中藥化學(xué)皂苷

1、第第9 9章章 皂苷（皂苷（SaponinsSaponins）1. 掌握掌握皂苷的結(jié)構(gòu)類型和分類。皂苷的結(jié)構(gòu)類型和分類。2. 掌握掌握皂苷的理化性質(zhì)和檢識(shí)。皂苷的理化性質(zhì)和檢識(shí)。3. 熟悉熟悉皂苷的提取、分離方法。皂苷的提取、分離方法。4. 了解皂苷的結(jié)構(gòu)測(cè)定。了解皂苷的結(jié)構(gòu)測(cè)定。5. 了解皂苷的含義、分布和生理活性。了解皂苷的含義、分布和生理活性。 天然藥物化學(xué)天然藥物化學(xué) 三萜及其皂苷類三萜及其皂苷類 甾體及其皂苷類甾體及其皂苷類三萜及其皂苷類三萜及其皂苷類OleananesOleananes3029282726252423222120191817161514131211109876543

2、21H HH HH HH H甾體及其皂苷類甾體及其皂苷類 C21甾類（側(cè)鏈為羥甲基衍生物）甾類（側(cè)鏈為羥甲基衍生物） 強(qiáng)心苷類（側(cè)鏈為不飽和內(nèi)酯環(huán)）強(qiáng)心苷類（側(cè)鏈為不飽和內(nèi)酯環(huán)） 甾體皂苷類（側(cè)鏈為含氧螺雜環(huán)）甾體皂苷類（側(cè)鏈為含氧螺雜環(huán)）C CC CH H3 3O OR R5 5R R3 3R R1 1R R2 2H HO OC CC CH H3 3R R3 3R R2 2R R1 1O OH HH HO OH HR R4 4H HI IIIIIR RO OH HH HO OH HO OO O2122232420R RO OH HH HO OH HO OO O232220甲型甲型乙型乙型O

3、OO OH HH HH HH HABCDEF螺旋甾烷螺旋甾烷概述概述v定義：皂苷大多數(shù)是指螺甾烷及其生源相似的甾族化合物的低聚糖苷或三萜類化合物的低聚糖苷。具有發(fā)泡、溶血等特性。 許多中草藥如許多中草藥如人參人參、遠(yuǎn)志、桔梗、甘草、遠(yuǎn)志、桔梗、甘草、知母和知母和柴胡柴胡等的主要有效成分都含有皂等的主要有效成分都含有皂苷。苷。v組成組成 皂苷元皂苷元：甾體皂苷元（合成激素的原料）：甾體皂苷元（合成激素的原料） 三萜皂苷元（生理活性成分）三萜皂苷元（生理活性成分） 糖糖：多分子糖或糖醛酸：多分子糖或糖醛酸Dioscorea opposita 薯蕷總皂苷薯蕷總皂苷活血化瘀，行氣止痛，擴(kuò)張冠脈血管，活

4、血化瘀，行氣止痛，擴(kuò)張冠脈血管，改善改善心肌缺血心肌缺血。用于預(yù)防和治療冠心病、。用于預(yù)防和治療冠心病、心絞痛以及瘀血內(nèi)阻之胸痹、眩暈、心絞痛以及瘀血內(nèi)阻之胸痹、眩暈、氣短、心悸、胸悶或痛等癥氣短、心悸、胸悶或痛等癥 人參皂苷人參皂苷 Rg3 (Rg3 (ginsenoside Rg3) )培元固本，補(bǔ)益氣血。與化療配合用藥，培元固本，補(bǔ)益氣血。與化療配合用藥，有助于提高原發(fā)性肺癌、肝癌的療效，有助于提高原發(fā)性肺癌、肝癌的療效，可改善腫瘤患者的氣虛癥狀，可改善腫瘤患者的氣虛癥狀， 提高機(jī)體免疫功能。提高機(jī)體免疫功能。 散瘀止血，消腫定痛。散瘀止血，消腫定痛。用于外傷出血，跌撲腫痛用于外傷出血，

