MS8UPLC儀器操作ppt課件

1、2008 Waters Corporation 12008 Waters Corporation2008 Waters Corporation 2二元高壓梯度系統(tǒng)(BSM) 4種溶劑可選(實際運行中只用兩種) 每臺泵均為Alliance專利設(shè)計 每臺泵最大流速2ml/min(通常工作流速:0.2-0.6ml/min)自動進樣器(針內(nèi)針設(shè)計)(SM) 常規(guī)248位樣品盤 使用2ml進樣瓶高采樣速率的TUV或PDA及ELSD檢測器 采樣速率最高可達80點秒儀器須在軟件控制下運行(Empower 或 Masslynx)2008 Waters Corporation 3 制備新鮮流動相 打開計算機及網(wǎng)

2、絡(luò)集線器電源,進入Windows操作系統(tǒng) 打開泵和進樣器電源,待通過自檢后 打開MassLynx軟件 打開控制臺界面(在Inlet Method界面Acquity Additional Status右側(cè)) 進行儀器的Start up功能(若是與以前相同的流動相且儀器停用時間并不長,只需做refresh功能) 設(shè)定0.1ml/min流速平衡色譜柱及系統(tǒng)(有液體流出) 打開TUV(PDA)檢測器電源2008 Waters Corporation 4 UPLC對流動相的要求對流動相的要求 有機溶劑要求用色譜純有機溶劑要求用色譜純(進口名牌最好進口名牌最好) 水或緩沖鹽流動相要用超純水水或緩沖鹽流動相

3、要用超純水(18.2M),當天制備當天制備 UPLC對洗針液的要求對洗針液的要求 強洗針液用甲醇強洗針液用甲醇/水或乙腈水或乙腈/水水(有機相的比例高有機相的比例高 于梯度洗脫的強溶劑的比例于梯度洗脫的強溶劑的比例) 弱洗針液用純水或含少量甲醇或乙腈的水溶弱洗針液用純水或含少量甲醇或乙腈的水溶 液液(有機相的比例低于梯度洗脫的起始比例有機相的比例低于梯度洗脫的起始比例) 清洗柱塞密封墊清洗柱塞密封墊(Seal Wash)的溶液的溶液 超純水含超純水含5%-10%甲醇甲醇 特別提示特別提示: 以上溶劑或溶液均需以上溶劑或溶液均需: 用用0.22m的膜過濾并脫氣的膜過濾并脫氣 用潔凈的玻璃容器盛放

4、用潔凈的玻璃容器盛放,避免污染避免污染2008 Waters Corporation 5 打開計算機電源打開計算機電源,進入進入Windows操作系統(tǒng)操作系統(tǒng) 打開打開Hub(網(wǎng)絡(luò)集線器網(wǎng)絡(luò)集線器)電源電源 打開打開ACQUITY UPLC BSM和和SM電源電源 先不要開先不要開TUV或或PDA 電源電源 光學檢測器的電源需待流動池內(nèi)充滿液體后再打開光學檢測器的電源需待流動池內(nèi)充滿液體后再打開 待各儀器設(shè)備通過自檢后待各儀器設(shè)備通過自檢后(綠燈長亮綠燈長亮),打開打開MassLynx軟件軟件2008 Waters Corporation 62008 Waters Corporation 7點

5、擊此按鈕點擊此按鈕2008 Waters Corporation 8系統(tǒng)壓力系統(tǒng)壓力流動相流速流動相流速所用所用A溶劑溶劑(A1或或A2)A溶劑比例溶劑比例B溶劑比例溶劑比例所用所用B溶劑溶劑(B1或或B2)停流速停流速2008 Waters Corporation 9 實際柱溫實際柱溫柱溫設(shè)定柱溫設(shè)定樣品管理器實際溫度樣品管理器實際溫度樣品管理器溫度設(shè)定樣品管理器溫度設(shè)定控制臺圖標控制臺圖標2008 Waters Corporation 10紫外吸光度紫外吸光度紫外吸收波長紫外吸收波長檢測器燈的狀態(tài)檢測器燈的狀態(tài)打開或關(guān)閉紫外燈打開或關(guān)閉紫外燈2008 Waters Corporation

6、11檢測器燈的狀態(tài)檢測器燈的狀態(tài)打開或關(guān)閉紫外燈打開或關(guān)閉紫外燈2008 Waters Corporation 12在在Sample Manager 控制面板上，單擊控制臺圖標控制面板上，單擊控制臺圖標. 打開打開ACQUITY 控制臺窗口控制臺窗口 2008 Waters Corporation 132008 Waters Corporation 142008 Waters Corporation 152008 Waters Corporation 162008 Waters Corporation 172008 Waters Corporation 182008 Waters Corpor

7、ation 192008 Waters Corporation 202008 Waters Corporation 212008 Waters Corporation 222008 Waters Corporation 232008 Waters Corporation 24 灌注柱塞桿清洗液(Prime Seal wash) 以下情況需要做此操作Prime,例如: 新安裝儀器或泵流路中溶液走干了 當泵幾小時或更長時間未用 用過緩沖液流動相之后 注意: 為避免螺線閥座和密封墊的損壞,不要使用非揮發(fā)性的緩沖液作為Seal wash的溶劑 為避免污染,請勿循環(huán)使用Seal wash溶劑 推薦: S

