丙酮酸氧化酶速率法在大批量獻血員ALT檢測中的應用

1、丙酮酸氧化酶速率法在大批量獻血員ALT檢測中的應用作者：孫金蓮 張麗作者單位：烏海市人民醫(yī)院，內(nèi)蒙古烏海 016000 【摘要】 目的：丙酮酸氧化酶速率法適用于大批量獻血員ALT的檢測。方法：利用丙酮酸氧化酶氧化丙酮酸生成過氧化氫，過氧化氫與2,4,6三溴-3-羥基苯甲酸（TBHBA）和4-氨基氨替比林（4-AAP）在過氧化物酶作用下生成紅色醌類化合物。結(jié)果：該方法線性范圍達200 U/L，與紫外酶偶聯(lián)速率法比較，相關(guān)系數(shù)r=0.991，y=1.072x1.032，n=90。結(jié)論：該方法操作簡單、快速，結(jié)果準確，靈敏度高，重復性好，特別適合血站大批量獻血員ALT檢測。 【關(guān)鍵詞】 獻血員；AL

2、T；丙酮酸氧化酶速率法目前，各級血液中心、血站常用的丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)簡稱轉(zhuǎn)氨酶檢測方法有賴氏法、速率法、酮體粉法，但由于賴氏法(60 min)反應時間較長，酮體粉法準確性差，速率法對儀器要求較高等特點，均不適用于基層血站大規(guī)模的無償獻血活動1。我站自2005年以來用丙酮酸氧化酶速率法，該方法使用基層血站必備的酶標儀即可，而且操作簡單、快速，具有較高的準確性和精密度，非常適合基層血站大批量獻血員ALT的控制。1 材料與方法1.1 儀器酶標儀（Multiskan MK3，芬蘭Labsystems公司），TDA40FA全自動生化分析儀（日本東芝公司）。1.2 試劑 ALT/GPT試劑盒（江

3、西瑞華倍肯醫(yī)學制劑有限公司，批號20050921，20060205）。1.3 質(zhì)控血清江西瑞華倍肯醫(yī)學制劑有限公司提供，經(jīng)全自動生化分析儀確認，低值血清(L)：51 U/L，高值血清(H)：103 U/L。1.4 反應原理L-丙氨酸-酮戊二酸ALT丙酮酸L-谷氨酸，丙酮酸O2P丙酮酸氧化酶H2O2乙酰磷酸，H2O24-AAPTBHBA過氧化物酶紅色醌類化合物。1.5 測定方法取96孔酶標板上，A1孔為試劑空白、B1孔為標準，C1及D1孔為質(zhì)控，A2H12孔為測定。于A1孔內(nèi)加蒸餾水20 L，于B1孔內(nèi)加標準血清20 L；C1及D1孔分別加低值及高值質(zhì)控血清20 L；A2H12孔內(nèi)分別加受檢血清

4、20 L，然后各孔加工作液200 L，混勻，置37 反應10 min時第一次比色吸光度為A1及13 min時第二次比色吸光度為A2(用雙時測量模式即二點測量模式)，主波長為492 nm，次波長為620 nm，計算各孔吸光度之差值(A2-A1)。ALT活性(U/L)=測定孔吸光度/標準孔吸光度標準血清(U/L)2 結(jié)果與討論2.1 線性取1份ALT活性200 U/L的血清，用生理鹽水稀釋為不同濃度按本法操作，結(jié)果在200 U/L內(nèi)呈線性。詳見表1。表1 ALT活力測定值（略）2.2 方法比較選擇檢測生化常規(guī)標本90份，分別用本法(y)和日本東芝TDA40FA全自動生化分析儀紫外酶偶聯(lián)速率法(x)

5、用上海久強試劑盒測定血清ALT，兩法相關(guān)系數(shù)為r=0.991，y=1.072x1.032。2.3 精密度取2份低值、高值質(zhì)控標本，批內(nèi)重復測定20次，低值標本=51 U/L，SD1.1，CV2.1 %；高值標本 103 U/L，SD2.0，CV1.94 %。批間重復，將標本存4 冰箱，每天重復測定4次，共測定20次，低值標本=51 U/L，SD1.5，CV2.9 %；高值標本103 U/L，SD2.9，CV2.8 %，顯示該方法的精密度和重復性較好。2.4 反應穩(wěn)定性上述90份標本，在37 反應10 min后，進行3 min、4 min、6 min、8 min、10 min、13 min、15

6、 min、17 min測定，發(fā)現(xiàn)3 min、4 min、6 min測得的結(jié)果基本不變，8 min以后值偏低，說明第二次顯色結(jié)束，36 min內(nèi)比色結(jié)果可靠。2.5 酶反應試劑穩(wěn)定性酶反應試劑于4 保存，可使用2周，酶活性測定結(jié)果不變。2.6 干擾因素的消除 (1)該法主波長為492 nm，次波長為620 nm，使用雙波長可有效克服溶血、脂血的干擾2。(2)該法為獲取反應10 min與13 min內(nèi)兩個時間點內(nèi)的差值，可有效抵消溶血、脂血的影響。3 結(jié)論 丙酮酸氧化酶速率法與紫外偶聯(lián)速率法有很好的相關(guān)性，且儀器要求較低，大大降低了實驗成本，非常適合血站大規(guī)模地檢測獻血員ALT?！緟⒖嘉墨I】 1 吳敏，朱薦，何亞琴.快速全血生