卷柏穗花杉雙黃酮的舒張血管作用實(shí)驗(yàn)研究

1、    卷柏穗花杉雙黃酮的舒張血管作用實(shí)驗(yàn)研究作者：許蘭，尹明浩 作者單位：(延邊大學(xué)中醫(yī)學(xué)院,吉林 延吉 133000)【摘要】 目的探討卷柏乙酸乙酯提取物穗花杉雙黃酮對(duì)血管緊張性的影響及其可能的機(jī)制.方法利用多道生理記錄儀對(duì)大鼠離體主動(dòng)脈環(huán)進(jìn)行觀察，了解卷柏己烷、乙酸乙酯和正丁醇提取物對(duì)血管的作用，并從血管內(nèi)皮細(xì)胞、一氧化氮和受體角度探討其機(jī)制.結(jié)果卷柏的3種提取液均有明顯的舒張血管作用，其中以乙酸乙酯提取物穗花杉雙黃酮的作用最強(qiáng)，且在0.110.0mol/L范圍內(nèi)具有劑量依賴性.損傷大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)內(nèi)皮后，穗花杉雙黃酮的舒張血管作用被抑制;在內(nèi)皮完整

2、的動(dòng)脈血管環(huán)使用一氧化氮抑制劑LNAME后，穗花杉雙黃酮的作用亦被抑制;使用1.0mol/L鹽酸普萘洛爾或阿托品對(duì)穗花杉雙黃酮的舒張血管作用無(wú)影響.結(jié)論卷柏乙酸乙酯提取物穗花杉雙黃酮的舒張血管作用存在內(nèi)皮依賴性，且有一氧化氮參與.【關(guān)鍵詞】 穗花杉雙黃酮;主動(dòng)脈;血管舒張;一氧化氮;大鼠Experiment study on vasodilative effects of amentoflavone ethyl acetate extract of selaginella tamariscinaXU Lan, YIN Minghao*(Yanbian University College of

3、 Traditional Chinese Medical, Yanji 133000, Jilin， China)ABSTRACT:OBJECTIVETo investigate the effects of ethyl acetate extract of the selaginella tamariscina (ST) on vasotonia and its underlying mechanisms.METHODSUsing the polygraph, the effects of hexane, ethyl acetate and nbulanol extracts of the

4、ST for the vasotonia were evaluated with the model of isolated rat thoracic aorta rings in organ bath, and the mechanisms were studied by the point of vascular endothelial cell, nitric oxide (NO) and receptor.RESULTSAll of three extracts of the ST had the effects of vasodilation, in which the ethyl

5、acetate extract of the ST had the strongest effects with the dosedependent at the concentrations of 0.110.0mol/L. But this effect was almost inhibited after removal of rat thoracic aorta rings and pretreating the endothelium intact aorta rings with NG nitroLarginine methyl ester at the concentration

6、 of 1.0mol/L, respectively. Thepropranolol (1.0mol/L) or atropine (1.0mol/L) did not affect vasodilation with ethyl acetate extract of the ST.CONCLUSIONThe ethyl acetate extract of the ST has the effect of vasodilation with endothelium dependent and engaging in NO.Key words:Amentoflavone;aorta;vasod

7、ilation;nitric oxide;rats卷柏科植物卷柏(Selaginella tamariscina)具有活血通經(jīng)之功效，用于經(jīng)閉痛經(jīng)、癓瘕痞塊及跌打損傷的治療，炒炭后可化瘀止血，用于治療吐血、崩漏、便血及脫肛等疾病1.卷柏的主要化學(xué)成分為黃酮類、生物堿、酚類、有機(jī)酸類、氨基酸及多糖類等2.研究結(jié)果表明，卷柏除具有調(diào)節(jié)免疫、抗腫瘤、抑菌、抗炎、鎮(zhèn)痛及鎮(zhèn)靜作用外，尚有抑制正常離體兔腸平滑肌的蠕動(dòng)及張力的作用.本實(shí)驗(yàn)觀察了卷柏乙酸乙酯提取物對(duì)大鼠離體胸主動(dòng)脈環(huán)的作用，并初步探討了其機(jī)制.1 材料與方法1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與試劑 取體重為250300g的SD雄性大鼠，由韓國(guó)Samtako實(shí)驗(yàn)

8、動(dòng)物中心提供.苯腎上腺素、乙酰膽堿、阿托品、鹽酸普萘洛爾及LNAME均購(gòu)自美國(guó)SIGMA公司.1.2 卷柏提取物的制備 取卷柏1.2kg浸泡于5L甲醇中，3周后用回旋式減壓濃縮機(jī)濃縮，再將濃縮物溶解于水后，用己烷、乙酸乙酯、正丁醇和水依次萃取成分.在預(yù)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，乙酸乙酯提取物對(duì)血管的舒張作用最為明顯，故采用C18柱色譜分離法和硅膠柱色譜分離法進(jìn)行分離，通過(guò)改變樣品混合物處理?xiàng)l件及流動(dòng)相極性，得到分離物DH 110211.通過(guò)血管舒張實(shí)驗(yàn)證明其為有效活性成分，并經(jīng)HNMR波譜和13CNMR光譜分析，最終確定其為雙黃酮類化合物穗花杉雙黃酮(Amentoflavone).1.3 血管環(huán)的制備 參照

