上課用--動物細胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)

1、上課用-動物細胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)為什么要進行動物細胞培養(yǎng)為什么要進行動物細胞培養(yǎng)? ?一一. .動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)如何進行細胞培養(yǎng)如何進行細胞培養(yǎng)? ?動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)和核移植技術(shù) 從動物機體中取出相關(guān)組織，將它們分散成細從動物機體中取出相關(guān)組織，將它們分散成細胞，然后放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細胞和增殖。胞，然后放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細胞和增殖。( (一一) )概念概念. 試說大致過程試說大致過程 為什么要把組織剪碎、用酶分解開？為什么要把組織剪碎、用酶分解開？ 用什么酶？為什么？用胃蛋白酶行用什么酶？為什么？用胃蛋白酶行不行？不行？ 這兩種酶會不會這兩種酶會不

2、會把細胞消化掉？（把細胞消化掉？（教材教材P44P44問題問題） 為什么要再分裝？為什么要再分裝？ 原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)？次數(shù)？原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)？次數(shù)？ 培養(yǎng)得到的細胞，如果暫培養(yǎng)得到的細胞，如果暫時不用時，怎么保存？時不用時，怎么保存？胰蛋白酶胰蛋白酶膠原蛋白酶膠原蛋白酶.培養(yǎng)條件動物動物組織組織分散成分散成單個細胞單個細胞細胞細胞懸液懸液培養(yǎng)培養(yǎng)胰蛋白酶胰蛋白酶膠原蛋白酶膠原蛋白酶原代原代培養(yǎng)培養(yǎng)傳代傳代培養(yǎng)培養(yǎng)胚胎的細胞或剛出生不久動物的組織胚胎的細胞或剛出生不久動物的組織( (二二) ) 動物細胞培養(yǎng)過程動物細胞培養(yǎng)過程 胚胎或幼齡動物的組織器官胚胎或幼齡動物的組織器官細胞懸液細胞懸液

3、10代細胞代細胞50代細胞代細胞剪碎胰蛋白酶或膠原蛋白酶洗滌、稀釋、洗滌、稀釋、分離分離原代培養(yǎng)用胰蛋白酶分散用胰蛋白酶分散細胞，說明細胞細胞，說明細胞間的物質(zhì)主要是間的物質(zhì)主要是蛋白質(zhì)。動物細蛋白質(zhì)。動物細胞培養(yǎng)適宜的胞培養(yǎng)適宜的PHPH為，此環(huán)境下胃為，此環(huán)境下胃蛋白酶（）沒有蛋白酶（）沒有活性，而胰蛋白活性，而胰蛋白酶酶(7.2-8.4)(7.2-8.4)的的活性較高活性較高。比老比老齡動齡動物的組織物的組織細胞增殖細胞增殖能力強，能力強，有絲有絲分裂分裂旺盛旺盛。分分化程度化程度越越低，低，繁殖繁殖能力越強，能力越強，越越容易培容易培養(yǎng)。養(yǎng)。動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)不能最終

4、培養(yǎng)成生物體成生物體細胞增殖細胞增殖緩慢，核緩慢，核型可能變型可能變化化動物組織細胞間隙中含有一動物組織細胞間隙中含有一定量的彈性纖維等蛋白質(zhì)，定量的彈性纖維等蛋白質(zhì)，將細胞網(wǎng)絡(luò)起來形成具有一將細胞網(wǎng)絡(luò)起來形成具有一定彈性和韌性的組織和器官。定彈性和韌性的組織和器官。貼壁生長貼壁生長接觸抑制接觸抑制1010代以內(nèi)，保持正常二倍體核型代以內(nèi)，保持正常二倍體核型傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng) 多細胞動物和人體的細胞都生活在內(nèi)環(huán)境中，多細胞動物和人體的細胞都生活在內(nèi)環(huán)境中，根據(jù)你所學的內(nèi)環(huán)境的知識，思考以下問題：根據(jù)你所學的內(nèi)環(huán)境的知識，思考以下問題： 1. 1.體外培養(yǎng)細胞時需要提供哪些物質(zhì)？體外培養(yǎng)細胞時需要

