動物細胞工程新

1、動物細胞工程離體植物器官、離體植物器官、組織或細胞組織或細胞愈傷組織愈傷組織胚狀體胚狀體脫（去）分化脫（去）分化再分化再分化（芽、根）（芽、根）n植物細胞工程常用的技術(shù)手段有哪些？植物細胞工程常用的技術(shù)手段有哪些？植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)使用的培養(yǎng)基使用的培養(yǎng)基： 固體有機物（蔗糖）植物激素植物體植物體復(fù)習復(fù)習目的目的植物體植物體植物體細胞雜交植物體細胞雜交植物細胞植物細胞A 植物細胞植物細胞B 去細胞壁去細胞壁原生質(zhì)體融合原生質(zhì)體融合雜種細胞雜種細胞愈傷組織愈傷組織雜種植株雜種植株植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)植物細胞融合1、植物體細胞雜交的結(jié)果、植物體細胞雜交的結(jié)果是產(chǎn)生了？是產(chǎn)生了？2、這個過

2、程中涉及的原理是？、這個過程中涉及的原理是？雜種植株雜種植株細胞膜的流動性細胞膜的流動性 植物細胞的全能性植物細胞的全能性目的目的植物體植物體多莉多莉克隆猴克隆猴動物細胞工程動物細胞工程常用的技術(shù)手段常用的技術(shù)手段動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)動物細胞融合動物細胞融合單克隆抗體單克隆抗體核移植核移植動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)技術(shù)是其他動物細胞工程技技術(shù)是其他動物細胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)。術(shù)的基礎(chǔ)。一、動物細胞培養(yǎng)一、動物細胞培養(yǎng)1.選材：選材：動物胚胎或幼齡動物的組織、器官，它動物胚胎或幼齡動物的組織、器官，它們細胞增殖能力強，分裂旺盛，分化程們細胞增殖能力強，分裂旺盛，分化程度低，容易培養(yǎng)。度低，容易培養(yǎng)

3、。v在進行動物細胞培養(yǎng)時，用在進行動物細胞培養(yǎng)時，用胰蛋白酶胰蛋白酶分散分散細胞，說明細胞間的物質(zhì)主要是細胞，說明細胞間的物質(zhì)主要是蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)。動。動物細胞培養(yǎng)適宜的物細胞培養(yǎng)適宜的PH為為7.27.4，此環(huán)境下，此環(huán)境下胃蛋白酶（胃蛋白酶（2.0）沒有活性，而胰蛋白酶）沒有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性較高。的活性較高。2.分散成單個細胞分散成單個細胞3.動物細胞生長特性動物細胞生長特性：n細胞貼壁：細胞貼壁： 懸液中分散的細胞很快就貼附在瓶壁上，懸液中分散的細胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細胞貼壁。稱為細胞貼壁。要求：要求： 培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿的內(nèi)表面光滑、無毒、易于貼附。培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)

4、皿的內(nèi)表面光滑、無毒、易于貼附。細胞的接觸抑制：細胞的接觸抑制： 當貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時，細胞就會當貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時，細胞就會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細胞的接觸抑制。停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細胞的接觸抑制。 動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)就是從動物有機體中動物細胞培養(yǎng)就是從動物有機體中取出相關(guān)的組織取出相關(guān)的組織,將它分散成單個將它分散成單個細胞細胞,然后然后,放在適宜的培養(yǎng)基中放在適宜的培養(yǎng)基中,讓讓這些細胞生長和增殖這些細胞生長和增殖.2.原理：原理：細胞增殖細胞增殖1.概念概念3.過程：過程：動物胚胎或幼齡動動物胚胎或幼齡動物的組織、器官物的組織、器

