松果菊苷抗氧化作用研究

1、松果菊苷抗氧化作用研究【摘要】目的 研究管花肉蓯蓉中松果菊苷(echinacoside, ECH)抗氧化、耐缺氧、抗疲勞等抗衰老作用。 方法 以維生素E VE, 100 mg/(kgd)為對照，觀察低、中、高劑量 10 mg/(kgd)、20 mg/(kgd)、40 mg/(kgd) ECH對正常健康小鼠和D半乳糖亞急性衰老模型小鼠的影響。測定正常小鼠常壓耐缺氧和負重游泳時間，檢測衰老小鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性，丙二醛(MDA)含量，放射免疫法測定外周血白介素2(IL2)含量。計算亞急性衰老模型小鼠的脾指數(shù)和胸腺指數(shù)。 結(jié)果 ECH和VE能夠延長健康小鼠常壓耐缺氧和負重游泳時間(P

2、0.01);ECH和VE能提高衰老小鼠血清SOD活性(P0.01)，降低血清MDA含量(P0.01)，升高外周血IL2含量(P0.05)，增加脾指數(shù)(P95%，批號20060308)，磷酸緩沖液 (PBS, 50 mmol/L, pH 7.4)溶解，由和田帝辰沙生藥物有限公司提供;D半乳糖(Dgal)購自上海試劑二廠;VE購自東海制藥廠;超氧化物歧化酶(SOD)檢測試劑盒、丙二醛(MDA)檢測試劑盒均由南京建成生物研究所提供，其余試劑均為國產(chǎn)分析純。722分光光度計購自上海精密科學(xué)儀器有限公司;臺式低溫高速離心機購自德國Hettich公司;BP11OS電子天秤購自德國Sartorius公司;H

3、HW21600A電熱恒溫水箱購自黃石市恒豐醫(yī)療器械有限公司。1.2 常壓耐缺氧實驗3 健康ICR小鼠50只，分為5組，健康對照組、低劑量ECH健康組、中劑量ECH健康組、高劑量ECH健康組、VE健康組，低、中、高劑量ECH分別按10 mg/(kgd)、20 mg/(kgd)、40 mg/(kgd)的劑量(每10 g容量為0.2 ml)給藥，VE按100 mg/(kgd)給藥,正常組喂飼同體積的PBS溶媒，連續(xù)灌胃給藥10 d，末次給藥1 h后,將小鼠放入250 ml磨口瓶,瓶口以凡士林涂抹密封,瓶內(nèi)放置10 g鈉石灰,以小鼠停止呼吸為標準,觀察小鼠常壓耐缺氧時間。1.3 負重游泳實驗3 健康I

4、CR小鼠50只，分組及給藥方法同上，末次給藥1 h后,給小鼠尾部下2/3處負重其體質(zhì)量的5%，放入游泳測試箱中，水溫25 ，水深30 cm，以小鼠頭部沉入水面下時間10 s為標準,觀察游泳時間。1.4 亞急性衰老小鼠模型的制備及給藥 按文獻方法制備衰老小鼠模型4。注射用水配制10% Dgal，小鼠頸背部皮下注射10 ml/kg，每天1次，連續(xù)8周。小鼠隨機分為6組，即正常對照組、衰老模型組、低劑量ECH衰老組、中劑量ECH衰老組、高劑量ECH衰老組和VE衰老組，每組10只。衰老模型組、低、中、高劑量衰老組從第3周起，分別灌胃給予ECH 0、10、20、40 mg/kg，VE衰老組給予VE 10

5、0 mg/kg容量為20 ml/kg，1次/d，連續(xù)6周。正常對照組相應(yīng)注射同體積的注射用水和灌胃給予等體積的PBS溶媒。1.5 檢測指標及方法 8周后摘眼球取血，處死小鼠，分離血清，黃嘌呤氧化酶法測定SOD活力，硫代巴比妥酸法測定MDA含量，放射免疫法測定外周血IL2含量，具體操作按試劑盒說明進行。取脾、胸腺測定脾指數(shù)、胸腺指數(shù)(以臟器鮮重/體質(zhì)量表示)。1.6 統(tǒng)計學(xué)方法 實驗結(jié)果分析采用SPSS 16.0軟件進行單因素方差分析和組間t檢驗。2 結(jié)果2.1 ECH對小鼠常壓耐缺氧及負重游泳時間的影響低、中、高劑量ECH和VE均能提高小鼠常壓耐缺氧時間，高劑量ECH健康組與VE健康組相比，時