5、提供哪些物質(zhì)？ 2.2.體外培養(yǎng)的細胞需要什么樣的環(huán)境條件？體外培養(yǎng)的細胞需要什么樣的環(huán)境條件？ P46討討 論論充足營養(yǎng)（糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量充足營養(yǎng)（糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素等合成成分及血清、血漿等天然成分。）元素等合成成分及血清、血漿等天然成分。）適宜溫度、適宜溫度、PHPH和氣體環(huán)境；無菌無毒環(huán)境和氣體環(huán)境；無菌無毒環(huán)境 1、無菌、無毒 消毒、滅菌 抗生素 定期更換培養(yǎng)液（清除代謝廢物） 2、營養(yǎng) 合成培養(yǎng)基：糖、氨基酸、生長因子、無機鹽、微量元素（血清、血漿） 3、溫度和pH 36.50.5， 4、氣體 95%空氣，5%CO2（維持培養(yǎng)液PH）.植物組

6、織培養(yǎng)的條件；應(yīng)用（四）植物組織培養(yǎng)和動物細胞（四）植物組織培養(yǎng)和動物細胞 培養(yǎng)的比較培養(yǎng)的比較P47P47最上面最上面1 1、大規(guī)模的生產(chǎn)生物制品。、大規(guī)模的生產(chǎn)生物制品。2 2、培養(yǎng)的動物細胞作為基因工程的受體、培養(yǎng)的動物細胞作為基因工程的受體細胞。細胞。3 3、檢測判斷物質(zhì)的毒性。、檢測判斷物質(zhì)的毒性。4 4、培養(yǎng)正?；蚋鞣N病變的細胞，用于生、培養(yǎng)正常或各種病變的細胞，用于生理、病理、藥理等方面的研究，如用于理、病理、藥理等方面的研究，如用于 等，為等，為 及其及其他疾病提供理論依據(jù)。他疾病提供理論依據(jù)。( (五五) ) 動物細胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用動物細胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用篩選抗癌藥物篩選抗癌藥

7、物治療和預防癌癥治療和預防癌癥二二. .動物細胞核移植技術(shù)和克隆動物動物細胞核移植技術(shù)和克隆動物 將動物的一個細胞核，移入一個已將動物的一個細胞核，移入一個已經(jīng)去掉細胞核的卵母細胞中，使其重組并經(jīng)去掉細胞核的卵母細胞中，使其重組并發(fā)育成為一個新的胚胎，這個新的胚胎最發(fā)育成為一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發(fā)育為動物個體（克隆動物）終發(fā)育為動物個體（克隆動物）分分類類胚胎細胞核移植：胚胎細胞核移植：體細胞核移植：體細胞核移植：細胞分化程度低，恢復全能性容易細胞分化程度低，恢復全能性容易 細胞分化程度細胞分化程度高高，恢復全能性，恢復全能性不不容易容易( (一一) )、 動物細胞動物細胞核移植概念：

8、核移植概念：母綿羊母綿羊A 乳腺細胞乳腺細胞（體細胞）（體細胞） 母綿羊母綿羊B未受精的未受精的卵細胞卵細胞 母綿羊母綿羊C“多莉多莉” 新的卵細胞發(fā)育成早期胚胎新的卵細胞發(fā)育成早期胚胎去核卵細胞去核卵細胞提取細胞核提取細胞核核移植核移植胚胎移植胚胎移植( (二二) )、體細胞核移植的過程：、體細胞核移植的過程：請看教材請看教材P48P48圖圖2-212-21思考：思考：1.1.核移植的受體細胞是什么？處在什么時期？用此細核移植的受體細胞是什么？處在什么時期？用此細胞作為受體細胞有什么好處？胞作為受體細胞有什么好處？2.2.通過什么手段激活受體細胞，構(gòu)建重組胚胎？通過什么手段激活受體細胞，構(gòu)建