5、官細胞懸浮液細胞懸浮液（單個細胞）單個細胞）胰蛋白酶胰蛋白酶動物組織細胞間隙中動物組織細胞間隙中含有一定量的彈性纖含有一定量的彈性纖維等蛋白質(zhì)，將細胞維等蛋白質(zhì)，將細胞網(wǎng)絡(luò)起來形成具有一網(wǎng)絡(luò)起來形成具有一定彈性和韌性的組織定彈性和韌性的組織和器官。和器官。（分解彈性纖維）（分解彈性纖維）10代細胞代細胞原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)50代細胞代細胞傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細胞株細胞株無限傳代無限傳代細胞系細胞系遺傳物質(zhì)遺傳物質(zhì)未改變未改變遺傳物質(zhì)遺傳物質(zhì)改變改變剪碎剪碎細胞株：細胞株：原代細胞一般傳至原代細胞一般傳至1010代左右細胞代左右細胞生長停滯，大部分細胞衰老死亡，少數(shù)細胞存生長停滯，大部分細胞衰老死亡，少

6、數(shù)細胞存活到活到40504050代，這種傳代細胞為細胞株。代，這種傳代細胞為細胞株。 細胞系：細胞系：細胞株傳代至細胞株傳代至5050代后又出現(xiàn)細胞代后又出現(xiàn)細胞生長停滯狀態(tài)，只有部分細胞由于遺傳物質(zhì)的生長停滯狀態(tài)，只有部分細胞由于遺傳物質(zhì)的改變，使其在培養(yǎng)條件下可以無限制傳代，這改變，使其在培養(yǎng)條件下可以無限制傳代，這種傳代細胞為細胞系。種傳代細胞為細胞系。 細胞株和細胞系的區(qū)別：細胞株和細胞系的區(qū)別： 細胞系的遺傳細胞系的遺傳物質(zhì)改變，具有癌細胞的特點，失去接觸抑制，物質(zhì)改變，具有癌細胞的特點，失去接觸抑制，容易傳代培養(yǎng)。容易傳代培養(yǎng)。原代培養(yǎng)：原代培養(yǎng)：將動物組織消化后的初次培養(yǎng)將動物組

7、織消化后的初次培養(yǎng)至細胞貼壁至細胞貼壁,稱為原代培養(yǎng)。稱為原代培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)：傳代培養(yǎng)：用胰蛋白酶將出現(xiàn)接觸抑制用胰蛋白酶將出現(xiàn)接觸抑制的貼壁細胞從培養(yǎng)瓶壁上脫離下來，制的貼壁細胞從培養(yǎng)瓶壁上脫離下來，制成細胞懸液，分裝到多個培養(yǎng)瓶中繼續(xù)成細胞懸液，分裝到多個培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，這個過程叫傳代培養(yǎng)。培養(yǎng)，這個過程叫傳代培養(yǎng)。 上述過程中，在第一培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)到上述過程中，在第一培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)到接觸抑制就是原代培養(yǎng)，之后轉(zhuǎn)移到其接觸抑制就是原代培養(yǎng)，之后轉(zhuǎn)移到其它培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)就是傳代培養(yǎng)它培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)就是傳代培養(yǎng)細胞接觸抑制細胞接觸抑制 細胞在貼壁生長過程中，隨著細胞分裂，數(shù)細胞在貼壁生長過程中，隨著

8、細胞分裂，數(shù)量不斷增加，最后形成一個單層，此時細胞間相量不斷增加，最后形成一個單層，此時細胞間相互接觸，細胞分裂和生長停止，數(shù)量不再增加。互接觸，細胞分裂和生長停止，數(shù)量不再增加。細胞在體外培養(yǎng)中所需的條件細胞在體外培養(yǎng)中所需的條件與體內(nèi)細胞基本相同。與體內(nèi)細胞基本相同。n【討論】【討論】多細胞動物和人體的細胞都生活在內(nèi)環(huán)境中，討論以下多細胞動物和人體的細胞都生活在內(nèi)環(huán)境中，討論以下問題：問題：1.體外培養(yǎng)細胞時需要提供哪些物質(zhì)？體外培養(yǎng)細胞時需要提供哪些物質(zhì)？ 提示：充足的營養(yǎng)供給、適宜的溫度、適宜的提示：充足的營養(yǎng)供給、適宜的溫度、適宜的pH和氣和氣體環(huán)境。體環(huán)境。2.體外培養(yǎng)的細胞需要什