8、eal wash溶劑中有機相比例不要超過10% Seal wash前請檢查溶劑是否足夠2008 Waters Corporation 25將Seal wash出口端從廢液盤上摘下,連接到注射器上選擇 ControlPrime Sealwash,點擊之2008 Waters Corporation 26 點擊后,可以聽到Seal wash 閥的開關(guān)聲.此時: 慢慢抽注射器,直到有液體流出,然后將出口管再接回到廢液盤上 或者取下吸濾頭,用吸滿清洗液的注射器,從入口端注入清洗液,直至出口管有液體流出 點擊 可停止Prime過程2008 Waters Corporation 27濕灌注濕灌注(Wet

9、Priming)二元溶劑管理器二元溶劑管理器 用于排除泵頭及管路中的氣泡用于排除泵頭及管路中的氣泡 用于更換從儲液瓶到溶劑管理器之間的溶劑用于更換從儲液瓶到溶劑管理器之間的溶劑 Prime時的流速已設(shè)定為時的流速已設(shè)定為:A泵和泵和B泵各泵各4ml /min,總流總流 速為速為8mL/min,無法改動無法改動在下列情況下需要在下列情況下需要Prime二元溶劑管理器二元溶劑管理器啟用新的二元溶劑管理器或新的系統(tǒng)啟用新的二元溶劑管理器或新的系統(tǒng)停機停機4小時后再次開機小時后再次開機更換流動相更換流動相2008 Waters Corporation 28在此界面下在此界面下,選擇選擇 Control

10、Prime A/B Solvents.2008 Waters Corporation 292008 Waters Corporation 30 做過做過BSM的的wet prime之后，要準備樣品管理器，之后，要準備樣品管理器， 準備樣品管理器包括如下步驟準備樣品管理器包括如下步驟(新安裝儀器時新安裝儀器時)： 灌注灌注(Priming Syringe)注射器注射器 檢查確認密封檢查確認密封 (Characterizing the seal ) 檢查確認進樣針和定量環(huán)體積檢查確認進樣針和定量環(huán)體積 (Characterizing the needle and sample loop volum

11、es ) 加載加載 (Loading)樣品盤樣品盤2008 Waters Corporation 312008 Waters Corporation 32 灌注進樣針和樣品注射器的目的是灌注進樣針和樣品注射器的目的是: 準備樣品管理器準備樣品管理器 沖洗里面的進樣針、外部的刺穿針，和進樣口部分沖洗里面的進樣針、外部的刺穿針，和進樣口部分 排除管路中的氣泡排除管路中的氣泡 注：在灌注過程中，用溶劑充滿進樣針，在改變?nèi)軇蛘吲懦苈纷ⅲ涸诠嘧⑦^程中，用溶劑充滿進樣針，在改變?nèi)軇蛘吲懦苈分械臍馀輹r，需進行灌注進樣針和樣品注射器中的氣泡時，需進行灌注進樣針和樣品注射器 提示提示: 確保用于灌注

12、的溶劑有合適的組成確保用于灌注的溶劑有合適的組成,它應(yīng)該是高純的它應(yīng)該是高純的,并并 且?guī)追N溶劑是互溶的且?guī)追N溶劑是互溶的 所有的試劑瓶都要使用濾頭所有的試劑瓶都要使用濾頭, 并確保溶劑體積足夠用于做并確保溶劑體積足夠用于做 灌注灌注,例如例如,作作5次灌注次灌注,每種溶劑要用去大約每種溶劑要用去大約20 mL 要求要求: 在檢定密封之前必須先完成對樣品管理器的灌注在檢定密封之前必須先完成對樣品管理器的灌注 2008 Waters Corporation 33從左邊的目錄中，選擇從左邊的目錄中，選擇Sample Manager,單擊單擊 Control Prime syringes 2008

13、Waters Corporation 34 選擇選擇 “ Sample syringe and wash syringes” 在在Number of cycles中輸入要作灌注的次數(shù)中輸入要作灌注的次數(shù) (默認值為默認值為 1)(建議建議: 如果更換溶劑，建議做如果更換溶劑，建議做57次灌注次灌注)單擊單擊 OK. 當系統(tǒng)狀態(tài)是當系統(tǒng)狀態(tài)是 “Idle(待機待機),” 就表示灌注做完了就表示灌注做完了提示提示: 每做一次灌注大約需要每做一次灌注大約需要24分鐘分鐘2008 Waters Corporation 35在控制臺的在控制臺的Sample Manager窗口窗口,單擊單擊Control

