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1、腎上腺腦白質失養(yǎng)癥基因診斷及送檢須知(Adrenoleukodystrophy/ALD, ABCD1 Gene) 一、簡介：腎上腺腦白質失養(yǎng)癥(Adrenoleukodystrophy,簡稱ALD)屬於X染色體性聯(lián)隱性遺傳疾病(X-linked Adrenoleukodystrophy,X-ALD)。主要是因位於X染色體上之ATP-binding cassette, sub-family D, member 1基因(簡稱X-ALD或ABCD1基因)發(fā)生突變，造成患者細胞內過氧化小體(peroxisome)異常，無法代謝非常長鏈飽和性脂肪酸(very long-chain fatty acids

2、,簡稱 VLCFA)，尤其是 24 個碳及 26 個碳的脂肪酸，導致體內VLCFA大量堆積在大腦白質和腎上腺皮質，進而侵蝕腦神經系統(tǒng)的髓鞘質，導致中樞神經發(fā)展遲滯退化，產生神經傳遞功能障礙。X-ALD可能在不同年齡發(fā)病，且臨床表徵相當多樣化，初期癥狀可能為為注意力不集中、記憶減退、活動過度等。隨著病程進展，則會有漸進性聽覺、視覺、語言及行動能力喪失、昏迷等癥狀。依其發(fā)病年齡及臨床癥狀，大致可區(qū)分成數種類型，其中以下列兩型最為常見：(1) 兒童期發(fā)病型 (Childhood Cerebral,簡稱CCER或CCALD；約佔所有ALD患者的31-35%)：患者約在3至10歲發(fā)病，一般發(fā)病會表現出學

3、習或行為異常，之後語言及其他自主能力會逐漸喪失，通常發(fā)病後6個月到3年內會迅速退化，逐漸喪失神經自主及運動能力，且於數年內死亡。(2) 成年期發(fā)病型(Adrenomyeloneuropathy,簡稱AMN；約佔40-46%)：患者大都於21歲以後發(fā)病。主要癥狀為漸進式腿部僵硬、無力，無法控制括約肌，中樞神經逐漸退化等。約10至20的病患，會因腦部的退化而有嚴重的認知、行為及語言障礙，導致完全失能及喪失生命。因X-ALD病患無法代謝VLCFA，故臨床診斷可經由抽血檢驗VLCFA的血中含量及腎上腺皮質素、促腎上腺皮質激素功能，並檢驗周邊神經傳導速度(NCV)、腦波及頭部磁振掃描以做為確認診斷之依據

4、。然而此類血液篩檢必須長期定期作追蹤，且有偽陰性造成誤判的危險。而利用DNA分子診斷技術進行ABCD1基因序列突變檢測，為最直接確認的診斷方式。早期確立診斷後，可利用飲食控制及使用羅倫佐的油(Lorenzo's Oil) 減低病患體內合成VLCFA，或許可預防或延緩疾病癥狀的發(fā)生。但羅倫佐的油不能治癒已產生的神經病變，及對腦部VLCFA之堆積的改善效果有限，對成年病患也不具療效。此外，在神經癥狀未出現前，可服用類固醇改善。目前唯一可以根治的方式就是在癥狀出現前進行骨髓移植，但移植仍有產生排斥及感染而導致死亡的風險。ATP-binding cassette, sub-family D,

5、member 1基因(簡稱X-ALD或ABCD1基因)位於X染色體長臂上(Xq28)，由10個外顯子(exons)組成，基因涵蓋範圍約21 kb，所轉譯的蛋白質產物共有745個胺基酸。根據國外X-ALD資料庫(X-linked Adrenoleukodystrophy Database)統(tǒng)計，至西元2004年底發(fā)表之突變形式(Mutation type)已超過 700種以上。其中，約70 %屬於單點突變(point mutation )，包括誤意突變(missense mutations) 及無意義突變(nonsense mutations)；約26 %屬於單點或數個鹼基缺失/插入突變(fra

6、me shift mutations & amino acid insertions/deletions)；而大片段缺失突變(one or more exons deleted)約佔4 %左右。故利用DNA直接定序方式(DNA sequence)檢測X-ALD基因上之全轉譯密碼區(qū)(entire coding region)，可診斷95%以上的突變型式。故此法應為一種快速且直接有效之檢測方法。二、遺傳模式：母親為帶因者女性帶因者男性患者父親正常男性正常女性正常範例一女性帶因者女性帶因者父親為患者男性正常男性正常母親正常範例二X-ALD屬於X染色體性聯(lián)隱性遺傳疾病，若父親正常，母親為帶因者

