實驗室常用緩沖液及其配制方法

1、實驗室常用緩沖液及其配制方法1、1M Tris-HCl    （pH7.4，7.6，8.0）     組份濃度 1 M Tris-HCl 配制量 1L 配置方法 1. 稱量121.1gTris置于1L燒杯中。               2. 加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?#160;    &#

2、160;        3. 按下表量加入濃鹽酸調(diào)節(jié)所需要的pH值。         濃HCl pH值                            &

3、#160;                                 7.4                

4、60;        約70mL                                          &#

5、160;              7.6                         約60mL           

6、60;                                             8.0     

7、;                    約42mL              4. 將溶解定容至1L。              5. 高溫高壓滅菌

8、后，室溫保存。                           注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值，因為Tris溶液的pH值隨溫度的變化差很大，溫度每升高1，溶液的pH值大約降低0.03個單位。2、1.5 M Tris-HCl   （pH8.8）  組份濃度 1.5 M Tris-

9、HCl 配制量 1L 配置方法 1.稱取181.7gTris置于1L燒杯中。              2. 加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?             3. 用濃鹽酸調(diào)pH值至8.8。          

10、;    4. 將溶液定容至1L。              5. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。 注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值，因為Tris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大，溫度每升高1，溶液的pH值大約降低0.03個單位。3、10×TE Buffer   （pH 7.4，7.6，8.0）  組份濃度 100 mM Tris-HCl，10 mM ED

11、TA 配制量 1L 配置方法 1. 量取下列溶液，置于1L燒杯中。             1 M Tris-HCl Buffer（pH7.4，7.6，8.0） 100mL              500 mM EDTA（pH8.0） 20mL         

12、60;   2. 向燒杯中加入約800mL的去離子水，均勻混合。             3. 將溶液定至1L后，高溫高壓滅菌。             4. 室溫保存。 4、3 M 醋酸鈉   （pH5.2） 組份濃度 3 M 醋酸鈉 配制量 100mL 配置方法 1

13、. 稱取40.8gNaOAc3H2O置于100200mL燒杯中，加入約40mL的去離子水?dāng)嚢枞芙狻?             2. 加入冰乙酸調(diào)節(jié)pH值至5.2。              3. 加入去離子水將溶液定容至100mL。          

14、;    4. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。 5、PBS Buffer       組份濃度 137 mM NaCl，2.7mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mM KH2PO4  配制量 1L 配置方法 1. 稱量下列試劑，置于1L燒杯中。                   &

15、#160;                                   NaCl              &#

16、160;       8 g                                           

17、60;           KCl                      0.2g                  

18、;                                     Na2HPO4          1.42 g   &

19、#160;                                                 &

20、#160;KH2PO4             0.27g        2. 向燒杯中加入約800 mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?      3. 滴加HCl將pH值調(diào)節(jié)至7.4，然后加入去離子水將溶液定容至1L。        4. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。 注意：上述PBS Buffer中無二價陽離

21、子，如需要，可在配方中補(bǔ)充1mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。6、10 M醋酸銨         組份濃度 10 M醋酸銨 配制量 100mL 配置方法 1. 稱量77.1g醋酸銨置于100200 mL燒杯中，加入約30 mL的去離子水?dāng)嚢枞芙狻?             2.加去離子水將溶液定容至100mL。     

22、0;        3.使用0.22m濾膜過濾除菌。              4.密封瓶口于室溫保存。 注意：醋酸銨受熱易分解，所以不能高溫高壓滅菌。 7、Tris- HCl平衡苯酚   配置方法 1. 使用原料：大多數(shù)市售液化苯酚是清亮無色的，無需重蒸餾便可用于分子生物學(xué)實驗。但有些液化苯酚呈粉紅色或黃色，應(yīng)避免使用。同時也應(yīng)避免使用結(jié)晶苯酚，