6、間延長差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01;與VE健康組比較，P0.012.2 ECH對衰老小鼠血清SOD活力和MDA含量的影響 與正常對照組比較，衰老模型組小鼠血清SOD顯著下降(P0.01);與衰老模型組相比，低、中、高ECH劑量和VE衰老組小鼠血清SOD活力均得到提高(P0.01)，且與ECH劑量呈相關(guān)性。與正常對照組相比，衰老模型組小鼠血清MDA明顯較高(P0.01);與衰老模型組相比，低、中、高劑量ECH組小鼠血清MDA含量均降低(P0.05)，表明ECH能劑量相關(guān)性降低衰老小鼠血清MDA含量。見表2。2.3 ECH對衰老小鼠外周血IL2含量的影響 與正常對照組相比，衰老模型組小鼠外周血I

7、L2含量顯著下降(P0.01);與衰老模型組相比，高劑量ECH衰老組小鼠外周血IL2含量顯著升高。見表2。2.4 ECH對衰老小鼠脾指數(shù)和胸腺指數(shù)的影響 與正常對照組相比，衰老模型組小鼠脾指數(shù)和胸腺指數(shù)均降低(P0.05，*P0.01;與衰老模型組比較，P0.05，P0.01;與VE衰老組比較，P0.05，P0.01;與高劑量ECH衰老組比較，#P0.013 討論現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認為，衰老與自由基損傷有密切聯(lián)系。自由基是機體代謝過程中產(chǎn)生的活潑基團，生理狀態(tài)下自由基呈動態(tài)平衡，維持正常生命狀態(tài)。自由基過多可氧化不飽和脂肪酸,生成脂質(zhì)過氧化物,損害生物膜,自由基還使DNA、RNA、蛋白質(zhì)變性,導(dǎo)致細胞正

8、常生理活動受損引起衰老57。Dgal衰老模型是由我國學(xué)者首次提出的8，此模型是一種從自由基角度反映老年癡呆的模型。動物長期注射Dgal使之大量集聚在細胞內(nèi)，引起細胞代謝紊亂，產(chǎn)生過量自由基，由于氧化應(yīng)激引起組織細胞功能損壞及氧化酶活力下降，過氧化物增多，最終導(dǎo)致細胞和組織衰老變化。許多實驗證據(jù)表明，Dgal所致亞急性衰老模型動物，就學(xué)習(xí)記憶、自由基和免疫等指標的變化而言，會出現(xiàn)一系列與自然衰老相似的改變9。機體內(nèi)SOD是清除自由基最有效酶之一10，它可以清除自由基，減少脂質(zhì)過氧化物的產(chǎn)生,其活性增高，間接證明組織清除自由基能力增強;MDA是自由基損傷不飽和脂肪酸生成的脂類過氧化分解產(chǎn)物，MDA

9、降低可間接證明組織中自由基水平降低11。有研究表明，MDA可引起精神行為改變，并通過交聯(lián)、結(jié)合形成脂褐質(zhì)(LF),引起神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙12。人體和動物的衰老與免疫防御功能的健全狀況有密切關(guān)系13。隨著年齡的增加，各免疫器官日漸萎縮，其中最明顯的是胸腺14。VE為自由基清除劑，公認的抗氧化抗衰老藥物，還有研究表明，VE可以抑制癌細胞端粒酶的活性，從而發(fā)揮抗癌作用，防治腫瘤和抗衰老很有可能是通過影響端粒酶活性而達到防治目的。本實驗以VE為對照，有助于客觀評價ECH抗衰老作用。ECH是管花肉蓯蓉的活性部位蓯蓉總苷中含量最高的苯乙醇苷類化合物。分子式為C35H46O20，化學(xué)結(jié)構(gòu)由苯丙烯基、糖基和苯乙

10、醇基3部分構(gòu)成，其中苯丙烯基和苯乙醇基上都帶有鄰位的酚羥基，這一結(jié)構(gòu)特點有利于清除活性氧自由基15。本實驗研究結(jié)果顯示ECH能夠提高健康小鼠常壓耐缺氧和負重游泳時間，可顯著提高亞急性衰老小鼠SOD的活性，并明顯降低亞急性衰老小鼠的血液中的脂質(zhì)過氧化物的含量，提高外周血IL2含量，增加衰老小鼠的脾指數(shù)和胸腺指數(shù)。這說明ECH具有調(diào)節(jié)衰老小鼠機體氧化/抗氧化平衡的功能，消除Dgal引起自由基產(chǎn)生的增多，提示ECH具有抗氧化，增強免疫力及延緩衰老的作用?！緟⒖嘉墨I】 1 Liu J. The reacher development of Cistanche on antiagingJ.Inf Tra

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