急性白血病患者外周血T淋巴細胞亞群和NK細胞水平檢測及臨床意義

1、急性白血病患者外周血T淋巴細胞亞群和NK細胞水平檢測及臨床意義           作者：吳朝陽, 吳雅榮, 王法春, 陳巧云, 季勇慧 錢震 楊小飛 盛曉靜 張永寧, 錢軍 【摘要】  目的： 研究急性白血病患者外周血T淋巴細胞亞群、NK細胞水平變化及臨床意義。方法： 采用流式細胞儀對32例急性白血病患者 (急性髓細胞性白血病23例、急性淋巴細胞性白血病9例)及18例正常人外周血T淋巴細胞亞群及NK細胞水平進行檢測。結果： 初治急性白血病組與正常對照組比較，CD3+細胞、CD4+細胞

2、、CD4+/CD8+比值及NK細胞下降（P<0.05），CD8+細胞略升高（P>0.05）?；熀?2例取得完全緩解，再次檢測上述指標接近正常對照組（P>0.05）。初診急性淋巴細胞性白血病組CD4+細胞及CD4+/CD8+比值低于初診急性髓細胞性白血病組（P<0.05）。結論： 急性白血病患者細胞免疫功能明顯異常。與急性髓細胞性白血病相比，急性淋巴細胞性白血病細胞免疫功能更為低下。T細胞亞群及NK細胞水平檢測在評價急性白血病療效及判斷預后方面具有一定的臨床價值。 【關鍵詞】  急性白血病； T細胞亞群； NK細胞     Abs

3、tract  Objective: To study the changes of T lymphocyte subsets，NK cells in peripheral blood of patients with acute leukemia and its clinical significance.Methods： The different level of peripheral blood T lymphocyte subsets, NK cells of 32 acute leukemia patients and 18 normal controls were det

4、ected with flow cytometry. Results： Compared with the normal controls, the number of CD3+ T cell, CD4+T cell, NK cell and CD4+/CD8+ ratio reduced in newly diagnosed acute leukemia group(P<0.05), while those of CD8+ T cell slightly increased(P>0.05).Twelve of 32 patients achieved complete remis

5、sion after chemotherapy.Their level of T lymphocyte subsets，NK cells near those of normal controls（P>0.05）.The number of CD3+ T cell and CD4+/CD8+ ratio in newly diagnosed acute lymphoblastic leukemia group were lower than those in newly diagnosed acute myelogenous leukemia group(P<0.05). Conc

6、lusion： Cellular immune function is significantly abnormal in patients with acute leukemia.Compared with acute myelogenous leukemia, patients with acute lymphoblastic leukemia had more poor cellular immune function.Detection of T lymphocyte subsets，NK cells are clinically value on evaluation of ther

7、apeutic effect and prognosis of acute leukemia.        Key words  acute leukemia; T lymphocyte subsets; NK cell     急性白血病（acute leukemia,AL）是造血干細胞的惡性克隆性疾病，其發(fā)生及發(fā)展與機體免疫紊亂有著密切的關系。在抗腫瘤免疫效應中,細胞免疫比體液免疫起著更為重要的作用。T淋巴細胞和NK細胞執(zhí)行細胞免疫功能，是機體抗腫瘤免疫的重要活性細胞。本文采用流

8、式細胞術（flowcytometry,FCM）檢測急性白血病患者及健康人群外周血T淋巴細胞亞群和NK細胞的水平，并探討其臨床意義。     1  材料和方法     1.1  材  料     32例急性白血病（AL）外周血標本均來自我院住院患者。其中男14例，女18例，年齡1572歲,中位年齡41歲；急性髓細胞性白血病(acute myelogenous leukemia,AML)23例，急性淋巴細胞性白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL

9、)9例。初診患者分別于化療前、完全緩解后采集外周靜脈血2 ml，枸櫞酸鈉抗凝。18例正常對照外周血標本采自健康體檢者。     1.2  方  法     取100 l上述抗凝血分別加入4個試管中，每管加入抗CD45?PerCP 10 l。各管再依次加入抗CD3-FITC+CD19-PE、抗CD3-FITC+CD4-PE、抗CD3-FITC+CD8-PE、抗CD3-FITC+CD16CD56-PE各10 l，避光室溫充分結合20 min后，每管加入溶血素2 m1,避光放置至透明后1 000 r/min 離心5 mi

10、n，棄去上清液體，加入2 m1 PBS在混合器上使試管底部的細胞與PBS溶液混勻，1 000 r/min離心5 min，最后加入0.4 ml PBS溶液混勻直接上流式細胞儀（美國BD公司）檢測。     1.3   統(tǒng)計學處理     應用SPSS12.0處理數(shù)據，結果以±s表示，用t檢驗方法比較各組間差異。     2  結  果     32例急性白血病患者T淋巴細胞亞群及NK細胞的水平變化見表1。由表1可見: 與緩解AL