23、結(jié)晶苯酚必須在160對其進(jìn)行重蒸餾除去諸如醌等氧化產(chǎn)物，這些氧化產(chǎn)物可引起磷酸二酯鍵的斷裂或?qū)е翿NA和DNA的交聯(lián)等。因此，苯酚的質(zhì)量對DNA、RNA的提取極為重要，我們推薦使用高質(zhì)量的苯酚進(jìn)行分子生物學(xué)實驗。  2. 操作注意：苯酚腐蝕性極強(qiáng)，并可引起嚴(yán)重灼傷，操作時應(yīng)戴手套及防護(hù)鏡等。所有操作均應(yīng)在通風(fēng)櫥中進(jìn)行，與苯酚接觸過的皮膚部位應(yīng)用大量水清洗，并用肥皂和水洗滌，忌用乙醇。 3. 苯酚平衡：因為在酸性pH條件下DNA分配于有機(jī)相，因此使用苯酚前必須對苯酚進(jìn)行平衡使其pH值達(dá)到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：    

24、0;      液化苯酚應(yīng)貯存于-20，此時的苯酚呈現(xiàn)結(jié)晶狀態(tài)。從冰柜中取出的苯酚首先在室溫下放置使其達(dá)到室溫，然后在68水浴中使苯酚充分溶解。           加入羥基喹啉（8-Quinolinol）至終濃度0.1。該化合物是一種還原劑、RNA酶的不完全抑制劑及金屬離子的弱螯合劑，同時因其呈黃色。有助于方便識別有機(jī)相。           加入等體積的1M Tr

25、is-HCl（pH8.0），使用磁力攪拌器攪拌15分鐘，靜置使其充分分層后，除去上層水相。            重復(fù)操作步驟。           加入等體積的0.1M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力攪拌器攪拌15分鐘，靜置使其充分分層后，除去上層水相。            重復(fù)操作步驟，稍微殘

26、留部分上層水相。           使用pH試紙確認(rèn)有機(jī)相的pH值大于7.8。           將苯酚置于棕色玻璃瓶中4避光保存。 8、20（W/V）Glucose     組份濃度 20（W/V）Glucose    配制量 100mL 配置方法 1. 稱取20g Glucose置于100200mL燒杯中，加入約80mL

27、的去離子水后，攪拌溶解。              2. 加去離子水將溶液定容至100mL。              3. 高溫高壓滅菌后，4保存。 9、Solution I   （質(zhì)粒提取用）         組份濃

28、度 25 mM Tris-HCl（pH8.0），10mM EDTA，50mM Glucose      配制量 1L配置方法 1. 量取下列溶液，置于1L燒杯中。                  1M Tris-HCl（pH8.0）           25mL &#

29、160;                 0.5 M EDTA（pH8.0）            20mL                  

30、60;20Glucose（1.11M）           45mL                   dH2O                  

31、         910mL               2. 高溫高壓滅菌后，4保存。               3. 使用前每50 mL的Soliution I中加入2mL的RNase A（20mg/mL）。 10、Solu

32、tion II   （質(zhì)粒提取用）       組份濃度 250mM NaOH，1（W/V）SDS            配制量 500mL 配置方法 1. 量取下列溶液置于500mL燒杯中。 10SDS              

33、0;         50mL 2N NaOH                       50mL              2. 加滅菌水定容至500mL，充分混勻。

34、              3. 室溫保存。此溶液保存時間最好不要超過一個月。 注意：SDS易產(chǎn)生氣泡，不要劇烈攪拌。 11、Solution III   （質(zhì)粒提取用）           組份濃度 3M KOAc，5M CH3COOH       配制量 500mL 

35、;配置方法 1. 量取下列溶液置于500mL燒杯中。                   KOAc                           

36、; 147g                   CH3COOH                    57.5mL          &#

37、160;    2. 加入300mL去離子水后攪拌溶解。               3. 加去離子水將溶液定容至500mL。               4. 高溫高壓滅菌后，4保存。 12、0.5M EDTA   (pH8.0)              組份濃度 0.5 M EDTA            配制量 1L配置方法 1. 稱取186.1g Na2EDTA2H2O，置于1L燒杯中。