增殖細胞核抗原的表達在口腔粘膜上皮癌變診斷中的意義

1、    增殖細胞核抗原的表達在口腔粘膜上皮癌變診斷中的意義        摘要：目的研究增殖細胞核抗原(PCNA)在口腔粘膜上皮癌變過程中的表達及其在癌變診斷中的意義。方法采用免疫組化S-P法對正常口腔粘膜、輕中重度粘膜上皮異常增生和高分化鱗癌共85例標本進行PCNA檢測。結果正?？谇徽衬せ准毎麑涌捎猩倭縋CNA陽性細胞；而上皮異常增生和鱗癌時，隨著病變程度加重，PCNA陽性表達也相應提高，且陽性反應出現(xiàn)在基層以上部位；尤其是重度異常增生，其PCNA陽性表達率較中度異常增生

2、明顯增強(P=0.0008)，而重度異常增生與鱗癌間，PCNA表達無顯著性差異(P=0.7215)。結論PCNA表達在口腔粘膜上皮癌變診斷中有重要參考價值，可作為監(jiān)測其惡性變的重要生物學指標。關鍵詞：增殖細胞核抗原；口腔粘膜；上皮異常增生；鱗狀細胞癌中分類號：R739.8文獻標識碼：A文章編號：1005-4979(2000)03-0219-03 SIGNIFICANCE OF THE EXPRESSION OF PCNA IN DIAGNOSIS OF CARCINOMATOUSCONVERSION OF ORAL MUCOSAL EPITHELIUMCHEN Qiao-er，WU Ji-fe

3、ng，WANG Dao-bin（Dept. of Oral Pathology，Anhui Medical University，Hefei 230032）Abstract： ObjectiveTo study the expression and significance of proliferating cell nuclear antigen(PCNA) in diagnosis of carcinomatous conversion of oral mucosal epithelium.MethodsS-P immunohistochemical method was used to

4、examine the expression of PCNA in 85 specimens of oral mucosal tissues including normal，mild dysplasia，moderate dysplasia，severe dysplasia and carcinoma.ResultsPCNA immunostaining in normal epithelim was limited to the basal layer with few positive cells in each specimen. As the lesions progessed，th

5、e positive expresion of PCNA accordingly increased and suprabasal PCNA positive reaction was found in dysplasia and carcinoma. The positive expression rate of PCNA in severe dysplasia was much higher than that in moderate dysplasia(P=0.0008)，While no significant difference of PCNA expression was fou

6、nd between severe dysplasia and carcinoma(P=0.7215).ConclusionThe expression of PCNA has an important referential value in diagnosis of carcinomatous conversion of oral mucosal epithelium and may serve as an important biomarker for predicting the malignant change of oral mucosa.Key words： PCNA; Oral

7、 mucosa; Epithelial dysplasia; Squamous cell carcinoma口腔鱗癌是口腔腫瘤中最常見的惡性腫瘤，由正?？谇徽衬ど掀さ疆惓Ｔ錾侔l(fā)展為癌是一個連續(xù)不斷的由量變到質變的發(fā)展過程，雖然組織病理學上對口腔粘膜上皮異常增生有明確的診斷標準，但在實際應用中很難真正區(qū)分上皮異常增生的程度及早期確定是否癌變。本研究應用免疫組化方法，觀察增殖細胞核抗原(PCNA)在正常口腔粘膜上皮、上皮異常增生及口腔鱗癌中的表達分布，以探討PCNA在口腔粘膜上皮癌變過程中的意義及在癌變診斷中的應用價值。1材料與方法1.1材料收集我室臨床活檢及手術切除標本85例，其中正?？谇徽衬?/p>

8、10例，輕度上皮異常增生20例，中度上皮異常增生16例，重度上皮異常增生14例，高分化鱗癌25例。以上標本均常規(guī)石蠟包埋，制成5m切片。1.2免疫組化染色方法采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化酶免疫組化染色方法(S-P法)?？筆CNA單克隆抗體PC10(即用型)及S-P(廣譜)試劑盒購自福州邁新生物公司。染色步驟按試劑盒說明書操作。陽性對照為已知的PCNA陽性的腫瘤組織切片；用PBS代替-抗作陰性對照。1.3分級判定標準以細胞核呈棕黃色者為PCNA染色陽性細胞；每例隨機選10個不重復，不重疊的高倍視野(10×40)，記錄視野內細胞總數和PCNA陽性細胞數，按公式計算陽性細胞標識率。按標識