9、重組胚胎？ M M中期卵母細胞中期卵母細胞誘導方法：物理或化學方法激活受體細胞，完成誘導方法：物理或化學方法激活受體細胞，完成細胞分裂和發(fā)育進程。細胞分裂和發(fā)育進程。卵母細胞體積大，便于操作；含有營養(yǎng)物質(zhì)豐富，卵母細胞體積大，便于操作；含有營養(yǎng)物質(zhì)豐富，提供早期胚胎發(fā)育所需的營養(yǎng)；含有激活細胞核體提供早期胚胎發(fā)育所需的營養(yǎng)；含有激活細胞核體現(xiàn)全能性的物質(zhì)?，F(xiàn)全能性的物質(zhì)。 整個過程用了哪些技術(shù)？ 細胞培養(yǎng)、核移植、胚胎移植 新生牛的性別、基因？ 與供體相同 繁殖方式？ 無性繁殖 原理？ 動物細胞核的全能性P49討論：討論：1.1.在體細胞的細胞核移植到受體卵母細胞之在體細胞的細胞核移植到受體卵

10、母細胞之前，為什么必須先去掉受體卵母細胞的核？前，為什么必須先去掉受體卵母細胞的核？ 為使核移植的胚胎或動物的遺傳物質(zhì)全部為使核移植的胚胎或動物的遺傳物質(zhì)全部來自有重要利用價值的動物提供的體細胞，在來自有重要利用價值的動物提供的體細胞，在供體細胞的細胞核移至受體細胞之前，必須將供體細胞的細胞核移至受體細胞之前，必須將受體細胞的遺傳物質(zhì)去掉或?qū)⑵淦茐氖荏w細胞的遺傳物質(zhì)去掉或?qū)⑵淦茐?P49(P49小資料）。小資料）。 培養(yǎng)的動物細胞一般當傳代至培養(yǎng)的動物細胞一般當傳代至10105050代左代左右時，部分細胞核型可能會發(fā)生變化，其細胞右時，部分細胞核型可能會發(fā)生變化，其細胞遺傳物質(zhì)可能會發(fā)生突變，

11、而遺傳物質(zhì)可能會發(fā)生突變，而1010代以內(nèi)的細胞代以內(nèi)的細胞一般能保持正常的二倍體核型。因此，在體細一般能保持正常的二倍體核型。因此，在體細胞核移植中，為了保證供體細胞正常的遺傳基胞核移植中，為了保證供體細胞正常的遺傳基礎(chǔ)，通常采用傳代礎(chǔ)，通常采用傳代1010代以內(nèi)的細胞。代以內(nèi)的細胞。2.2.用于核移植的供體細胞一般都選用傳代用于核移植的供體細胞一般都選用傳代1010代以內(nèi)的細胞，想一想，這是為什么？代以內(nèi)的細胞，想一想，這是為什么？3.3.你認為用上述體細胞核移植方法生產(chǎn)的克隆動你認為用上述體細胞核移植方法生產(chǎn)的克隆動物，是對體細胞供體動物進行了物，是對體細胞供體動物進行了100%100%

12、的復制嗎？的復制嗎？為什么？為什么？絕大部分絕大部分DNADNA來自于供體細胞核，但其核外還有來自于供體細胞核，但其核外還有少量的少量的DNADNA，即線粒體中的，即線粒體中的DNADNA是來自于受體卵是來自于受體卵母細胞。母細胞。此外，即便動物的遺傳基礎(chǔ)完全相同，但動物的此外，即便動物的遺傳基礎(chǔ)完全相同，但動物的一些行為、習性的形成與所處環(huán)境有很大關(guān)系，一些行為、習性的形成與所處環(huán)境有很大關(guān)系，核供體動物生活的環(huán)境與克隆動物所生活的環(huán)境核供體動物生活的環(huán)境與克隆動物所生活的環(huán)境不會完全相同，其形成的行為、習性也不可能和不會完全相同，其形成的行為、習性也不可能和核供體動物完全相同，從這一角度看