14、 Wash Needle 出現(xiàn)出現(xiàn)Wash Needle對話框?qū)υ捒?輸入需要的強洗針液的體積輸入需要的強洗針液的體積. 默認為默認為: 0.0 L 提示提示: 同時使用強洗針液和弱洗針液同時使用強洗針液和弱洗針液 會增加時間和溶劑的消耗會增加時間和溶劑的消耗,因為因為 系統(tǒng)在下一次進樣之前必須將系統(tǒng)在下一次進樣之前必須將 強洗針液完全除去強洗針液完全除去 在弱洗針框中輸入弱洗針液的體積在弱洗針框中輸入弱洗針液的體積, 默認值默認值: 200.0 L 建議值建議值:200 到到 500 L 單擊單擊OK. 開始洗針過程開始洗針過程 當洗針過程完成時當洗針過程完成時, 回到回到“Idle狀態(tài)狀態(tài)

15、 洗針未完成時中斷洗針未完成時中斷, 可以點擊可以點擊Control中的中的Reset SM2008 Waters Corporation 36 沖洗進樣針是一項可選程序，它是讓強洗針液和沖洗進樣針是一項可選程序，它是讓強洗針液和/或弱洗針液或弱洗針液 通過進樣針和進樣口部分通過進樣針和進樣口部分 清洗進樣針可以去掉進樣針、刺穿針和進樣口的外部和內(nèi)部清洗進樣針可以去掉進樣針、刺穿針和進樣口的外部和內(nèi)部 的殘留的殘留 可以通過進行沖洗針的操作來探知通過廢液管的流路是否通可以通過進行沖洗針的操作來探知通過廢液管的流路是否通 暢暢,以及確證洗針系統(tǒng)是否被灌注并運行正常以及確證洗針系統(tǒng)是否被灌注并運行

16、正常 要求要求: 不要使用緩沖鹽作為洗針液不要使用緩沖鹽作為洗針液. 提示提示: 灌注系統(tǒng)已包含沖洗進樣針灌注系統(tǒng)已包含沖洗進樣針, 所以只要做了灌注系統(tǒng)所以只要做了灌注系統(tǒng),就就 可以省略此步操作可以省略此步操作 2008 Waters Corporation 37 特別提示特別提示: 不能讓強洗針液接觸樣品不能讓強洗針液接觸樣品 弱洗針液要與流動相一致弱洗針液要與流動相一致,或與初始梯度相同或與初始梯度相同 如果稀釋樣品，弱洗針液應(yīng)與稀釋樣品的溶劑相同如果稀釋樣品，弱洗針液應(yīng)與稀釋樣品的溶劑相同 用于洗針的有機溶劑種類應(yīng)與色譜使用的有機溶劑一致用于洗針的有機溶劑種類應(yīng)與色譜使用的有機溶劑一

17、致 經(jīng)驗規(guī)則經(jīng)驗規(guī)則: 在洗針過程中應(yīng)確保強洗針液完全被弱洗針液所取代在洗針過程中應(yīng)確保強洗針液完全被弱洗針液所取代 洗針程序會先用強洗針液洗針洗針程序會先用強洗針液洗針,再用一定體積弱洗針液再用一定體積弱洗針液 去洗針去洗針(其默認體積是其默認體積是200 L ), 可以增加弱洗針液的體可以增加弱洗針液的體 積積,但不能減少但不能減少.一般需要一般需要3倍于強洗針液體積倍于強洗針液體積2008 Waters Corporation 38 弱洗針液和強洗針液的選擇取決于樣品和所使用的流動相弱洗針液和強洗針液的選擇取決于樣品和所使用的流動相, , 確保流動相和緩沖液是互溶的確保流動相和緩沖液是互

18、溶的 要想得到好的柱效，弱洗針液必須等同于要想得到好的柱效，弱洗針液必須等同于初始梯度的流動相初始梯度的流動相等度時和流動相比例相同等度時和流動相比例相同 不推薦緩沖鹽作為弱洗針液不推薦緩沖鹽作為弱洗針液 推薦的弱洗針液和強洗針液如下表推薦的弱洗針液和強洗針液如下表: :色譜條件弱洗針溶劑強洗針溶劑反相/緩沖鹽溶液 100% H2O 或 0 到 25%甲醇或乙腈50 %到100% 甲醇或乙腈2008 Waters Corporation 39柱加熱器(Column Heater ,C/H) 置于S/M 的頂部 同時也是 Sample Manager 的頂蓋當使用 Mass Spec 時,柱加熱

19、器可以從原來的位置外轉(zhuǎn)180 度這種設(shè)計是為了使 S/M 和 C/H 以及 C/H 和檢測器 (或質(zhì)譜)之間的連接管路更短 , 以盡量地減小擴散體積 2008 Waters Corporation 40預(yù)熱穩(wěn)定器會減小對環(huán)境溫度波動的敏感度,并減小/最小化譜帶展寬 新的襯墊(和淺盤)使之較易于安裝/移動預(yù)熱穩(wěn)定器P/N 205000291柱預(yù)熱穩(wěn)定器組件包2008 Waters Corporation 41用于ACQUITY UPLC 色譜柱的 In-Line Filter (在線過濾器)部件號P/N 205000343 Column inlet In-line filter unit Stabilizer tube assembly Flow Place wrenches here to connect In-line filter unit to Column inlet. Place wrenches here to connect In-line filter unit to Stabilizer tube assembly. 2008 Waters Corporation 42- 整體式配件整體式配件,手指擰緊手指擰緊 即可即可- 截取截取 0.0025長的一