海南省漢、黎族人群缺失型α-地中海貧血的研究

1、海南省漢、黎族人群缺失型-地中海貧血的研究    關(guān)鍵詞：地中海貧血;聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）;少數(shù)民族;海南省  摘要:目的 研究海南省漢、黎族人群中東南亞型缺失（- SEA ）、右側(cè)缺失（- 3.7 ）和左側(cè)缺失（- 4.2 ）三種-地中海貧血缺失突變的攜帶率、基因頻率及基因型的分布特點(diǎn)。 方法 應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)直接篩查海南省漢、黎族人群中的東南亞型缺失（- SEA ）、右側(cè)缺失（- 3.7 ）和左側(cè)

2、缺失（- 4.2 ）三種-地中海貧血缺失突變。 結(jié)果 在197例海南漢族人中檢出25例-地中海貧血攜帶者，攜帶率為12.69%;三種-地中海貧血缺失突變的基因頻率為0.0635，其中- SEA 、- 3.7 和- 4.2 的基因頻率分別為0.0127、0.0305、0.0203，共發(fā)現(xiàn)- SEA /、- 3.7 /和- 4.2 /三種基因型，其中- SEA /5例，- 3.7 /12例，-

3、0;4.2 /8例。在201例海南黎族人中檢出114例-地中海貧血攜帶者，攜帶率為56.72%，三種-地中海貧血缺失突變的基因頻率為0.3607，其中- SEA 、- 3.7 和- 4.2 的基因頻率分別為0.3607、0.0075、0.1891，共發(fā)現(xiàn)- SEA /、- 3.7 /、- 3.7 /- 3.7 、- 3.7 /- 4.2 、- 4.2 /、和- 4.2 

4、;/- 4.2 六種基因型，其中- SEA /3例，- 3.7 /39例，- 3.7 /- 3.7 6例，- 3.7 /- 4.2 18例，- 4.2 /38例，- 4.2 /- 4.2 10例。 結(jié)論 海南省漢、黎族人群是-地中海貧血的高發(fā)群體。      關(guān)鍵詞:地中海貧血;聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）;少數(shù)民族;海南省  

5、60;   Investigation into the deletion types of-thalassemia in Han and LI Nationalities in Hainan Province. Abstract:Objective To investigate the incidences、the allelic frequencies and t

6、he genotypes frequencies of three-tha-lassemia deletion types（- SEA 、- 3.7 、- 4.2 ）and their distributions in Han and Li nationalities in Hainan Province. Methods Three-thalassemia

7、 deletion types，i.e Southeast Asia deletion（- SEA ），right deletion（- 3.7 ）and left deletion（- 4.2 ），were screened based on polymerase chain reaction（PCR）in Han and Li nationalities

8、 in Hainan. Results 25carriers were detected in197Han individuals，and the incidence of carriers was12.69%.The gene frequency of these three deletion types was0.0127，0.0305and0.0203respectively，to

9、tally0.0635in Han nationality in Hainan.Three genotypes of5（- SEA /）cases，12（- 3.7 /）cases and8（- 4.2 /）cases were detected.On the contrary，114carriers were detected from201individuals in Li

10、 nationality，and the incidence of carriers was56.72%.The gene frequency of these three deletion types was0.0075，01716and0.1891respec-tively，totally0.3607in Li nationality.Six genotypes were detected i

11、ncluding3（- SEA /）cases，39（- 3.7 /）cases，6（- 3.7 /- 3.7 ）cases，18（- 3.7 /- 4.2 ）cases，38（- 4.2 /）cases and10（- 4.2 /- 4.2 ）cases. Conclusion There is a high incidence of-

12、thalassemia in Han and Li nationalities in Hainan province.      Key words:Thalassemia;Polymerase chain reaction（PCR）;Minority nationality;Hainan Province         -地中海貧血（-地貧）是一種嚴(yán)重危

13、害人類健康的遺傳病，其主要特征是-珠蛋白鏈合成減少（ + 地貧）或缺如（ 0 地貧）。-地貧分子缺陷有基因的大片段缺失和非缺失突變兩大類 1 ，-珠蛋白基因缺失是導(dǎo)致-地貧的主要原因。目前全世界已發(fā)現(xiàn)了35種-珠蛋白基因缺失突變，在中國人中已發(fā)現(xiàn)7種，其中東南亞型缺失突變（- SEA ）、右側(cè)缺失型突變（- 3.7 ）和左側(cè)缺失型突變（- 4.2 ）三種突變類型是我國南方最常見的缺失類型 24 。為了研究海南省漢、黎族人群中-地中海貧血的發(fā)病率及其基因型的