13、，克隆動物核供體動物完全相同，從這一角度看，克隆動物不會是核供體動物不會是核供體動物100%100%的復制。的復制。( (四四) )、體細胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景：、體細胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景：1 1、在畜牧業(yè)中、在畜牧業(yè)中可以加速家畜遺可以加速家畜遺傳改良的進程傳改良的進程2 2、保護瀕危物種、保護瀕危物種3 3、醫(yī)藥衛(wèi)生領(lǐng)、醫(yī)藥衛(wèi)生領(lǐng)域生產(chǎn)醫(yī)用蛋白域生產(chǎn)醫(yī)用蛋白質(zhì)及組織器官的質(zhì)及組織器官的移植移植4 4、了解胚胎發(fā)育和、了解胚胎發(fā)育和衰老過程；追蹤研衰老過程；追蹤研究疾病的發(fā)展過程究疾病的發(fā)展過程和治療疾病和治療疾病 閱讀課本閱讀課本P50P50頁頁( (五五) )、體細胞核移植技術(shù)存在的問

14、題：、體細胞核移植技術(shù)存在的問題：思考與探究思考與探究1.1.幼齡與老齡動物的組織細胞比較，分化程度低幼齡與老齡動物的組織細胞比較，分化程度低的與分化程度高的組織細胞比較，哪一種更易于的與分化程度高的組織細胞比較，哪一種更易于培養(yǎng)？思考一下，這是什么道理？培養(yǎng)？思考一下，這是什么道理？ 提示：細胞的衰老與動物機體的衰老有著密切的提示：細胞的衰老與動物機體的衰老有著密切的關(guān)系，細胞的增殖能力與供體的年齡有關(guān)，幼齡關(guān)系，細胞的增殖能力與供體的年齡有關(guān)，幼齡動物細胞增殖能力強，有絲分裂旺盛，老齡動物動物細胞增殖能力強，有絲分裂旺盛，老齡動物則相反。所以，一般來說幼年動物的組織細胞比則相反。所以，一般

15、來說幼年動物的組織細胞比老年動物的組織細胞易于培養(yǎng)。同樣，組織細胞老年動物的組織細胞易于培養(yǎng)。同樣，組織細胞的分化程度越低，則增殖能力越強，所以更容易的分化程度越低，則增殖能力越強，所以更容易培養(yǎng)。培養(yǎng)。思考與探究思考與探究2.2.動物細胞培養(yǎng)要經(jīng)過脫分化的過程嗎？為什么？動物細胞培養(yǎng)要經(jīng)過脫分化的過程嗎？為什么？動物細胞培養(yǎng)不需經(jīng)過脫分化過程。因高動物細胞培養(yǎng)不需經(jīng)過脫分化過程。因高度分化的動物細胞發(fā)育潛能變窄，失去了度分化的動物細胞發(fā)育潛能變窄，失去了發(fā)育成完整個體的能力，所以，動物細胞發(fā)育成完整個體的能力，所以，動物細胞也就沒有類似植物組織或細胞培養(yǎng)時的脫也就沒有類似植物組織或細胞培養(yǎng)時

16、的脫分化過程了。要想使培養(yǎng)的動物細胞定向分化過程了。要想使培養(yǎng)的動物細胞定向分化，通常采用定向誘導動物干細胞，使分化，通常采用定向誘導動物干細胞，使其分化成所需要的組織或器官。其分化成所需要的組織或器官。年，美國威斯康星州的一個奶牛場有一頭年，美國威斯康星州的一個奶牛場有一頭名叫盧辛達（名叫盧辛達（LucindaLucinda）的奶牛，年產(chǎn)奶量為）的奶牛，年產(chǎn)奶量為 t t，創(chuàng)造了世界奶牛產(chǎn)奶量最高新紀錄。目，創(chuàng)造了世界奶牛產(chǎn)奶量最高新紀錄。目前世界各國高產(chǎn)奶牛場奶牛，年平均產(chǎn)奶量一般前世界各國高產(chǎn)奶牛場奶牛，年平均產(chǎn)奶量一般為十幾噸，而我國奶牛產(chǎn)奶量年平均水平僅為為十幾噸，而我國奶牛產(chǎn)奶量年

