檸檬酸鈉：5g,瓊脂：20g,蒸儲水：1000ml,婕麝香草酚藍溶液：40ml,。制法：先將鹽類溶解于水中，調(diào)pH,再加瓊脂，加熱溶化，然后加入指示劑，混合均勻后分裝試管，121c下滅菌15min,擱成斜面。實驗方法：挑取少量瓊脂培養(yǎng)物接種，于36c1C培養(yǎng)4天，每天觀察結(jié)果，陽性者斜面上有菌落生長。培養(yǎng)基由綠色轉(zhuǎn)為藍色。富化鉀（KCN培養(yǎng)基成分： 蛋白月東：10g,氯化鈉：5g,磷酸二氫鉀：0.225g,磷酸氫二鈉：5.64g,蒸儲水：1000ml,海化鉀7容液:20ml,。制法： 將

10、除富化鉀以外的成分配好分裝，121c滅菌15min,放在冰箱內(nèi)使其充分冷卻，每100ml培養(yǎng)基加入淘化鉀溶液（最后濃度為1:10000）,分裝于12m訴100mnM菌試管，每管約4ml,立刻用橡皮塞塞緊，放在4c冰箱內(nèi)，至少可保存兩個月，同時將不加富化鉀的培養(yǎng)基作為對照培養(yǎng)基，分裝備用。試驗方法：將瓊脂培養(yǎng)物接種于蛋白月東水內(nèi)成作為稀釋菌液，挑取1環(huán)接種于富化鉀培養(yǎng)基，另外挑取1環(huán)接種于對照培養(yǎng)基，在36C1C下培養(yǎng)12天，觀察結(jié)果，如有細菌生長，則為陽性，經(jīng)2天后不生長則為陰性。注：富化鉀是劇毒物質(zhì)，使用時應(yīng)小心，切勿沾染，以免中毒。夏天分裝培養(yǎng)基應(yīng)在冰箱內(nèi)進行，實驗失敗的主要原因是封口不嚴(yán)

11、，富化鉀逐漸分解，變成氫富酸氣體逸出，以致藥物濃度降低，細菌生長，造成假陽性現(xiàn)象。氨基酸脫竣酶實驗培養(yǎng)基成分：蛋白月東：5g,酵母浸膏：3g,葡萄糖：1g,蒸儲水：1000ml,%澳甲酚紫乙醇溶液：1ml,L-氨基酸或DL-氨基酸：0.5g或1g/100ml,。制法：除氨基酸以外的所有成分加熱溶解后，分裝每瓶100ml,分別加入各種氨基酸：賴氨酸、精氨酸和鳥氨酸。L-氨基酸按制口入，DL-氨基酸按1啕口入。再調(diào)，對照培養(yǎng)基不加氨基酸。分裝于滅菌的小試管內(nèi)，每管，上面滴加一層液體石蠟。115c高壓滅菌10min。實驗方法：從瓊脂斜面上挑取培養(yǎng)物接種，于36c土1C下培養(yǎng)1824h,觀察結(jié)果，氨基

12、酸脫竣酶陽性者由于產(chǎn)堿，培養(yǎng)基應(yīng)呈紫色。陰性者因為堿性物質(zhì)產(chǎn)生，但因葡萄糖產(chǎn)酸而是培養(yǎng)基變成黃色，對照管應(yīng)為黃色。蛋白月東水（靛基質(zhì)試驗用）成分：蛋白月東或胰蛋白月東：20g,氯化鈉：5g,蒸儲水：1000ml,制法：將上述成飛混合均勻，分裝小管，121c滅菌15min。靛基質(zhì)試劑：柯凡克試劑：將5g對二氨基甲醛溶于75ml戊醇中，然后慢慢加入濃鹽酸25ml。歐-波試劑：將1g對二氨基苯甲醛溶于90m195%勺乙醇內(nèi)，然后慢慢加入濃鹽酸20ml。實驗方法：挑取少量接種物接種，在361C下培養(yǎng)12天，必要時可培養(yǎng)45天，加入柯凡克試劑約，輕搖試管，陽性者試劑層呈深紅色，或加入歐-波試劑，沿管壁流

13、下，覆蓋于培養(yǎng)液表面，陽性者接觸面上呈玫瑰紅色。注：蛋白月東應(yīng)含有豐富的色氨酸，每批蛋白月東買來后應(yīng)用已知菌種實驗。糖發(fā)酵管成分：牛肉膏：5g,蛋白月東：10g,氯化鈉：3g,十二水磷酸氫二鈉：2g,腿麝香草酚藍溶液：12ml,蒸儲水：1000ml,。葡萄糖發(fā)酵管按上述成分配好后，按制口入葡萄糖，分裝于有一個倒置小管的小試管內(nèi)，121c滅菌15min。其他各種糖發(fā)酵管可按上述成分配好后， 分裝每瓶100m1,121C滅菌15min,另將各種糖類配好10%液，一同滅菌，將5ml糖溶液加入到100ml液體培養(yǎng)基中，以無菌操作分裝小試管。注：蔗糖不純，加熱后會自行水解者，應(yīng)采用過濾法除菌。實驗方法：從瓊脂斜