瘧疾鏡檢的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)

1、瘧疾鏡檢的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)血片的清潔 新的載玻片必須洗潔凈后才可直接浸于新的載玻片必須洗潔凈后才可直接浸于 9 5%的酒精的酒精中，然后一一取出，用軟而潔凈并沒有棉花毛的細(xì)布中，然后一一取出，用軟而潔凈并沒有棉花毛的細(xì)布擦干，擦亮，妥善放置，勿使灰塵沾污。擦干，擦亮，妥善放置，勿使灰塵沾污。 用過的載玻片可用用過的載玻片可用5之煮沸肥皂水洗滌，將玻片一張之煮沸肥皂水洗滌，將玻片一張一張的放入其中待肥皂水稍冷后，用毛刷或紗布細(xì)心一張的放入其中待肥皂水稍冷后，用毛刷或紗布細(xì)心拭擦。再用清水漂洗干凈并以紗布擦干，然后浸于拭擦。再用清水漂洗干凈并以紗布擦干，然后浸于 95酒精內(nèi)脫脂，照上述法處理，酒精內(nèi)脫脂

2、，照上述法處理， 亦可用洗滌液清洗，在整個擦洗過程中，應(yīng)注意避免亦可用洗滌液清洗，在整個擦洗過程中，應(yīng)注意避免玻片互相磨擦，而使玻片面磨毛，以致不堪使用。玻片互相磨擦，而使玻片面磨毛，以致不堪使用。采血的部位和方法 以耳垂采血為主。以耳垂采血為主。以以75%酒精棉球消毒耳垂待酒精干后，酒精棉球消毒耳垂待酒精干后，左手拇指和食指緊捏耳垂，右手持一次左手拇指和食指緊捏耳垂，右手持一次性采血針迅速刺入，適可而止第一滴血性采血針迅速刺入，適可而止第一滴血不必擦掉，即可應(yīng)用。（若由指頭取血不必擦掉，即可應(yīng)用。（若由指頭取血則受檢者痛楚較大，且易引起創(chuàng)口感染，則受檢者痛楚較大，且易引起創(chuàng)口感染，一投不宜采

3、用。）一投不宜采用。）采血的血量厚血膜血量約為厚血膜血量約為5立方毫米左右立方毫米左右(即一小即一小滴滴)，涂成邊緣光滑之園形，直徑約厘米，涂成邊緣光滑之園形，直徑約厘米左右。左右。薄血膜血量只需立方毫米左右薄血膜血量只需立方毫米左右,過多則血過多則血膜過厚過大。薄膜宜涂成舌狀長約厘米，膜過厚過大。薄膜宜涂成舌狀長約厘米，寬約寬約2厘米厘米采血的時間進(jìn)行瘧疾普查時，在同一時間內(nèi)常常需進(jìn)行瘧疾普查時，在同一時間內(nèi)常常需要檢查很多居民，故一般無法考慮取血要檢查很多居民，故一般無法考慮取血的時間。的時間。但在診斷臨床的瘧疾患者時，就應(yīng)當(dāng)考但在診斷臨床的瘧疾患者時，就應(yīng)當(dāng)考慮在什么時候取血較為適宜，尤

4、在確定慮在什么時候取血較為適宜，尤在確定不下蟲種和查不到瘧原蟲的疑似瘧疾患不下蟲種和查不到瘧原蟲的疑似瘧疾患者的情況下。者的情況下。采血的時間-間日瘧間日瘧原蟲及三日瘧原蟲，在患者剛發(fā)冷發(fā)熱以后，大部是在環(huán)狀滋養(yǎng)體期，故這一時期區(qū)別瘧原蟲種類是不容易的。雖在般情況下，隨便什么時間檢查感染者的末稍血液， 多少能查到各個時期的原蟲，但適當(dāng)?shù)娜⊙獣r間，一般是在患者發(fā)作數(shù)小時至十余小時，即已滋養(yǎng)發(fā)育至具有易于鑒別的晚期滋養(yǎng)體期采血的時間-惡性瘧 惡性瘧原蟲，從理論上說，因?yàn)閻盒栽x的裂體生殖是在內(nèi)臟的毛細(xì)血管內(nèi)進(jìn)行的，所以在發(fā)作之前，患者的末稍血液中不易查到。但實(shí)際情況不盡如此，一般在受染者的末稍血液

5、中，隨時能見到少數(shù)惡性瘧原蟲的環(huán)狀滋養(yǎng)體， 雖然如此，較理想的取血時間，是在發(fā)作后的20小時左右，因?yàn)檫@個時候，環(huán)狀滋養(yǎng)體雖已滋長發(fā)育至最高峰，但尚未回至內(nèi)臟的毛細(xì)血管中去進(jìn)行裂體生殖。 環(huán)狀滋養(yǎng)體的數(shù)量與構(gòu)造，有助于瘧原蟲種類的鑒別。惡性瘧原蟲的配子體很易識別，但在初發(fā)時，一般需要在發(fā)作八日后才能在末稍血液中出現(xiàn)，應(yīng)當(dāng)注意厚、薄血膜的形狀和位置 薄血膜寬2cm，長 厚血膜直徑 假定將玻片劃成三格等分，則厚血膜應(yīng)位于中格靠右側(cè)線處，薄血膜則從玻片中央起至左格中部止，右端空格供記錄姓名，編號或貼標(biāo)簽之用(如圖)血片的制作1玻片的執(zhí)持方法：玻片的執(zhí)持方法： 無論在拭擦玻片，制作血片或染色無論在拭擦