17、平均水平僅為3 34 t4 t。（1 1）能利用體細胞核移植技術(shù)克隆高產(chǎn)奶牛盧辛）能利用體細胞核移植技術(shù)克隆高產(chǎn)奶牛盧辛達嗎？請說明理由。達嗎？請說明理由?？梢?。盧辛達的產(chǎn)奶量很高，有高產(chǎn)奶的遺傳基可以。盧辛達的產(chǎn)奶量很高，有高產(chǎn)奶的遺傳基礎(chǔ)，利用盧辛達的體細胞克隆的奶牛其遺傳物質(zhì)礎(chǔ)，利用盧辛達的體細胞克隆的奶牛其遺傳物質(zhì)基本上全部來自該奶牛，其克隆牛具有高產(chǎn)的遺基本上全部來自該奶牛，其克隆牛具有高產(chǎn)的遺傳基礎(chǔ)，如果精心培育和飼養(yǎng)，有可能在世界范傳基礎(chǔ)，如果精心培育和飼養(yǎng)，有可能在世界范圍內(nèi)推廣，克隆牛再與高產(chǎn)的公牛自然繁殖，可圍內(nèi)推廣，克隆牛再與高產(chǎn)的公牛自然繁殖，可得到很多高產(chǎn)的后代，從而

18、加快奶牛改良進程。得到很多高產(chǎn)的后代，從而加快奶牛改良進程。該克隆牛不能無限制地推廣，其數(shù)量不宜過多，該克隆牛不能無限制地推廣，其數(shù)量不宜過多，尤其是在小范圍內(nèi)不能無限的繁殖，以避免奶牛尤其是在小范圍內(nèi)不能無限的繁殖，以避免奶牛群出現(xiàn)近親繁殖而引起種質(zhì)衰退。群出現(xiàn)近親繁殖而引起種質(zhì)衰退。（2 2）如果將克隆高產(chǎn)奶牛盧辛達的任務(wù)交）如果將克隆高產(chǎn)奶牛盧辛達的任務(wù)交給你，你將如何對它進行克?。拷o你，你將如何對它進行克隆？從盧辛達耳朵（也可用別的組織、器官，耳朵從盧辛達耳朵（也可用別的組織、器官，耳朵在活體上容易?。┥霞羧∫恍K組織，在體外在活體上容易?。┥霞羧∫恍K組織，在體外培養(yǎng)獲得該組織（如軟

19、骨組織）的細胞。從屠培養(yǎng)獲得該組織（如軟骨組織）的細胞。從屠宰場取廢棄的牛卵巢，抽取卵母細胞體外培養(yǎng)宰場取廢棄的牛卵巢，抽取卵母細胞體外培養(yǎng)成熟。用顯微針去除卵母細胞的核，再將耳細成熟。用顯微針去除卵母細胞的核，再將耳細胞注入卵母細胞，用電刺激方法使卵母細胞與胞注入卵母細胞，用電刺激方法使卵母細胞與體細胞融合，這時供體核就進入了受體卵母細體細胞融合，這時供體核就進入了受體卵母細胞，再用電刺激或化學物質(zhì)激活注入了體細胞胞，再用電刺激或化學物質(zhì)激活注入了體細胞核的卵母細胞，使其完成細胞分裂和發(fā)育過程。核的卵母細胞，使其完成細胞分裂和發(fā)育過程。核移植胚胎在體外短時間培養(yǎng)后，挑選正常卵核移植胚胎在體外