9、么樣的環(huán)境條件？體外培養(yǎng)的細胞需要什么樣的環(huán)境條件？ 提示：無菌、無毒的環(huán)境。提示：無菌、無毒的環(huán)境。1、無菌、無毒的環(huán)境、無菌、無毒的環(huán)境 （添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）（添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）2、營養(yǎng)、營養(yǎng)（葡萄糖、氨基酸、無機鹽、微量元素、動物血清、血漿、葡萄糖、氨基酸、無機鹽、微量元素、動物血清、血漿、維生素、促生長因子等。維生素、促生長因子等。）3、溫度和、溫度和PH 36.5 +0.5度 ；PH為7.2-7.4。4、氣體環(huán)境：、氣體環(huán)境： O2和和CO2（95%空氣和空氣和5% CO2 ）補充合成培養(yǎng)基補充合成培養(yǎng)基中缺乏的物質(zhì)中缺乏的物質(zhì)4.動物細胞培養(yǎng)的條

10、件動物細胞培養(yǎng)的條件5.動物細胞培養(yǎng)的結(jié)果：動物細胞培養(yǎng)的結(jié)果：獲得細胞群獲得細胞群（1 1）生產(chǎn)蛋白質(zhì)生物制品：病毒疫苗、）生產(chǎn)蛋白質(zhì)生物制品：病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等。干擾素、單克隆抗體等。（2 2）獲得大量自身的皮膚細胞，用于）獲得大量自身的皮膚細胞，用于植皮。還可植皮。還可作為基因工程中的受體細胞。作為基因工程中的受體細胞。（3 3）用于檢測有毒物質(zhì)，判斷某種物）用于檢測有毒物質(zhì)，判斷某種物質(zhì)的毒性。質(zhì)的毒性。（4 4）用于生理、病理、藥理等方面的）用于生理、病理、藥理等方面的研究，為治療和預(yù)防疾病提供理論依據(jù)研究，為治療和預(yù)防疾病提供理論依據(jù)5.動物細胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用動物細胞培

11、養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用思考：思考：2、為什么選用動物胚胎或幼齡個體的器官或組織做動物細胞、為什么選用動物胚胎或幼齡個體的器官或組織做動物細胞培養(yǎng)材料？培養(yǎng)材料？1、動物細胞培養(yǎng)液的主要成分是什么？較植物組培培養(yǎng)基、動物細胞培養(yǎng)液的主要成分是什么？較植物組培培養(yǎng)基有何獨特之處？有何獨特之處？3、為什么培養(yǎng)前要將組織細胞分散成單個細胞？、為什么培養(yǎng)前要將組織細胞分散成單個細胞？4、動物細胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個、動物細胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個體？體？主要成分：葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和動物血清等。主要成分：葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和動物血清等。獨特之處

12、有：獨特之處有：1、液體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基 2、成分中有動物血清等、成分中有動物血清等因為這些組織或器官上的細胞生命力旺盛，分裂能力強因為這些組織或器官上的細胞生命力旺盛，分裂能力強使每一個細胞都能與培養(yǎng)液直接接觸并進行物質(zhì)交換，保使每一個細胞都能與培養(yǎng)液直接接觸并進行物質(zhì)交換，保證生命活動的正常進行。證生命活動的正常進行。不能，動物細胞培養(yǎng)只能使細胞數(shù)目增多，不能發(fā)育成新的不能，動物細胞培養(yǎng)只能使細胞數(shù)目增多，不能發(fā)育成新的動物個體動物個體獲得細胞獲得細胞細胞的全能性細胞的全能性細胞株、細胞系細胞株、細胞系植物體植物體培養(yǎng)結(jié)果培養(yǎng)結(jié)果或細胞分泌蛋白或細胞分泌蛋白快速繁殖、培育快速繁殖、培育無