9、率分為四級，級為0%25%，級為26%50%，級為51%75%，級為76%100%。1.4統(tǒng)計學處理采用非參數檢驗方法。2結果2.1PCNA陽性細胞分布PCNA陽性反應定位于細胞核內，細胞核呈棕黃色反應，胞漿與胞膜不著色。正?？谇徽衬CNA染色為陰性或少量散在陽性細胞，且陽性細胞局限于基底細胞層；上皮異常增生時，隨著病變程度的加重，陽性細胞數量增加；輕度異常增生上皮中，PCNA陽性反應也主要集中于基底層，沿增寬增長的上皮釘突呈連續(xù)性分布(1)；中度異常增生時，陽性細胞數進一步增加，且出現(xiàn)于基層以上部位(2)；重度異常增生時，PCNA陽性細胞更為密集并擴展至棘細胞淺層，呈彌漫性分布(3)；高分

10、化鱗癌中，PCNA陽性細胞主要沿癌巢周邊分布，癌巢中央及角化珠陽性比例較少(4)。1輕度異常增生，PCNA陽性細胞位于基底層，沿上皮釘突連續(xù)性分布。S-P法×1002中度異常增生，PCNA陽性細胞數增加，且出現(xiàn)于基層以上。S-P法×1003重度異常增生，PCNA陽性細胞密集，并擴展至棘細胞淺層。S-P法×2004高分化鱗癌，PCNA陽性細胞沿癌巢周邊分布。S-P法×2002.2各組標本PCNA陽性分級比較見表1。表1各組標本PCNA陽性分級比較組別例數PCNA陽性分級例數(%)P值*正?？谇徽衬?010(100)0(0.0)0(0.0)0(0.0)輕度異

11、常增生2018(90.0)2(10.0)0(0.0)0(0.0)0.5997中度異常增生1610(62.5)5(31.3)1(6.2)0(0.0)0.0627重度異常增生142(14.3)8(57.1)3(21.5)1(7.1)0.0008高分化鱗癌253(12.0)13(52.0)8(32.0)1(4.0)0.7215Kruskal-wallis: x2=44.269P<0.01*表示與上一組比較Wilcoxon檢驗的P值 由表1可見，從正常口腔粘膜到高分化鱗癌，隨病變程度加重，PCNA陽性分級逐漸升高。正常口腔粘膜PCNA陽性分級為級；輕度異常增生上皮也主要為級反應；中度異常增生時，

12、PCNA陽性分級升高，但仍以級反應為多；而重度異常增生和鱗癌時，PCNA反應則多為-級，經兩樣本間的兩兩比較，除正?？谇徽衬づc輕度異常增生之間，輕度異常增生與中度異常增生之間，重度異常增生與高分化鱗癌間差異無顯著性外(P>0.05)，其余各組間均有顯著性差異(P<0.01或0.05)，輕度異常增生與中度異常增生之間，雖經統(tǒng)計學檢驗無顯著差異(P=0.0627)，但仍顯示出隨病變程度加重，陽性分級也相應提高。3討論正常細胞轉化為惡性腫瘤細胞后，即在增生和分化方面獲得獨特的性質，表現(xiàn)為過度增殖和異常分化，而細胞的異常分化必然伴有增殖活性改變，因此，可通過對細胞增殖活性研究來探索癌變發(fā)生

13、機制。如何正確診斷口腔粘膜上皮癌前病變階段的上皮異常增生程度，預測其惡變潛能，直接關系到患者的治療及預后。盡管WHO已經規(guī)定了上皮異常增生的12項組織學診斷依據，但經驗診斷的可靠性仍然令人懷疑，為此，各國學者做了大量研究，以期找到一種有效的能客觀反映口腔粘膜癌前病變狀態(tài)及惡變風險的檢測手段。PCNA是近年來發(fā)現(xiàn)的一種能較好反映細胞增殖活性的標記物，它是一種分子質量為36kD的核蛋白，為DNA多聚酶的輔助蛋白，可加強DNA聚合酶作用，與DNA復制密切相關1。PCNA又是一種調節(jié)蛋白，在細胞周期G1期開始升高，S期合成達最高峰，G2期和M期則又下降，并認為它在DNA合成和細胞增殖調控中起重要作用。