20、短時間培養(yǎng)后，挑選正常卵裂的胚胎植入經(jīng)同期發(fā)情處理的受體母牛體內(nèi)。裂的胚胎植入經(jīng)同期發(fā)情處理的受體母牛體內(nèi)。4.4.體細胞核移植技術(shù)在研究和應(yīng)用上還存體細胞核移植技術(shù)在研究和應(yīng)用上還存在什么問題？請你查閱資料，了解這方面在什么問題？請你查閱資料，了解這方面的前沿動態(tài)。的前沿動態(tài)。研究方面研究方面：克隆動物基因組重新編程的機制克隆動物基因組重新編程的機制尚不清楚，克隆技術(shù)效率低，克隆動物畸形尚不清楚，克隆技術(shù)效率低，克隆動物畸形率高、死亡率高、易出現(xiàn)早衰等問題。這些率高、死亡率高、易出現(xiàn)早衰等問題。這些問題尚在研究中。問題尚在研究中。應(yīng)用上應(yīng)用上：生產(chǎn)克隆動物費用昂貴，距大規(guī)模生產(chǎn)克隆動物費用昂

21、貴，距大規(guī)模應(yīng)用還有一定距離。應(yīng)用還有一定距離。知識拓展知識拓展1 1.動物細胞培養(yǎng)技術(shù)是如何發(fā)展起來的？動物細胞培養(yǎng)技術(shù)是如何發(fā)展起來的？ 19071907年，哈里森（年，哈里森（HarrisonHarrison）在無菌條件下用淋巴液作培養(yǎng)基，培）在無菌條件下用淋巴液作培養(yǎng)基，培養(yǎng)蛙胚神經(jīng)組織存活數(shù)周，并觀察到神經(jīng)細胞突起的生長過程，由養(yǎng)蛙胚神經(jīng)組織存活數(shù)周，并觀察到神經(jīng)細胞突起的生長過程，由此創(chuàng)建了蓋片覆蓋凹窩玻璃懸滴培養(yǎng)法，奠定了動物組織體外培養(yǎng)此創(chuàng)建了蓋片覆蓋凹窩玻璃懸滴培養(yǎng)法，奠定了動物組織體外培養(yǎng)的基礎(chǔ)。之后，又有人將懸滴培養(yǎng)法改良為雙蓋片培養(yǎng)，提高了傳的基礎(chǔ)。之后，又有人將懸滴培

22、養(yǎng)法改良為雙蓋片培養(yǎng)，提高了傳代效率并減少了污染。代效率并減少了污染。19231923年，卡雷爾（年，卡雷爾（CarrelCarrel）設(shè)計了卡氏瓶培）設(shè)計了卡氏瓶培養(yǎng)法，擴大了組織生存空間。養(yǎng)法，擴大了組織生存空間。 19511951年，年， 厄爾厄爾 （EarleEarle） 發(fā)明了發(fā)明了體外培養(yǎng)動物細胞的人工合成培養(yǎng)基。體外培養(yǎng)動物細胞的人工合成培養(yǎng)基。19511951年，波米拉（年，波米拉（PomeratPomerat）設(shè)計了灌流小室，使細胞生活在不斷更新的培養(yǎng)液中，便于作顯微設(shè)計了灌流小室，使細胞生活在不斷更新的培養(yǎng)液中，便于作顯微攝影和細胞代謝的研究。攝影和細胞代謝的研究。1957