6、玻片，制作血片或染色血片時，手指僅可夾持玻片兩側(cè)緣，血片時，手指僅可夾持玻片兩側(cè)緣，切匆觸及玻片之上下面以免手上油切匆觸及玻片之上下面以免手上油脂污及玻片面，使薄血涂布不勻，脂污及玻片面，使薄血涂布不勻，厚血膜易于脫落厚血膜易于脫落血片的制作-厚血膜涂制取潔凈的載玻片和推片各一張載玻片放桌上，取潔凈的載玻片和推片各一張載玻片放桌上，推片以右手拇指和食指持其二側(cè)，以左端下角推片以右手拇指和食指持其二側(cè)，以左端下角從受檢者之耳垂沾取血滴，在載玻片之適當(dāng)位從受檢者之耳垂沾取血滴，在載玻片之適當(dāng)位置，置， 自內(nèi)向外回轉(zhuǎn)擴(kuò)大，涂成厚血膜，使厚自內(nèi)向外回轉(zhuǎn)擴(kuò)大，涂成厚血膜，使厚薄均勻。涂畢后用干棉球拭掉推

7、片上和耳垂上薄均勻。涂畢后用干棉球拭掉推片上和耳垂上之殘留小量血液。之殘留小量血液。血片的制作-薄血膜涂制以推片左端中央沾取薄血膜所需之血，與載玻以推片左端中央沾取薄血膜所需之血，與載玻片約成片約成25一一45度角，使血滴向二旁擴(kuò)展至一度角，使血滴向二旁擴(kuò)展至一定寬度時，立即向左邊輕輕迅速推出即成薄血定寬度時，立即向左邊輕輕迅速推出即成薄血膜。推時速度之快慢和角度均影響血膜的厚薄膜。推時速度之快慢和角度均影響血膜的厚薄程度，最理想的薄血膜是一層血細(xì)胞，血細(xì)胞程度，最理想的薄血膜是一層血細(xì)胞，血細(xì)胞的分布排列比較均勻。無裂縫，無空隙。的分布排列比較均勻。無裂縫，無空隙。血片的編號血片編號可根據(jù)實(shí)

8、際操作進(jìn)行。號碼必須不易脫落，建議用鉛筆在薄血膜上編號。血片的固定和脫膜薄血膜用甲醇固定薄血膜用甲醇固定現(xiàn)場檢查的血片厚血膜可以不脫血現(xiàn)場檢查的血片厚血膜可以不脫血膜，直接染色。膜，直接染色。保存時間較長的標(biāo)本片厚血膜要脫保存時間較長的標(biāo)本片厚血膜要脫血膜后保存。血膜后保存。血片制作的注意事項(xiàng)平放、平放、 有蓋、有蓋、 防止灰、塵和植防止灰、塵和植物孢子污染。物孢子污染。防止蒼蠅、蟑螂等昆蟲吮吸防止蒼蠅、蟑螂等昆蟲吮吸自然干燥，不能太陽曬和火烤自然干燥，不能太陽曬和火烤制作血片的注意事項(xiàng) 制成的血片切勿用火烤、日曬或放在新購置之標(biāo)本盒內(nèi)，以免血制成的血片切勿用火烤、日曬或放在新購置之標(biāo)本盒內(nèi)，

9、以免血紅蛋白凝固無法脫除。血片放置待干時不可傾斜，否則厚血膜中紅蛋白凝固無法脫除。血片放置待干時不可傾斜，否則厚血膜中血細(xì)血細(xì) 胞沉在一邊，可使厚薄不勻。此外還要防止蒼蠅吮吸血膜胞沉在一邊，可使厚薄不勻。此外還要防止蒼蠅吮吸血膜和灰塵污染血片。和灰塵污染血片。 制成的血膜須完全干燥后制成的血膜須完全干燥后(自然情況下約自然情況下約4-12小時才能全干燥；小時才能全干燥；必要時，可置于必要時，可置于3 7的暖箱中，促其速干的暖箱中，促其速干)始可進(jìn)行固定及染色始可進(jìn)行固定及染色否則薄血膜中的紅細(xì)胞邊緣皺縮，厚血膜容易在染色時脫落，而否則薄血膜中的紅細(xì)胞邊緣皺縮，厚血膜容易在染色時脫落，而?，F(xiàn)網(wǎng)狀的背景；反之；血片擱置過久則有霉菌及枯草桿菌生長，?，F(xiàn)網(wǎng)狀的背景；反之；血片擱置過久則有霉菌及枯草桿菌生長，血紅蛋白凝固，也不能使用，因此不利于鏡檢。血紅蛋白凝固，也不能使用，因此不利于鏡檢。 若把未經(jīng)固定的血片能盛于氯化鈣的干燥器內(nèi)，然后放入冰箱中，若把未經(jīng)固定的血片能盛于氯化鈣的干燥器內(nèi)，然后放入冰箱中，可保存可保存3年之久，并仍可較滿意的染色。年之久，并仍可較滿意的染色。血片的染色吉氏染液的成份吉氏染液的成份原料：吉氏染粉原料：吉氏染粉 10 g 中性甘油中性甘油 500 ml 純甲醇純甲醇 500 ml吉氏液染色方法將吉氏染液配成將吉氏染液配成3%的稀