11、組相比較，初診AL組外周血CD3+細胞、CD4+細胞、CD16+CD56+細胞及CD4+/CD8+比值降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；CD8+細胞略升高，但無顯著差異(P>0.05)。初診AL組與對照組相比較有類似的結果。而緩解AL組外周血CD3+細胞，CD4+細胞,CD8+細胞、CD4+/CD8+比值及CD16+CD56+細胞與對照組相比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。初治ALL組與AML組相比較，ALL組CD4+細胞及CD4+/CD8+比值低于AML組，兩者間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。兩組CD3+細胞，CD8+及CD16+CD56+細胞間差異無統(tǒng)

12、計學意義 (P>0.05)。表1  急性白血病患者及正常對照組外周血T細胞亞群及NK細胞水平        3  討  論     機體的細胞免疫異?？墒鼓[瘤細胞逃避宿主的免疫監(jiān)視，最終發(fā)生腫瘤。CD4+T細胞、CD8+T細胞和NK細胞在體內抗腫瘤免疫中具有重要的作用。     CD4+細胞能輔助T細胞、B細胞活化，后兩者活化釋放的大量細胞因子能促進CD8+T細胞及吞噬細胞的活性，并影響B(tài)細胞抗體的產生，從多方面調節(jié)和增強抗腫瘤效

13、應。CD8+細胞常在免疫應答后期增多，除可對靶細胞產生細胞介導的細胞毒作用（ADCC）外，還能識別可溶性抗原，分泌抑制因子，減弱或抑制免疫應答，對CD4+細胞有調節(jié)性抑制作用。CD4+/CD8+比例平衡是維持免疫內環(huán)境穩(wěn)定的一個中心環(huán)節(jié)，是機體免疫網絡調控的重要樞紐，反映了機體免疫反應的調節(jié)能力1。這種免疫平衡紊亂時，可引起繼發(fā)性免疫缺陷。本組資料分析了32例不同類型急性白血病患者的T淋巴細胞亞群，發(fā)現(xiàn)初治AL患者CD3+、CD4+細胞以及CD4+ /CD8+比值明顯降低。其他惡性血液病如非霍奇金氏淋巴瘤中有類似的變化2，3，在兒童急性白血病中也有類似報道4，5。這些提示白血病患者輔助性T細胞

14、數(shù)量或功能低下，機體識別和殺傷白血病細胞的能力下降，與白血病的發(fā)生發(fā)展有一定的關系。本組資料還提示，化療后緩解的患者，T淋巴細胞各亞群抗原表達接近正常，細胞免疫功能得到一定程度恢復。通過分析我們還發(fā)現(xiàn)，與AML比較，ALL患者CD4+細胞、CD4+/CD8+比值降低程度更顯著，提示原發(fā)于淋巴系統(tǒng)腫瘤的細胞免疫功能更低下。     CD16+CD56+是自然殺傷細胞（NK細胞）的標志物，表達的量可能與NK細胞的數(shù)量或功能有關。NK是重要的天然免疫細胞, 起源于CD34+造血細胞，在骨髓微環(huán)境內發(fā)育，形成具有免疫活性的成熟型細胞。它不需預先致敏,無MHC限制性,即可自

15、發(fā)地殺傷MHC?1類分子缺陷或低表達的腫瘤細胞, 具有廣譜的抗腫瘤、抗感染、免疫調節(jié)等作用，在機體免疫監(jiān)視過程中發(fā)揮重要功能。分析本組資料發(fā)現(xiàn)AL患者化療前CD16+CD56+細胞明顯降低，與樓瑾6等的研究結果相似，而化療后完全緩解者CD16+CD56+細胞又恢復到正常水平，進一步說明初發(fā)急性白血病NK細胞免疫功能明顯受損。     由于初治AL與緩解AL的T淋巴細胞亞群及NK細胞的水平有明顯差異，檢測T淋巴細胞亞群和NK細胞水平在評價AL療效及判斷預后方面具有一定的臨床價值。其臨床意義還有待積累更多病例進行深入研究。     【參考文獻】      1 Yasutomo K. The cellular and molecular mechanism of CD4/CD8 lineage commitmentJ. J Med Invest, 2002，49(1/2):1-6.2 趙成艷，馬 榮，王忠利，等. 非霍奇金淋巴瘤患者T細胞亞群、NK細胞檢測的臨床意義J.中國免疫學雜志，2006,22(2):180-185.3 莊萬傳，李秀梅，韓秀華. 惡性血液病患者化療前后淋巴細胞亞群測定及其意義J. 白血病?淋巴瘤，2006，15（6）