23、1957年，格拉夫（年，格拉夫（GraffGraff）用灌流技術(shù)進）用灌流技術(shù)進一步提高了細胞懸浮培養(yǎng)的效率。一步提高了細胞懸浮培養(yǎng)的效率。19571957年，杜爾貝科（年，杜爾貝科（DulbeccoDulbecco）等人采用胰蛋白酶消化處理和應(yīng)用液體培養(yǎng)基的方法，獲得了單層等人采用胰蛋白酶消化處理和應(yīng)用液體培養(yǎng)基的方法，獲得了單層細胞培養(yǎng)。單層培養(yǎng)法的出現(xiàn)，對組織培養(yǎng)的發(fā)展起了很大的推動細胞培養(yǎng)。單層培養(yǎng)法的出現(xiàn)，對組織培養(yǎng)的發(fā)展起了很大的推動作用。此后單層培養(yǎng)成為組織培養(yǎng)普遍應(yīng)用的技術(shù)。作用。此后單層培養(yǎng)成為組織培養(yǎng)普遍應(yīng)用的技術(shù)。2020世紀世紀6060年代年代后，動物細胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)

24、開始起步，并逐步發(fā)展。后，動物細胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)開始起步，并逐步發(fā)展。2020世紀世紀8080年年代后，隨著基因工程和其他細胞工程技術(shù)的發(fā)展，細胞培養(yǎng)技術(shù)已代后，隨著基因工程和其他細胞工程技術(shù)的發(fā)展，細胞培養(yǎng)技術(shù)已成為轉(zhuǎn)基因技術(shù)、生物制藥及其他許多技術(shù)的基礎(chǔ)，在現(xiàn)代生物技成為轉(zhuǎn)基因技術(shù)、生物制藥及其他許多技術(shù)的基礎(chǔ)，在現(xiàn)代生物技術(shù)中發(fā)揮著重要的作用。術(shù)中發(fā)揮著重要的作用。知識拓展知識拓展2 2.為什么動物細胞要分散成單個細胞培養(yǎng)？用酶消化的為什么動物細胞要分散成單個細胞培養(yǎng)？用酶消化的是什么物質(zhì)？是什么物質(zhì)？ 細胞原代培養(yǎng)時可以分散成單個細胞培養(yǎng)，也可以用細胞細胞原代培養(yǎng)時可以分散成單個細胞培

25、養(yǎng)，也可以用細胞群（團）、組織塊培養(yǎng)，經(jīng)傳代培養(yǎng)后，最終都為細胞培群（團）、組織塊培養(yǎng)，經(jīng)傳代培養(yǎng)后，最終都為細胞培養(yǎng)。養(yǎng)。分散成單個細胞、細胞群（團）后容易培養(yǎng)，細胞所需的分散成單個細胞、細胞群（團）后容易培養(yǎng)，細胞所需的營養(yǎng)容易供應(yīng)，其代謝廢物容易排出；而用大塊組織培養(yǎng)營養(yǎng)容易供應(yīng)，其代謝廢物容易排出；而用大塊組織培養(yǎng)時，內(nèi)部細胞的營養(yǎng)供應(yīng)和代謝廢物的排出都較困難，因時，內(nèi)部細胞的營養(yǎng)供應(yīng)和代謝廢物的排出都較困難，因此，這些細胞在體外長時間的生存和生長就較困難。同時，此，這些細胞在體外長時間的生存和生長就較困難。同時，分散成單個細胞培養(yǎng)，可使得在細胞水平操作的其他技術(shù)分散成單個細胞培養(yǎng)，可使得在細胞水平操作的其他技術(shù)得以實現(xiàn)。得以實現(xiàn)。用酶消化的是細胞間基質(zhì)，細胞間基質(zhì)主要成分有膠原蛋用酶消化的是細胞間基質(zhì)，細胞間基質(zhì)主要成分有膠原蛋白、層粘連蛋白、纖粘連蛋白、彈性蛋白等成分。用蛋白白、層粘連蛋白、纖粘連蛋白、彈性蛋白等成分。用蛋白酶可使其消化，從而使細胞相互分離。酶可使其消化，從而使細胞相互分離。知識拓展知識拓展3 3.體細胞核移植技術(shù)為什么要選擇體細胞核移植技術(shù)為什么要選擇MM期的卵母細期的卵母細胞做受體細胞？胞做受體細胞？ 細胞核移植技術(shù)中能用作受體細胞的通常有細胞核移