5、跌撲腫痛 用于腦水腫、創(chuàng)傷或手術(shù)所致腫脹，用于腦水腫、創(chuàng)傷或手術(shù)所致腫脹，也用于靜脈回流障礙性疾病也用于靜脈回流障礙性疾病 益氣固脫，養(yǎng)陰生津，生脈益氣固脫，養(yǎng)陰生津，生脈 第一節(jié)第一節(jié) 皂苷的分類皂苷的分類v甾體皂苷（中性皂苷，甾體皂苷（中性皂苷，2727個(gè)個(gè)C C）v三萜皂苷（酸性皂苷，三萜皂苷（酸性皂苷，3030個(gè)個(gè)C C） 1.1.甾體皂苷甾體皂苷（1 1）結(jié)構(gòu)特點(diǎn)）結(jié)構(gòu)特點(diǎn)母核母核：甾體（：甾體（A A、B B、C C、D D）及螺環(huán)（及螺環(huán)（E E、F F）構(gòu)象構(gòu)象：A/BA/B順或反，順或反，B/CB/C反，反，C/DC/D反反取代基取代基：- -OHOH，C C3 3-OH-O

6、H - -CHCH3 3，C C1010、C C1313 C C2020、C C22 22 C C2525 (e)(e)、(a)(a)HHH1234567891011121314151617181920212223HOOABCDEFHH24252627OF2527HOF2527H 螺旋甾烷25S, 25L, 25 F, Neo 異 螺旋甾烷(穩(wěn)定)25R, 25D, 25 F, IsoLD（2 2）結(jié)構(gòu)分類）結(jié)構(gòu)分類皂苷元：皂苷元：螺甾烷螺甾烷-3-3-OH-OH 糖：糖：分枝低聚糖、直鏈多聚糖分枝低聚糖、直鏈多聚糖皂苷元：皂苷元：螺甾烷多醇螺甾烷多醇 糖：可與其他糖：可與其他- -OHOH結(jié)

7、合、或與結(jié)合、或與2 2個(gè)以上個(gè)以上- -OHOH結(jié)合結(jié)合 皂苷元：皂苷元：變形螺甾烷變形螺甾烷 糖：變形螺甾烷與糖結(jié)合成苷糖：變形螺甾烷與糖結(jié)合成苷 OOOOOOHOCH2OHOOHOHHOCH3OOHOHHOCH3OOHOHHOCH2OHOOOOOHHOCH2OHO薯蕷皂甙知母皂甙A-IIOOHOOOHOHHOCH3沿階草皂甙DOOOOHOCH3OOHOHHOOOOOOHOHOCH3鈴藍(lán)皂甙DOOOHOHHOCH2OHHHOOOHHOOOHOHHOCH3OOO燕麥皂甙DOOOHOCH2OHOOHOHHOCH3OOHOHOCH2OHOOHOHHOCH2OHOOHOHOHHOH2CCH2O變形

8、螺甾烷變形螺甾烷2.2.三萜皂苷三萜皂苷（1 1）四環(huán)三萜皂苷四環(huán)三萜皂苷u羊毛脂甾烷型羊毛脂甾烷型u達(dá)馬烷型達(dá)馬烷型lanostane（2 2）五環(huán)三萜皂苷五環(huán)三萜皂苷u-香樹脂醇型（齊墩果烷型）香樹脂醇型（齊墩果烷型）u-香樹脂醇型（熊果烷型、烏蘇烷型）香樹脂醇型（熊果烷型、烏蘇烷型）u羽扇豆醇型羽扇豆醇型OleananesOleananes302928272625242322212019181716151413121110987654321H HH HH HH H-香樹脂醇型香樹脂醇型 齊墩果烷型齊墩果烷型從油橄欖（從油橄欖（Olea europaea）中分到）中分到齊墩果酸：齊墩果酸：

9、H HH HH HC CO OO OH HH HO OOleanolic acidOleanolic acid降酶，降濁，糾正異常蛋白代謝，降酶，降濁，糾正異常蛋白代謝，改善肝病的癥狀與體征。改善肝病的癥狀與體征。用于急性黃疸型肝炎，慢性遷延型與活動(dòng)型肝炎。用于急性黃疸型肝炎，慢性遷延型與活動(dòng)型肝炎。 從甘草（從甘草（Glycyrrhiza uralensis）中分離）中分離得到的得到的 甘草次酸甘草次酸H HH HC CO OO OH HH HH HO OO OGlycyrrhetinic acidGlycyrrhetinic acid - -香樹脂醇型香樹脂醇型 熊果烷型、烏蘇烷型熊果烷型