13、病毒植株等無病毒植株等培養(yǎng)目的培養(yǎng)目的葡萄糖、動物血清葡萄糖、動物血清蔗糖、植物激素蔗糖、植物激素培養(yǎng)基特有成分培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質(zhì)培養(yǎng)基性質(zhì)細胞增殖原理原理動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項目比較項目2 2、植物組織培養(yǎng)和動物細胞培養(yǎng)的比較、植物組織培養(yǎng)和動物細胞培養(yǎng)的比較二、動物體細胞核移植技術(shù)二、動物體細胞核移植技術(shù):將動物的一個細胞的細胞核，移入一個已經(jīng)去掉細胞將動物的一個細胞的細胞核，移入一個已經(jīng)去掉細胞核的卵母細胞中，使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎，核的卵母細胞中，使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發(fā)育成動物個體。這個

14、新的胚胎最終發(fā)育成動物個體。用核移植的方法得到的動物用核移植的方法得到的動物稱為克隆動物稱為克隆動物核移植核移植胚胎細胞核移植胚胎細胞核移植體細胞核移植體細胞核移植（難度高難度高）受體細胞：受體細胞：M期的期的卵母細胞卵母細胞用核移植的方法得到的動物。用核移植的方法得到的動物。（M卵母細胞）卵母細胞）減數(shù)第二次分裂中期減數(shù)第二次分裂中期去核的卵母細去核的卵母細胞胞供體細胞供體細胞注入去核注入去核卵母細胞卵母細胞受體細胞激活，受體細胞激活，完成分裂、發(fā)完成分裂、發(fā)育育胚胎移胚胎移植植卵細胞卵細胞母綿羊母綿羊母綿羊母綿羊乳腺細胞乳腺細胞細胞質(zhì)細胞質(zhì)細胞核細胞核細胞核移植細胞核移植早期胚胎早期胚胎卵

15、裂卵裂C母綿羊子宮母綿羊子宮胚胎移植胚胎移植多莉羊多莉羊分娩分娩妊娠妊娠多莉羊的培育過程多莉羊的培育過程融合后的卵細胞融合后的卵細胞克隆羊的成功證明了什么？克隆羊的成功證明了什么？1、動物體細胞核具有全能性；、動物體細胞核具有全能性；2、細胞質(zhì)具有調(diào)控細胞核發(fā)育、細胞質(zhì)具有調(diào)控細胞核發(fā)育的作用。的作用。體細胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景體細胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景畜牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生以及其他領(lǐng)域有著廣泛應(yīng)用前畜牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生以及其他領(lǐng)域有著廣泛應(yīng)用前景景1加速加速家畜遺傳改良家畜遺傳改良進程，促進優(yōu)良畜群繁育進程，促進優(yōu)良畜群繁育2保護瀕危物種，增加動物保護瀕危物種，增加動物 的存活數(shù)量的存活數(shù)量3可作為生

16、物反應(yīng)器，生產(chǎn)醫(yī)用蛋白，克隆動物細可作為生物反應(yīng)器，生產(chǎn)醫(yī)用蛋白，克隆動物細胞、組織、器官可作為移植的供體，了解胚胎發(fā)胞、組織、器官可作為移植的供體，了解胚胎發(fā)育及衰老過程、做疾病模型等育及衰老過程、做疾病模型等體細胞核移植技術(shù)存在的問題體細胞核移植技術(shù)存在的問題1.許多克隆動物表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷，如體型過許多克隆動物表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷，如體型過大，異常肥胖，發(fā)育困難，免疫失調(diào)等。大，異常肥胖，發(fā)育困難，免疫失調(diào)等。2.成功率非常低及克隆動物食品的安全性問題。成功率非常低及克隆動物食品的安全性問題。胚胎移植技術(shù)胚胎移植技術(shù)試管動物（嬰兒）培養(yǎng)過程試管動物（嬰兒）培養(yǎng)過程卵細胞卵細胞精子精子

