環(huán)維黃楊星D透皮貼劑抗心肌缺血作用的研究

1、環(huán)維黃楊星D透皮貼劑抗心肌缺血作用的研究         11-04-23 15:37:00     編輯：studa20                   作者：劉新國，周莉玲，郭麗蓉，賴炫城【摘要】  目的研究環(huán)維黃楊星D(CVB-D)透皮貼劑對實驗性新西蘭兔心肌缺血模型的影響。方法

2、通過結扎冠狀動脈左旋支制備心肌缺血動物模型，將15只新西蘭兔隨機分為3組，以模型組為對照，分別考察CVB-D貼劑組和CVB-D口服給藥組，對試驗動物心電圖、血漿乳酸脫氫酶(LDH)、肌酸激酶(CK)活性、丙二醛(MDA)含量的影響，并對缺血部位心肌壁內膜進行病理學檢查。結果模型組動物心電圖T波抬高，ST段偏移明顯，血漿LDH、CK活性和MDA含量明顯升高(P<0.01)，壞死心肌細胞表現(xiàn)為核固縮與核溶解，細胞漿崩解為細顆粒狀。貼劑給藥組和口服給藥組均能顯著抑制血漿LDH、CK活性和MDA含量升高(P<0.05)，貼劑給藥組在32 h內藥效作用較為平穩(wěn)，但與口服組比較并無統(tǒng)計學差異(

3、P>0.05)。結論CVB-D透皮貼劑對新西蘭兔心肌缺血性損傷具有保護作用。 【關鍵詞】  環(huán)維黃楊星D; 透皮貼劑; 心肌缺血; 藥效學Abstract：ObjectiveTo explore the pharmacological actions of Cyclovirobuxine D(CVB-D) transdermal patch in rabbit models with myocardial ischemia.MethodsThe animal model with myocardial ischemia was prepared by ligating the

4、left branch of cornary artery of L-branch.15 New Zealand albino rabbits were randomly divided into 3 groups: CVB-D patch group, oral CVB-D group and model group. Electrocardiogram，activities of plasma lactic dehydrogenase(LDH)，creatine kinase (CK) and the malondialdehyde content (MDA) in experimenta

5、l animals were investigated. The endomyocardial injury to myocardial ischemia was performed by pathological examination.ResultsThe results of the model group were summarized as follow: ECG T-wave elevation，significant ST segment deviation，the significant plasma LDH，CK activities and the MDA content(

6、P<0.01)，karyopyknosis and karyolysis in myocardial necrosis cells，finely granular disintegration of cytoplasm. Patch group and oral group could inhibit the inerease of plasma LDH，CK activities and MDA content(P<0.05). The pharmacodynamic effects of patch group were relatively stable within 20

7、hours，but there had no statistical significant difference between patch group and oral group(P>0.05).ConclusionCVB-D patch has protective effect against myocardial ischemia in New Zealand albino rabbit model.Key words：Cyclovirobuxine D;Transdermal patches; Myocardial ischemic;Pharmacodynatics黃楊寧系

8、從黃楊科植物中國小葉黃楊Buxus microphylla Sieb.et Zucc.var.sinica Rehd.et Wils.及其同屬植物中提取得到的生物堿，其主要有效成分環(huán)維黃楊星D(Cyclovirobuxine D，CVB-D)是中國藥典2000年版部的新增品種。多年臨床應用顯示，黃楊寧對冠心病、心絞痛、心功能不全等疾病具有良好療效。本研究將CVB-D研制成經皮給藥制劑，并應用于冠狀動脈(冠脈)結扎誘導的心肌缺血性兔模型，采用多個藥理學指標對其藥效進行了考察，以期用新的給藥途徑達到持續(xù)性預防、治療目的，同時亦為其它中藥經皮給藥系統(tǒng)的研究開發(fā)提供借鑒，促進中藥新型給藥系統(tǒng)的發(fā)展。1