10、、烏蘇烷型H HH HH HH H123456789101112131415161718192021222324252627282930UrsanesUrsanes從女貞子葉中從女貞子葉中 分離分離得到的得到的 熊果酸熊果酸 ：H HH HH HC CO OO OH HH HO OUrsonic acidUrsonic acid從積雪草（從積雪草（Centella asiatica）中）中分離到的分離到的 積雪草酸積雪草酸H HO OH H2 2C CH HH HH HC CO OO OH HH HO OH HO OAsiatic acidAsiatic acid羽扇豆醇（烷）型羽扇豆醇（烷）

11、型L Lu up pa an ne es s3029282726252423222120191871H HH HH HH H從白頭翁（從白頭翁（Pulsatilla chinensis）中分離得到的中分離得到的 23羥基白樺酸：羥基白樺酸：3029222120C CH H2 2O OH HH HH HH HH HC CO OO OH HH HH HO O2 23 3- -H Hy yd dr ro ox xy yb be et tu ul li in ni ic c a ac ci id dHHH4581012141718202324252627283029a-amyraneHHH458101

12、2141718202324252627282930-amyraneHHH45810121417182023242526272829lupane19302122（3 3）其他分類其他分類單皂苷（中性皂苷、酯皂苷、酸性皂單皂苷（中性皂苷、酯皂苷、酸性皂苷）苷）雙皂苷雙皂苷第二節(jié) 皂苷的性質(zhì)v物理性質(zhì)物理性質(zhì)v化學(xué)性質(zhì)（水解反應(yīng)）化學(xué)性質(zhì)（水解反應(yīng)）1.物理性質(zhì)（1）性狀u多數(shù)為無色或乳白色無定形粉末，少數(shù)為晶體；u多數(shù)有苦、辛辣味，對(duì)粘膜有刺激性；有吸濕性。（2）溶解度u原生皂苷：易溶水、熱醇、含水丁醇，難溶丙酮、乙醚；u次生皂苷：易溶醇、丙酮、乙酸乙酯，在水中溶解度降低；u皂苷元：易溶醚、苯、氯

13、仿等低極性溶劑，不溶于水。u皂苷有助溶性能，可促進(jìn)其他成分在水中的溶解。（3）發(fā)泡性 皂苷能降低水溶液的表面張力，振搖后產(chǎn)生持久性泡沫。1g中藥粉末10ml水,煮沸10min,過濾濾液振搖持久性泡沫2支試管0.1M HCl 5ml, 3d中藥水提液, 振搖1min0.1M NaOH 5ml, 3d中藥水提液, 振搖1min甾體皂甙: 堿液管的泡沫比酸液管持久時(shí)間長(zhǎng)幾倍三萜皂甙: 兩管形成泡沫持久相同（4 4）溶血性）溶血性u(píng)皂苷有使紅細(xì)胞破裂的作用，用溶血指數(shù)表示。皂苷有使紅細(xì)胞破裂的作用，用溶血指數(shù)表示。u溶血指數(shù)：對(duì)同一動(dòng)物來源的紅細(xì)胞稀懸浮液，溶血指數(shù)：對(duì)同一動(dòng)物來源的紅細(xì)胞稀懸浮液，在

14、同一條件下造成完全溶血的最低濃度。如薯在同一條件下造成完全溶血的最低濃度。如薯蕷皂苷蕷皂苷1:4000001:400000（毒性大）（毒性大）u溶血作用與分子結(jié)構(gòu)的關(guān)系：溶血作用與分子結(jié)構(gòu)的關(guān)系： 皂苷元決定有無溶血作用；糖決定溶血作用的皂苷元決定有無溶血作用；糖決定溶血作用的強(qiáng)弱。強(qiáng)弱。 單糖鏈皂苷較顯著，酸性皂苷中等，中性三萜單糖鏈皂苷較顯著，酸性皂苷中等，中性三萜皂苷最弱。皂苷最弱。u皂苷消化道不吸收，口服無毒，皂苷消化道不吸收，口服無毒，膽甾醇能解皂膽甾醇能解皂毒毒。（5 5）熔點(diǎn)）熔點(diǎn) 皂苷無明顯熔點(diǎn)皂苷無明顯熔點(diǎn)( (dec.)dec.)；苷元熔點(diǎn)隨苷元熔點(diǎn)隨羥基數(shù)目增加而升高羥基