14、PCNAmRNA一般僅積聚在增殖細胞中，而在靜止細胞中則缺乏2，因此，PCNA可很好地反映細胞動力學的變化，代表細胞增殖的潛能，目前已廣泛應用于癌前病變、良惡性腫瘤細胞增生活性的研究3。有關腫瘤組織中PCNA表達已有大量報道，在癌前病變中的研究也日益受到重視。Coltrera等4對56例上消化道粘膜的研究發(fā)現(xiàn)，在正常粘膜和單純增生中，PCNA表達僅限于上皮基層；而所有粘膜上皮異常增生和原位癌中，PCNA陽性反應均出現(xiàn)在基層以上部位，由此得出，基層以上(suprabasal)PCNA表達可用來區(qū)分粘膜上皮單純增生和異常增生，是識別癌前病變的有用標志。Tsuji等5研究指出，在口腔粘膜癌前病變中，

15、PCNA+細胞較分散且比在正常上皮各層中有顯著的增加。本研究結果顯示，正?？谇徽衬ど掀CNA陽性細胞數少，且多局限在基底細胞層，反映該處細胞具有一定分裂增殖能力。上皮異常增生時，隨病變程度加重，PCNA陽性細胞數不斷增加，且出現(xiàn)在基層以上部位，PCNA陽性分級也相應提高，PCNA的表達與病變程度呈正相關，說明異常增生上皮有更多的細胞進入分裂增殖周期，癌變的可能性較大。尤其是重度異常增生，其PCNA陽性表達率較中度異常增生明顯增強(P=0.0008)，而重度異常增生與鱗癌間PCNA表達無顯著性差異(P=0.7215)，表明重度異常增生已與癌組織具有相似的增殖活性，屬高危癌前病變，較之中度異常增

16、生更易癌變，這與動物實驗的研究結果一致6，也支持Coltrera的觀點4，他認為基底層以上細胞中的陽性表達(suprabasal PCNA)同病變程度有明顯關系，suprabasal PCNA僅出現(xiàn)在重度異常增生組織中，可作為癌前病變危重程度的監(jiān)測指標。本研究也觀察到，基底層以上細胞中的陽性表達也主要出現(xiàn)在重度異常增生上皮中(如3所示)，與重度異常增生上皮具有較高的PCNA陽性表達率也是一致的。通過上述研究，證實口腔上皮癌變過程與細胞增殖活躍程度有關，PCNA可以很好反映細胞增殖狀況和分化水平，并能較好的顯示粘膜癌前病變到癌的發(fā)展過程。在臨床病理工作中，PCNA免疫組化染色在口腔粘膜上皮癌變診

17、斷中有重要參考價值，可作為監(jiān)測其惡性變的重要生物學指標?；痦椖浚喊不帐〗涛蒲谢鹳Y助課題。作者簡介：陳喬爾(1960-)，男，江蘇人，副教授.作者單位：陳喬爾（合肥安徽醫(yī)科大學口腔病理教研室230032）吳繼峰（病理解剖教研室）王道斌（病理解剖教研室）參考文獻：1Bravo R, Frank R, Blundell PA, et al. Cyclin/PCNA is the auxiliary protein DNA polymerasealphaJ. Nature, 1987, 326: 515.2Ottavio L, Chang CD, Rizzo MG, et al. Importa

18、nce of introns in the growth regulation of mPNA levels of the proliferating cell nuclear antigen geneJ. Mol Cell Biol, 1990, 10: 303.3Penneys NS, Bogaert M, Serfling U, et al. PCNA expression in cutaneous keratinous neoplasma and verreca vulgarisJ. AM J Pathol, 1992, 141(1): 139.4Coltrera MD, Zarbo RJ, Sakr WA, et al. Markers for dysplasia of the upper aerodigestive tractJ. Am J Pathol, 1992, 141: 817.5Tsuji T, Shrestha P, Yamada K, e