17、體外受精體外受精受精卵受精卵胚胎胚胎新個體新個體母體子宮內(nèi)母體子宮內(nèi)孕育、產(chǎn)出孕育、產(chǎn)出克隆動物的研究意義克隆動物的研究意義1. 1.克隆動物作為生物反應(yīng)器克隆動物作為生物反應(yīng)器，生產(chǎn)醫(yī)用蛋白，生產(chǎn)醫(yī)用蛋白2. 2.改良動物品種改良動物品種 3. 3.治療人類疾病，作為供體治療人類疾病，作為供體4. 4.保護瀕危動物保護瀕危動物2.某研究小組為測定藥物對體外培養(yǎng)細胞的毒性，某研究小組為測定藥物對體外培養(yǎng)細胞的毒性，準備對某種動物的肝腫瘤細胞準備對某種動物的肝腫瘤細胞(甲甲)和正常肝細胞和正常肝細胞(乙乙)進行動物細胞培養(yǎng)。下列說法正確的是進行動物細胞培養(yǎng)。下列說法正確的是()A在利用兩種肝組織

18、塊制備肝細胞懸液時，也可在利用兩種肝組織塊制備肝細胞懸液時，也可用胃蛋白酶處理用胃蛋白酶處理B細胞培養(yǎng)應(yīng)在含細胞培養(yǎng)應(yīng)在含5%CO2的恒溫培養(yǎng)箱中進行，的恒溫培養(yǎng)箱中進行，CO2的作用是刺激細胞的呼吸的作用是刺激細胞的呼吸C甲、乙細胞在持續(xù)的原代培養(yǎng)過程中，乙會出甲、乙細胞在持續(xù)的原代培養(yǎng)過程中，乙會出現(xiàn)停止增殖的現(xiàn)象現(xiàn)停止增殖的現(xiàn)象D僅用該培養(yǎng)液也能用來培養(yǎng)乙肝病毒僅用該培養(yǎng)液也能用來培養(yǎng)乙肝病毒c1(2009浙江卷浙江卷)用動、植物成體的體細胞進用動、植物成體的體細胞進行離體培養(yǎng)，下列敘述正確的是行離體培養(yǎng)，下列敘述正確的是()A都需要用都需要用CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)箱B都需要用液體培養(yǎng)基都需要

19、用液體培養(yǎng)基C都要在無菌條件下進行都要在無菌條件下進行D都可體現(xiàn)細胞的全能性都可體現(xiàn)細胞的全能性C誘導方式誘導方式物理法物理法化學法化學法生物法：生物法： 滅活的病毒滅活的病毒仙臺病毒仙臺病毒紫外線紫外線喪失感染性喪失感染性（不感染細胞）（不感染細胞）保留融合活性保留融合活性 （誘導細胞融合）（誘導細胞融合）一、動物細胞融合一、動物細胞融合1.方法方法2.滅活病毒誘導細胞融合的原理：滅活病毒誘導細胞融合的原理：n病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細胞互相凝胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細胞互相凝聚，細胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重聚，

20、細胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細胞膜打開，細胞發(fā)生融合。新排布，細胞膜打開，細胞發(fā)生融合。n滅活是指用物理或化學手段使病毒或細菌滅活是指用物理或化學手段使病毒或細菌失去感染能力，但并不破壞這些病原體的失去感染能力，但并不破壞這些病原體的抗原結(jié)構(gòu)?？乖Y(jié)構(gòu)。3.用途：制備單克隆抗體用途：制備單克隆抗體滅活的病毒顆粒滅活的病毒顆粒黏附于細胞表面黏附于細胞表面細胞膜被病毒顆細胞膜被病毒顆粒穿通粒穿通細胞膜連接細胞膜連接細胞融合，形成雜種細胞細胞融合，形成雜種細胞（細胞膜具有一定的流動性）（細胞膜具有一定的流動性）細胞核細胞核病毒顆粒病毒顆粒細胞核細胞核 動物細胞融合過程示意圖動物細胞融合過