15、數(shù)目增加而升高( (單單OH208OH240OH240)；甾體皂苷鑒定時(shí)不能單靠熔點(diǎn)甾體皂苷鑒定時(shí)不能單靠熔點(diǎn)（混熔點(diǎn)不降）。（混熔點(diǎn)不降）。（6 6）旋光度）旋光度 甾體皂苷及苷元均為左旋，且與雙鍵甾體皂苷及苷元均為左旋，且與雙鍵有關(guān)。未飽和的苷元或乙?；锞^相應(yīng)有關(guān)。未飽和的苷元或乙?；锞^相應(yīng)的飽和物為負(fù)（左旋）。的飽和物為負(fù)（左旋）。 2.2.化學(xué)性質(zhì)化學(xué)性質(zhì)（1 1）劇烈酸水解（全水解）劇烈酸水解（全水解）： 變形苷元糖變形苷元糖（2 2）溫和酸水解（部分水解）、堿水解溫和酸水解（部分水解）、堿水解： 次皂苷次皂苷（3 3）SmithSmith氧化降解、酶解氧化降解、酶解： 皂苷

16、元皂苷元HR1OHOR2OHHOHOHOHHOHOOH+2-4 MA型人參皂苷(20S)原人參二醇(20R)人參二醇50% HAcHR1OHOHO20(R)-次皂苷第三節(jié)第三節(jié) 提取分離提取分離v皂苷的提取皂苷的提取v皂苷元的提取皂苷元的提取v皂苷的分離皂苷的分離1.1.皂苷的提取皂苷的提?。?）正丁醇提取法（2）甲醇或乙醇提取-丙酮或乙醚沉淀法（3）堿水提取法（1 1）正丁醇提取法）正丁醇提取法 HOR2OR1OOR3人參根甲醇冷浸水層用水飽和的正丁醇提取 乙醚層(親脂性雜質(zhì))浸膏正丁醇層減壓蒸干 水層(糖類等)人參總皂甙甲醇液回收甲醇加水用乙醚脫脂（2 2）甲醇或乙醇提取）甲醇或乙醇提取-

17、 -丙酮或乙醚沉淀法丙酮或乙醚沉淀法 R1OHOCOOHCH2OHCOOR2遠(yuǎn)志粉石油醚脫脂濃縮后加入丙酮,過濾濾液 沉淀(遠(yuǎn)志總皂甙)脫脂遠(yuǎn)志粉95%乙醇回流提取提取液（3 3）堿水提取法）堿水提取法 槲寄生葉粉乙醚浸泡溶解物(酸性物質(zhì))濃縮,脫色后加HCl,過濾 不溶物(中性物質(zhì))浸膏沉淀石油醚脫脂精制濾液土當(dāng)歸酸乙醚液回收乙醚1%KOH溶液R1OCOOH 2.2. 皂苷元的提取皂苷元的提?。ㄋ崴猓ㄋ崴? -有機(jī)溶劑提取）有機(jī)溶劑提?。?中藥甲醇冷浸水解液有機(jī)溶劑提取浸膏有機(jī)溶劑提取液回收溶劑甾體皂甙元甲醇液回收甲醇加酸,加熱,過濾3.3.皂苷的分離皂苷的分離（1 1）分段沉淀法）分段

18、沉淀法（2 2）鉛鹽沉淀法）鉛鹽沉淀法（3 3）膽甾醇沉淀法）膽甾醇沉淀法（4 4）吉拉爾試劑法）吉拉爾試劑法（5 5）色譜法）色譜法（1 1）分段沉淀法）分段沉淀法原理：利用皂苷難溶于乙醚、丙酮等溶劑的性質(zhì)。原理：利用皂苷難溶于乙醚、丙酮等溶劑的性質(zhì)。 混合皂甙甲醇溶解,加入乙醚,放置30min,過濾濾液 沉淀(洋地黃皂甙)加乙醚,長(zhǎng)時(shí)間放置,過濾濾液 沉淀(吉托皂甙)（2 2）鉛鹽沉淀法）鉛鹽沉淀法（分離中性皂苷與酸性皂苷） 粗皂甙用少量乙醇溶解,加入過量飽和中性醋酸鉛,攪拌,過濾濾液 沉淀(酸性皂甙)加入飽和堿式醋酸鉛,過濾濾液 沉淀(中性皂甙)懸浮于乙醇,脫鉛,過濾懸浮于乙醇,脫鉛濾液