9、 材料與儀器1.1 藥品與試劑CVB-D原料藥(純度98%)，南京朗澤醫(yī)藥科技有限公司出品;黃楊寧片(批號：20090303)，南京小營藥業(yè)集團有限公司。乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒(批號：20090505，20090730，20090811)，肌酸激酶(CK)試劑盒(批號：20090505，20090730，20090811)，丙二醛(MDA)試劑盒(批號：20090505，20090730，20090811)，以上試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。Eudragit 100(E 100)，德國Rhm公司。1.2 儀器AD Instrument powerlab 8/30生理機能儀，配套Cha

10、rt5 for windows data acquisition system，澳大利亞AD INSTRUMENTS公司;752型紫外光柵分光光度儀，上海分析儀器廠;TDL-5000B型低速冷凍多管離心機，上海安亭科學儀器廠;BP211D電子分析天平，德國 Sartorius 公司;東方-A型直熱式電熱恒溫干燥箱，廣州東方電熱干燥設備廠出品。1.3 動物健康成年新西蘭兔，15只，雄性，體質量(2.0±0.2)kg，由廣州中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供，合格證號：SCXK(粵)2009-0001。2 方法2.1 CVB-D透皮貼劑的制備稱取丙烯酸樹脂E100 1.5 g，交聯(lián)劑0.675

11、g，加入無水乙醇2 ml靜置過夜，使充分溶解、交聯(lián)，加入增塑劑0.675 g，透皮促滲劑0.111 g混勻。稱取CVB-D原料藥200 mg，以無水乙醇2 ml溶解，與上述壓敏膠液混合攪拌均勻后，靜置一段時間使氣泡排出，涂布于防黏紙上，置于烘箱以80固化10 min后轉移至背襯層，切割，制備成載藥量為1 mg/cm2的貼劑。2.2 心肌缺血動物模型的制備心肌缺血動物模型的制備主要有藥物注射法(如垂體后葉素、異丙腎上腺素、麥角新堿等腹腔、皮下或靜脈注射)，冠脈結扎法及電刺激法等。本研究根據(jù)經皮給藥制劑藥效學研究需要，選用冠脈結扎法制備新西蘭兔心肌缺血模型。2.2.1 手術操作將新西蘭兔隨機分成3

12、組，模型組3只動物，治療組每組6只動物，依次為CVB-D貼劑組、CVB-D口服給藥組。貼劑組胸腹部以8%硫化鋇溶液脫毛后，飼養(yǎng)6 d。實驗動物耳緣靜脈注射20%烏拉坦溶液(3 ml·kg-1)麻醉，仰位固定，標準II導聯(lián)記錄正常心電圖。分離右股動脈，實施股動脈插管，采集空白血漿。沿胸骨中線切開皮膚，暴露胸骨，沿胸骨左縫剪斷1根肋骨，用小開胸器輕輕撐開胸腔切口，可見心包及搏動心臟。提起心包膜正中，用眼科剪將心包膜前部剪開，用止血鉗將左心耳輕輕提起，用持針器持小彎針在左冠狀動脈左旋支根部穿一線，結扎之。把心臟放回胸腔，迅速縫合胸壁。貼劑組立即于脫毛皮膚給予貼劑(給藥面積100 cm2，載

13、藥量1 mg/cm2)，口服組立即以黃楊寧片混懸液(5 mg·kg-1)灌胃給藥，給藥后觀察記錄15 s，30 s，1 min，5 min，15 min，30 min，1 h，2 h的心電圖，并于0.5，1，2，3，4，6，8，10，12，16，20，24，28，32 h從股動脈采血1.5 ml置于肝素化試管中，離心(5 000 r·min-1，15 min)，定量吸取血漿0.5 ml，4保存，測定血漿中LDH和CK活性，MDA含量。2.2.2 生化指標的測定LDH活性測定是利用LDH能催化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸與2，4-二硝基苯肼反應生成丙酮酸二硝基苯腙，在堿性溶液中呈棕紅色，通過比色可求出酶活力。CK活性采用肌酸量法測定，根據(jù)生成無機磷的量可測出酶的活力。MDA含量測定是利用其可與硫代巴比妥酸(TBA)縮合，形成紅色產物，在532 nm處有最大吸收峰的特點進行。以上各項指標均使用相應試劑盒測定。2.2.3 實驗數(shù)據(jù)的處理所有實驗數(shù)據(jù)用SPSS17.