21、程示意圖二、單克隆抗體二、單克隆抗體什么是抗體？什么是抗體？ 抗體是機體受抗原刺激后產(chǎn)生的、抗體是機體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。免疫功能的球蛋白。B淋巴細胞產(chǎn)生抗體。淋巴細胞產(chǎn)生抗體。B淋巴細胞與抗體淋巴細胞與抗體B淋巴細胞受抗原刺激后，可以淋巴細胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生抗體。產(chǎn)生抗體。動物體內(nèi)的動物體內(nèi)的B淋巴細胞可以產(chǎn)生淋巴細胞可以產(chǎn)生百萬種以上的抗體，每種抗體對特定的抗百萬種以上的抗體，每種抗體對特定的抗原具有特異性免疫作用。原具有特異性免疫作用。每一個淋巴細胞只能產(chǎn)生一種抗每一個淋巴細胞只能產(chǎn)生一種抗體。體。單

22、克隆抗體單克隆抗體 由單個由單個B淋巴細胞經(jīng)過無性繁殖淋巴細胞經(jīng)過無性繁殖（克?。纬苫蛐拖嗤募毎?，（克隆），形成基因型相同的細胞群，這一細胞群所產(chǎn)生的化學性質(zhì)單一、特這一細胞群所產(chǎn)生的化學性質(zhì)單一、特異性強的抗體稱為異性強的抗體稱為單克隆抗體。單克隆抗體。 特點：特點：特異性強、靈敏度高特異性強、靈敏度高 單單: 單個細胞單個細胞克隆克隆: 無性繁殖無性繁殖抗體抗體: 化學性質(zhì)單一、特異性強化學性質(zhì)單一、特異性強n體外培養(yǎng)的條件下，一個體外培養(yǎng)的條件下，一個B淋巴細胞是不可淋巴細胞是不可能無限增值的，如何使單個淋巴細胞增殖呢？能無限增值的，如何使單個淋巴細胞增殖呢？如何大量生產(chǎn)單克隆

23、抗體？如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？n利用淋巴細胞產(chǎn)生抗體的功能利用淋巴細胞產(chǎn)生抗體的功能n利用腫瘤細胞無限增殖的特性利用腫瘤細胞無限增殖的特性n利用細胞融合的技術(shù)將兩種細胞融合利用細胞融合的技術(shù)將兩種細胞融合獲得具有淋巴細胞和腫瘤細胞特性的獲得具有淋巴細胞和腫瘤細胞特性的雜交瘤細胞雜交瘤細胞n利用動物細胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交利用動物細胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細胞瘤細胞1 1、單克隆抗體制備過程、單克隆抗體制備過程 注射注射 抗原抗原效應(yīng)效應(yīng)B淋巴淋巴細胞細胞骨髓瘤細胞骨髓瘤細胞細胞融合、篩選細胞融合、篩選雜交瘤細胞雜交瘤細胞細胞培養(yǎng)細胞培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細胞群特定抗體的細胞群體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔單克隆抗體單克隆抗體誘導其融合的方誘導其融合的方法有哪些？法有哪些？思考：思考：1、本過程利用了哪些原理？、本過程利用了哪些原理？免疫原理，細胞融合原理和動物免疫原理，細胞融合原理和動物細胞培養(yǎng)原理細胞培養(yǎng)原理2、為什么選用小鼠骨髓瘤細胞與、為什么選用小鼠骨髓瘤細胞與B細細胞融合？胞融合？這樣融合成的雜交瘤細胞，繼承了雙這樣融合成的雜交瘤細胞，繼承了雙親細胞的遺傳物質(zhì)，不僅具有親細胞的遺傳物質(zhì)，不僅具有B細胞分細胞分泌抗體的能力，而且還有無限增殖的泌抗體的能力，而且還有無限增殖的本領(lǐng)，因而可以獲得大量單克隆抗體