9、Kim等3的方法，將大鼠斷頭處死，迅速開胸取胸主動(dòng)脈，在4的Krebs液中去除血管周圍脂肪及結(jié)締組織，制作成約3mm長(zhǎng)的血管環(huán).血管環(huán)懸掛于含有5mLKrebs液(118.0mmol/L氯化鈉,4.7mmol/L氯化鉀,1.1mmol/L硫酸鎂,1.2mmol/L磷酸二氫鉀,1.5mmol/L氯化鈣,25.0mmol/L碳酸氫鈉,10.0mmol/L葡萄糖)的浴槽中恒溫37，持續(xù)通入950mL/L氧50mL/L二氧化碳混合氣體.將血管環(huán)兩端分別連接于張力傳感器和浴槽底部的不銹鋼絲，使用PowerLab生物信號(hào)采集系統(tǒng)(美國(guó)GRASS公司)進(jìn)行記錄.最適前負(fù)荷為1g，每隔10min換液1次，平衡

10、1h后開始進(jìn)行實(shí)驗(yàn).1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)偏差(±SD)表示，采用t檢驗(yàn)及oneway ANOVA進(jìn)行顯著性檢驗(yàn).2 結(jié)果2.1 卷柏提取物對(duì)主動(dòng)脈環(huán)張力的影響 動(dòng)脈環(huán)在灌流穩(wěn)定1h后，向灌流槽內(nèi)加入1.0mol/L苯腎上腺素，使動(dòng)脈環(huán)收縮達(dá)到穩(wěn)定.分別加入卷柏己烷、乙酸乙酯和正丁醇提取物，觀察動(dòng)脈對(duì)苯腎上腺素導(dǎo)致的收縮血管作用的影響.發(fā)現(xiàn)卷柏的上述提取物均有顯著的舒張血管作用，其中以100g/L卷柏乙酸乙酯提取物的舒張血管作用最強(qiáng)，見圖1.2.2 損傷血管內(nèi)皮對(duì)穗花杉雙黃酮舒張血管作用的影響 向灌流槽內(nèi)加入0.1mol/L苯腎上腺素，待血管環(huán)收縮達(dá)到穩(wěn)

11、定后，逐漸增加穗花杉雙黃酮的濃度(0.0110.00mol/L)，發(fā)現(xiàn)對(duì)血管的舒張作用呈劑量依賴性.但當(dāng)使用外科方法剝?nèi)?dòng)脈血管內(nèi)皮后，穗花杉雙黃酮的舒張血管作用明顯減弱，甚至完全消失(圖2A).2.3 LNAME對(duì)穗花杉雙黃酮舒張血管作用的影響 用非特異性一氧化氮抑制劑LNAME(0.1，1.0mol/L)預(yù)處理血管后，再觀察穗花杉雙黃酮的舒張血管作用，發(fā)現(xiàn)LNAME幾乎可完全阻斷穗花杉雙黃酮的舒張血管作用(圖2B)，提示穗花杉雙黃酮可能通過(guò)一氧化氮發(fā)揮舒張血管作用.2.4 普萘洛爾和阿托品對(duì)穗花杉雙黃酮舒張血管作用的影響 應(yīng)用1.0mol/L普萘洛爾及0.110.0mol/L阿托品分別對(duì)血

12、管進(jìn)行預(yù)處理后發(fā)現(xiàn)均不影響穗花杉雙黃酮的舒張血管作用,與對(duì)照組相比較均無(wú)顯著性差異(P>0.05,圖3).3 討論本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，卷柏的己烷、乙酸乙酯和正丁醇等3種提取物均有一定的降低由苯腎上腺素引起的動(dòng)脈血管收縮的作用，而其中以乙酸乙脂提取物穗花杉雙黃酮的作用最強(qiáng).穗花杉雙黃酮的舒張血管作用可能與膽堿能M受體及腎上腺素能受體無(wú)關(guān)，但在剝?nèi)パ軆?nèi)皮后作用完全被阻斷，提示穗花杉雙黃酮的舒張血管作用依賴血管內(nèi)皮.血管內(nèi)皮細(xì)胞可分泌內(nèi)皮源性血管舒張因子，而其化學(xué)本質(zhì)為一氧化氮4.一氧化氮是由一氧化氮合酶催化其底物L(fēng)精氨酸產(chǎn)生的，一氧化氮的舒張血管作用是通過(guò)增加平滑肌內(nèi)cGMP水平來(lái)介導(dǎo)5.本實(shí)

13、驗(yàn)結(jié)果表明，用非特異性一氧化氮抑制劑LNAME預(yù)先處理后，穗花杉雙黃酮的舒張血管作用完全被阻斷，提示卷柏的乙酸乙脂提取物穗花杉雙黃酮可能是通過(guò)激活血管內(nèi)皮細(xì)胞中的一氧化氮/c GMP信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)發(fā)揮作用，其詳細(xì)機(jī)制有待于進(jìn)一步研究闡明.【參考文獻(xiàn)】1 徐宏峰，陳科力.卷柏屬藥用植物化學(xué)和藥理研究進(jìn)展J.中華實(shí)用醫(yī)藥雜志,2004,12(4):609.2 何薇，曾祖平，王永紅.藥用卷柏的研究概況J.中草藥,2000,31(12):954.3 Kim SH, Kang KW, Kim KW, et al.Procyanidins in crataegus extract evoke endotheliumdependent vasorelaxation in rat aortaJ.Life Sci,2000,67:121.4 Zhang H， Cook D.Cerebral smooth muscle potassium channel and their possible role