14、分布特點(diǎn)，我們應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)直接篩查197例海南漢族人和201例海南黎族人中的東南亞型缺失、右側(cè)缺失和左側(cè)缺失這三種最常見的缺失型-地貧突變類型，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。      1 材料與方法       1.1 DNA樣品 用EDTA抗凝，采取海南省白沙、昌江、陵水、瓊中、保亭等縣正常體檢、兵檢和中小學(xué)生黎族人末梢血;采取海南省文昌市正常體檢、兵檢的海南籍漢族人群末梢血，按Lahiri等方法 5 提取DNA，陽性對(duì)照標(biāo)本由南方醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)遺

15、傳學(xué)教研室徐湘民教授惠贈(zèng)。      1.2 PCR擴(kuò)增 東南亞型缺失突變分析按文獻(xiàn) 6 進(jìn)行;右側(cè)缺失型突變和左側(cè)缺失型突變分析參照Amold S.-C.Tan 7 等報(bào)道合成引物。擴(kuò)增- SEA 、- 3.7 和- 4.2 的多重PCR體系均采用TaKaRa LA Taq  TMJ 及緩沖液（寶生物工程有限公司產(chǎn)品），PCR反應(yīng)體積為25l，在PCR緩沖液（1×G

16、C Buffer，2.5mmol/L MgCl 2 ）中含模板DNA0.2g，引物0.20.5mol/L，dNTP為200mol/L，1U Taq DNA聚合酶，循環(huán)參數(shù)為99變性5min，85加酶，56退火1min，72延伸2min，然后951min，561min，722min，30個(gè)循環(huán)后72延伸7min。擴(kuò)增產(chǎn)物在1%瓊脂糖凝膠中電泳，經(jīng)EB染色在紫外光燈下觀察結(jié)果并照相。 2 結(jié)果      2.1 - SEA 、- 3.7 和

17、- 4.2 缺失型突變的多重PCR擴(kuò)增 在PCR反應(yīng)體系中同時(shí)擴(kuò)增了2基因的一個(gè)1800bp的片段，用以判斷樣品DNA的2基因是否缺失，從而判斷-地中海貧血突變患者是雜合子還是純合子。無- SEA 、- 3.7 和- 4.2 缺失型突變的正常人DNA樣品經(jīng)PCR擴(kuò)增后只出現(xiàn)一條1800bp的2基因擴(kuò)增片段;東南亞缺失型雜合子（- SEA /）的DNA樣品經(jīng)PCR擴(kuò)增后除出現(xiàn)一條1800bp的2基因擴(kuò)增片段外，還出現(xiàn)一條740bp的特異擴(kuò)增片段;右側(cè)缺失型雜合子（- 3.7&#

18、160;/）的DNA樣品經(jīng)PCR擴(kuò)增后除出現(xiàn)一條1800bp的2基因擴(kuò)增片段外，還出現(xiàn)一條2022bp的特異擴(kuò)增片段;右側(cè)缺失型純合子（- 3.7 /- 3.7 ）的DNA樣品經(jīng)PCR擴(kuò)增后只出現(xiàn)一條2022bp的特異擴(kuò)增片段;左側(cè)缺失型雜合子（- 4.2 /）的DNA樣品經(jīng)PCR擴(kuò)增后除出現(xiàn)一條1800bp的2基因擴(kuò)增片段外，還出現(xiàn)一條1628bp的特異擴(kuò)增片段;左側(cè)缺失型純合子（- 4.2 /- 4.2 ）的DNA樣品經(jīng)PCR擴(kuò)增后只出現(xiàn)一條1628bp的特異擴(kuò)增片段;右側(cè)缺失型并左側(cè)缺失型雙重雜合子（- 3.7 /- 4.2 ）的DNA樣品經(jīng)PCR擴(kuò)增后同時(shí)出現(xiàn)2022bp和1628bp兩條特異擴(kuò)增片段。見圖1。 圖1 - SEA 、- 3.7 和- 4.2 缺失型突變的多重PCR檢測(cè)結(jié)果（略） Fig1 The PCR-amplified result of- SEA 、- 3.7