雙向電泳所需試劑配方及器材清單

1、附 錄 溶液配制1. 100 mmol/L PMSF母液PMSF 0.087g異丙醇5ml 使用前配制，4保存。2. 10%（w/v）TCA/丙酮提取液TCA10 g丙酮 100 mlPMSF1mmol/L1ml母液（用前現(xiàn)加）DDT0.1%（w/v）0.1g（用前現(xiàn)加）TCA和丙酮使用前配制，棕色瓶中-20預(yù)冷至少2h。3. 80%丙酮洗液丙酮80mlddH2020mlPMSF1mmol/L1ml母液（用前現(xiàn)加）DDT0.1%（w/v）0.1g（用前現(xiàn)加）丙酮和ddH20使用前配制，棕色瓶中-20預(yù)冷至少2h。4.水化液尿素7mol/L硫脲2mol/LCHAPS4%（w/v）DDT65mmo

2、l/L （用前現(xiàn)加）Biolyte (pH3-10 0.3%（v/v）（用前現(xiàn)加）用容量瓶定容后分裝后在-20保存，用前室溫溶解。5.蛋白濃度測定（1）1mg/ml BSA配制在1ml水化液中加入0.01gBSA為10x濃縮液，再將其稀釋10倍。（2）考馬斯亮藍(lán)G-250溶液100mg G-250溶于50ml 95%乙醇，再加入120ml 85%磷酸，于容量瓶中定容至1L。室溫保存，用前過濾。（3）標(biāo)準(zhǔn)曲線建立按下表中數(shù)值配制建立標(biāo)準(zhǔn)曲線所需的各個(gè)溶液對照123456BSA水化液（l）01020406080100水化液（l）10090806040200BSA濃度（g/l）00.10.20.40

3、.60.81G-250染液（ml）55555556. 1%溴酚藍(lán)母液溴酚藍(lán) 1%Tris50mmol/L用容量瓶定容后在4保存。7. SDS-PAGE 12%分離膠的配制試劑（reagent）體積（volume）30%（w/v）丙烯酰胺（acrylamide）和0.8%（w/v）甲叉雙丙烯酰胺（bisacrylamide）66.7ml1.5 mol/L Tris-HCl,pH8.840.0mL去離子水（ddH2O）50.1mL10%十二烷基磺酸鈉（SDS）1.6mL四甲基乙二胺（TEMED）35.0µL10%過硫酸氨（APS）1.6mL共計(jì)(Total160.0mL8. 12.5%

4、丙烯酰胺凝膠配制ddH2062.7ml30% 丙烯酰胺83.3ml1.5M Tris- HCl pH8.850ml10% SDS2ml10% APS2mlTEMED35.6l共計(jì) 200ml其中APS在加入前配制成溶液后再加入到全部溶液中。9. 膠條平衡母液尿素6M1.5M Tris- HCl pH8.850mmol/L甘油30%（v/v）SDS2%（w/v）1%溴酚藍(lán)母液0.002%（w/v）用容量瓶定容后分裝后在-20保存，用前室溫溶解。使用時(shí)溶液配制第一次平衡液5ml母液+0.05g DDT（65mmol/L）第二次平衡液5ml母液+0.125g IAA（135mmol/L）10. 電泳

5、緩沖液甘氨酸192mmol/LSDS0.10%Tris25mmol/L 11. 1%低熔點(diǎn)瓊脂糖封膠液電泳緩沖液 50ml低熔點(diǎn)瓊脂糖0.25g1%溴酚藍(lán)母液100l用容量瓶定容后在4保存。12. 膠體考染液(1固定液 （40% 甲醇和 10% 乙酸） 乙醇400 ml乙酸100mlddH2O500ml(2染色液（0.12% G-250、 10%(NH42SO4、10% H3PO4和20%甲醇）ddH2O200mlH3PO4 100ml(NH42SO4 100g（充分?jǐn)嚢枞芙猓〨-250 1.2g攪拌30minddH2O 800ml（定容）甲醇200ml(3脫色液（5%(NH42SO4和10%

6、 甲醇）ddH2O800ml(NH42SO450g（充分?jǐn)嚢枞芙猓〨-250 1.2gddH2O定容至900ml甲醇100ml注意配制的溶液中均使用ddH2O附 錄 器材1. 葉片蛋白提取所需器材研缽、離心管（0.5ml、1.5ml、2ml、10ml、50ml）、量筒（50ml、100ml、1000ml）、磁力攪拌器、磁力珠、移液槍（10、200、1000微升）、槍頭（10、200、1000微升）、超速低溫離心機(jī)（滿足最高轉(zhuǎn)速12000rpm）、干燥箱、培養(yǎng)皿（直徑9cm）、稱量紙（一次性油性紙）、分光光度計(jì)（滿足595nm）、2. 雙向電泳所需器材IPG固相膠條（ph4-7L，17cm）、水化盤（滿足17cm膠條）、鑷子（BIO-RAD專配平口鑷子）、聚焦盤（17cm）、鹽橋、籃板（用于放1.5或2.0ml試管）、礦物油、圓形濾紙（直徑19cm