19、減壓濃縮加入乙醚,過濾濃縮液 沉淀(酸性皂甙)濾液減壓濃縮加入乙醚,過濾濃縮液 沉淀(中性皂甙)中性醋酸鉛沉淀酸性皂苷中性醋酸鉛沉淀酸性皂苷堿性醋酸鉛沉淀中性皂苷堿性醋酸鉛沉淀中性皂苷（3 3）膽甾醇沉淀法膽甾醇沉淀法原理：甾體皂苷與膽甾醇生成難溶性分子復(fù)合物。甾體皂苷與膽甾醇生成難溶性分子復(fù)合物。特點(diǎn)：w 可用于皂苷的分離精制；甾體化合物中C3-OH差向異構(gòu)體的分離；A/B環(huán)順反異構(gòu)的分離；C3-OH構(gòu)型的判斷。w 有些皂苷可與其共存的甾醇形成難溶的復(fù)合物，而不能被醇提出。 w 具有3-OH，A/B反式或5的平展結(jié)構(gòu)的皂苷可形成；3-OH，或3-OH酯化或成苷，不能形成；其中三萜皂苷形成的復(fù)

20、合物不如甾體皂苷穩(wěn)定。粗皂甙用少量乙醇溶解,加入膽甾醇的飽和乙醇溶液,過濾濾液 沉淀殘留物(皂甙)用水,乙醇,乙醚依次洗滌(除雜),干燥后用乙醚連續(xù)回流提取 乙醚層(膽甾醇)（4 4）吉拉爾（吉拉爾（GirardGirard）試劑法試劑法原理：原理：含羰基的甾體皂苷元含羰基的甾體皂苷元與與Girard試劑試劑 生成溶于水的腙生成溶于水的腙。Girard試劑：季銨鹽型氨基乙酰肼類試劑。試劑：季銨鹽型氨基乙酰肼類試劑。 Girard T：NH2NHCOCH2N+(CH3)3Cl- Girard P：NH2NHCOCH2- Cl-N +含羰基皂甙元加鹽酸,加熱粗皂甙用少量乙醇溶解,加入Girard試

21、劑的乙醇溶液,再加乙酸使達(dá)10%的濃度,放置反應(yīng)產(chǎn)物水層(腙)用水稀釋,用醚萃取 乙醚層(非羰基皂甙元)C=NNHR（4 4）色譜法）色譜法u吸附色譜法：吸附色譜法：極性小的皂苷或皂苷元的分離。極性小的皂苷或皂苷元的分離。 吸附劑：硅膠吸附劑：硅膠 洗脫劑：洗脫劑：2%2%氯仿苯，單羥基皂苷元氯仿苯，單羥基皂苷元 20% 20%氯仿苯，單羥基酮基的皂苷元氯仿苯，單羥基酮基的皂苷元 10% 10%甲醇苯，雙羥基皂苷元甲醇苯，雙羥基皂苷元u分配色譜法：分配色譜法：極性較大的皂苷的分離。極性較大的皂苷的分離。 固定相：固定相：3%3%草酸水溶液草酸水溶液 流動(dòng)相：氯仿流動(dòng)相：氯仿- -甲醇甲醇- -

22、水（水（26:14:3726:14:37） u高效液相色譜法：高效液相色譜法：制備分離皂苷。制備分離皂苷。 反相色譜：流動(dòng)相為乙腈反相色譜：流動(dòng)相為乙腈- -水水 正相色譜：皂苷衍生化，如苯甲酰衍生物正相色譜：皂苷衍生化，如苯甲酰衍生物 流動(dòng)相為正己烷流動(dòng)相為正己烷- -氯仿氯仿- -乙腈（乙腈（15:3:215:3:2）u液滴逆流色譜法：液滴逆流色譜法：分離結(jié)構(gòu)相近的皂苷。分離結(jié)構(gòu)相近的皂苷。 溶劑系統(tǒng)：氯仿溶劑系統(tǒng)：氯仿- -甲醇甲醇- -正丁醇正丁醇- -水（水（45:60:6:4045:60:6:40） 下層：固定相；上層：流動(dòng)相下層：固定相；上層：流動(dòng)相u大孔樹脂法：大孔樹脂法：極性