7、，則每一胎所生的兒子會有1/2機率為患者，1/2機率為正常；每一胎所生的女兒會有1/2機率為帶因者，1/2機率為正常（模式一）；若父親為患者，母親正常，則每一胎所生的女兒都會是帶因者，所生的兒子都是正常（模式二）。攜帶ABCD1缺陷基因的女性帶因者，成年之後有些人的神經系統(tǒng)會有病變癥狀。三、檢體採樣：A.一般成人：患者、帶因者或待測者種類檢體量容 器注意事項全血3-5 c.c.含EDTA抗凝劑之採血管避免凝固B.產前診斷：孕婦應先基因確診帶因之突變型。種類檢體量容 器注意事項臍帶血2c.c.以上EDTA管（紫頭）避免凝固，避免母血污染絨毛10mg以上乾淨之瓶子或管子，浸泡於生理食鹽水或培養(yǎng)液需

8、確認採樣檢體為胎兒絨毛組織羊水10 c.c以上針頭的地方用3M膠布貼緊以防運送過程中脫落避免母血污染備註：1.母血或母體組織污染嚴重之胎兒檢體無法檢驗。2.所有檢體皆應於24小時內以室溫保存運送。四、基因診斷對象、方法、收費及報告時程：檢驗對象檢驗方法收費(不含掛號費及採檢技術費)報告時程確診患者之基因突變型：VLCFA分析異常，需進行基因診斷確診。X-ALD基因直接定序分析。12,000元/人2週(1)已知基因突變型之帶因者確診。(2) 母親為帶因者，胎兒進行產前診斷。X-ALD基因特定突變點位定序分析。已知突變型之帶因者確診：4,000元/人產前診斷：4,000元/胎兒1週五、基因診斷之侷

9、限性：1. 本檢驗方式，係以DNA直接定序的方式檢測X-ALD基因其表現子(exon)區(qū)域之密碼序列是否發(fā)生突變。而利用DNA定序方式僅能檢測基因內單點(point mutation)或小片段缺失(small deletion)、插入(small insertion)突變，而無法排除基因大片段缺失(gross deletion)、插入(gross insertion)、倒轉(inversion)或重複(duplication) 等型式突變。此外，檢測範圍外的突變點，如基因調控區(qū)域突變(regulatory mutations)或複雜型基因重組(complex rearrangements).等

10、，亦無法由本方法檢出。2. 由於檢體污染、分子診斷設備與技術靈敏度等多項複雜因素的影響，而易導致診斷誤差。故結果僅供醫(yī)師臨床參考。六、送檢方式：1. 委託人應簽署基因診斷同意書(附件一)，並將檢體包裝妥當，以宅急便或掛號方式寄至：(100) 臺北市林森南路10-1號1樓 柯滄銘婦產科 基因飛躍生命科學實驗室 收2. 聯(lián)絡電話：02-33931030 傳真：02-33931077腎上腺腦白質失養(yǎng)癥(X-ALD)基因診斷同意書本同意書供受檢者診斷使用本人 委請 貴院施行X-ALD之基因診斷，並已充分了解以下事項：1. 本基因診斷係以DNA直接定序的方式檢測病患X染色體上之ATP-binding c

11、assette, sub-family D, member 1基因(簡稱X-ALD或ABCD1基因)，其表現子(exon)區(qū)域之密碼序列是否發(fā)生致病性突變。2. 當病患找到突變點位後，其家屬進行帶因者的確認診斷時，本院僅針對已找到之突變位置進行確認診斷。3. 利用DNA定序方式僅能檢測基因內單點(point mutation)或小片段缺失(small deletion)、插入(small insertion)突變，而無法排除基因大片段缺失(gross deletion)、插入(gross insertion)、倒轉(inversion)或重複(duplication)等型式突變。此外，檢測範圍

12、外的突變點，如基因調控區(qū)域突變(regulatory mutations)或複雜型基因重組(complex rearrangements).等，亦無法由定序方式檢出。4. 基因檢驗因有上述侷限性，且因檢體污染、分子診斷設備與技術靈敏度等多項複雜因素皆會導致診斷誤差。故檢驗結果之準確率約為98%，結果僅供醫(yī)師臨床參考。5. 本人已經由臨床醫(yī)師之遺傳諮詢，充分解基因診斷之過程、必要性及侷限性，並同意進行本項檢查。此致 柯滄銘婦產科 基因飛躍生命科學實驗室立同意書人 _(簽章)出生日期： _ 年 _月 _日身分證字號 _ 中 華 民 國 _年 _月 _日腎上腺腦白質失養(yǎng)癥(X-ALD)本同意書供孕婦產前診斷使用基因產前診斷同意書本人 經確認診斷為腎上腺腦白質失養(yǎng)癥(X-ALD)帶因者，故委請 貴院施行X-AL