23、較大的甾體皂苷的分離。極性較大的甾體皂苷的分離。 洗脫劑：水洗脫劑：水( (糖糖) )；甲醇；甲醇( (粗苷粗苷) )第四節(jié) 皂苷的檢識(shí)v初步檢查初步檢查v化學(xué)檢識(shí)化學(xué)檢識(shí)v色譜檢識(shí)色譜檢識(shí)1.1.初步檢查初步檢查u糖的檢查糖的檢查 FehlingFehling試劑試劑( (水解液水解液) )、MolishMolish試驗(yàn)、紙層析試驗(yàn)、紙層析( (水解液水解液u溶血試驗(yàn)溶血試驗(yàn) 皂苷水溶液皂苷水溶液+ +等滲等滲NaCl+NaCl+紅細(xì)胞懸浮液（等滲紅細(xì)胞懸浮液（等滲NaClNaCl對(duì)照）對(duì)照）u泡沫實(shí)驗(yàn)泡沫實(shí)驗(yàn) 甾體皂苷：堿管比酸管持久時(shí)間長(zhǎng)幾倍甾體皂苷：堿管比酸管持久時(shí)間長(zhǎng)幾倍 三萜皂苷：

24、酸堿管形成泡沫持久相同三萜皂苷：酸堿管形成泡沫持久相同u鉛鹽沉淀鉛鹽沉淀 中性乙酸鉛：酸性三萜皂苷中性乙酸鉛：酸性三萜皂苷 堿式乙酸鉛：中性甾體皂苷堿式乙酸鉛：中性甾體皂苷2.2.化學(xué)檢識(shí)化學(xué)檢識(shí)uLibermann-BurchardLibermann-Burchard反應(yīng)反應(yīng) 試劑：試劑：s/CHCls/CHCl3 3，濃硫酸濃硫酸- -乙酐乙酐 現(xiàn)象：黃現(xiàn)象：黃- -紅紅- -藍(lán)藍(lán)- -紫紫- -綠綠- -褪色褪色 三萜皂苷：紅三萜皂苷：紅- -紫色；紫色；甾體皂苷：藍(lán)綠色甾體皂苷：藍(lán)綠色u三氯乙酸三氯乙酸反應(yīng)反應(yīng) 試劑：試劑：s/CHCls/CHCl3 3，點(diǎn)樣點(diǎn)樣( (PC)PC)，三

25、氯乙酸試液三氯乙酸試液 現(xiàn)象：現(xiàn)象：紅紅- -紫色紫色 甾體皂苷：加熱甾體皂苷：加熱6060；三萜皂苷：加熱三萜皂苷：加熱100100uSalkowskiSalkowski反應(yīng)反應(yīng) 試劑：試劑：s/CHCls/CHCl3 3，濃硫酸。濃硫酸。 現(xiàn)象：氯仿層顯血紅或青色，硫酸層顯綠現(xiàn)象：氯仿層顯血紅或青色，硫酸層顯綠色熒光色熒光u五氯化銻五氯化銻反應(yīng)反應(yīng) 試劑：試劑：s/CHCls/CHCl3 3，點(diǎn)樣點(diǎn)樣( (PC)PC)，五氯化銻試劑五氯化銻試劑 現(xiàn)象：紫藍(lán)色現(xiàn)象：紫藍(lán)色u芳香醛芳香醛- -硫酸或高氯酸硫酸或高氯酸反應(yīng)反應(yīng)( (PC)PC)Legal反應(yīng)反應(yīng)三氯乙酸反應(yīng)三氯乙酸反應(yīng)三氯乙酸反應(yīng)三氯乙酸反應(yīng)第五節(jié)第五節(jié) 結(jié)構(gòu)研究結(jié)構(gòu)研究vUVUVvIRIRvMSMSvNMRNMR1H-NMR第六節(jié)第六節(jié) 含皂苷的中藥實(shí)例含皂苷的中藥實(shí)例v人參人參v甘草甘草v柴胡柴胡v桔梗桔梗1.1.人參人參 從人參及其地上部分共分得從人參及其地上部分共分得4040多個(gè)人參皂多個(gè)人參皂苷，按硅膠薄層色譜苷，按硅膠薄層色譜RfRf值的大小順序，由小