蘆丁與綠原酸協(xié)同抗氧化活性研究-

1、第38卷 第5期陜西師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版Vol.38 N o.52010年9月Journal of Shaanxi Normal U niversity (Natur al Science EditionSep.2010文章編號:167224291(20100520061204收稿日期:2009209215基金項(xiàng)目:國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(20175012.作者簡介:賈貴東,男,碩士,主要研究方向?yàn)樘烊划a(chǎn)物的分離及功能評價.*通信作者:楊建雄,男,教授.E 2mail:jxyang.蘆丁與綠原酸協(xié)同抗氧化活性研究賈貴東, 楊建雄*, 王 莉, 樊 進(jìn)(陜西師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,陜西西安7

2、10062摘 要:為研究蘆丁與綠原酸協(xié)同抗氧化活性,測定了蘆丁與綠原酸以不同濃度組合后的抗氧化活性,包括對1,12二苯基222苦苯肼(DPPH 自由基、超氧(O -#2自由基的清除作用,以及對Fe 2+誘導(dǎo)的脂質(zhì)過氧化的抑制作用.結(jié)果表明:蘆丁與綠原酸組合后比各自單獨(dú)時具有更好的抗氧化活性,在三種檢測體系中二者的最大協(xié)同作用(實(shí)驗(yàn)清除率/理論清除率分別是1121(DPPH 、1138(O -#2、1112(脂質(zhì)過氧化.關(guān)鍵詞:綠原酸;蘆丁;協(xié)同作用;抗氧化;1,12二苯基222苦苯肼中圖分類號:R284.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼:ASynergistic antioxidative activities

3、 of rutin and chlorogenic acid(CGAJIA Gui 2dong ,YANG Jian 2xiong *,WANG Li ,FAN Jin(College of Life Science,Shaanxi N ormal Univer sity,Xi c an 710062,Shaanxi,ChinaAbstr act:In order to investigate synergistic antioxidative activities of rutin and chlorogenic acid (CGA ,the antioxidative activities

4、 of the mixtur e of rutin and CGA with differ ent ratio were measur ed,including the scavenging activities against 1,12diphenyl 222picrylhydrazyl (DPPH and superoxide anion (O -#2free radicals,and also inhibitory ability against lipid peroxidation induced by Fe 2+.T he results showed that combinatio

5、ns between rutin and CGA had better antioxidative activity.T he highest synergistic effects (the tatio of exper imental scavenging to theoretical scavengingin three different assay systems were 1121(DPPH ,1138(O -#2,and 1112(lipid peroxidation,respectively.Key words:chlorogenic acid (CGA ;rutin;syne

6、r gistic effect;antioxidant;1,12diphenyl 222picr ylhydrazyl綠原酸是由咖啡酸(Caffeic acid與奎尼酸(Quinic acid生成的縮酚酸,廣泛存在于高等雙子葉植物和蕨類植物中,是許多中草藥如金銀花、杜仲等的主要有效成分,是某些中藥制劑的質(zhì)量控制指標(biāo),也是眾多水果蔬菜中的重要活性成分1.研究表明,綠原酸具有抗氧化、抗菌消炎、抗病毒、降糖、降脂、保肝利膽等多種功效2.近年來報(bào)道綠原酸可抑制大腸癌和肝癌3,有抗焦慮作用4.一般認(rèn)為,綠原酸的生物活性與其能夠清除自由基有關(guān).蘆丁又名蕓香苷,是廣泛存在于許多水果和蔬菜中的小分子多酚類化合

7、物.近年研究表明,蘆丁及其衍生物具有抗氧化活性526,和廣泛藥理活性,如抗痙攣、抗癌7、抗血小板、抗病毒8,臨床用于防止腦溢血、高血壓等心腦血管疾病9.生物材料中的抗氧化活性成分往往是混合存在的,其抗氧化特性可能是不同抗氧化劑相互作用的結(jié)果,表現(xiàn)為協(xié)同作用,負(fù)協(xié)同作用,或累加效應(yīng)10211.此外,中藥的不同配伍對治療不同疾病差異顯著.所以,有必要研究不同抗氧化劑的相互作用.綠原酸和蘆丁的體外協(xié)同抗氧化活性研究未見報(bào)62 陜西師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版第38卷道,因此,本研究采用三種不同化學(xué)體系檢測二者的協(xié)同作用,促進(jìn)二者在醫(yī)藥、食品及化妝品中的應(yīng)用.1 材料和方法1.1 試劑綠原酸(CGA 由湖

8、南省瀏陽市艾特天然產(chǎn)物研究與開發(fā)有限公司提供;蘆丁(Rutin、吩嗪硫酸甲脂(PMS 、1,12二苯基222苦苯肼自由基(DPPH 、三氯乙酸(TCA購自美國Sigma 公司;氮藍(lán)四唑(NBT 、還原型輔酶(NADH 購自德國Applichem 公司,硫代巴比妥酸(TBA、甲醇、硫酸亞鐵(FeSO 4以及無水乙醇均為國產(chǎn)分析純.1.2 方法1.2.1 DPPH 自由基清除能力的測定 采用DPPH 氧化法12:取1mL 不同濃度的三種樣品溶液(蘆丁、綠原酸、蘆丁與綠原酸混合溶液,分別加入3mL 0.004%的DPPH 甲醇溶液,室溫靜置30min,測定A 517nm (以甲醇為空白調(diào)零,陰性對照

9、不加樣.1.2.2 超氧陰離子清除作用的測定 采用NADH 2PMS 2NBT 反應(yīng)體系12:取1mL 不同濃度的三種樣品溶液,分別加入1mL NADH (468L mol /L、1mL NBT (78L mol /L 、0.4mL PMS (60L mol /L混勻,室溫放置5min,測定A 560nm (以蒸餾水代替PMS 作空白調(diào)零,陰性對照不加樣.1.2.3 抑制脂質(zhì)過氧化的測定 參照文獻(xiàn)13的方法并做適當(dāng)修改:用pH 值為714,01l mol /L 磷酸緩沖液(PBS以1B 50稀釋卵黃,取1mL 不同濃度的三種樣品溶液分別加入012mL 卵黃懸濁液、012mLFeSO 4、016

10、mLPBS,混勻后37e 水浴20min 誘導(dǎo)脂質(zhì)過氧化,然后加入110mL20%T CA 搖勻,室溫靜置10min,3500r /m in 離心15min;取2mL 上清液,加110mL 018%T BA 混勻,沸水浴15min;冷卻后測定A 532nm (以蒸餾水代替T BA 溶液作為空白調(diào)零,陰性對照不加樣.1.2.4 協(xié)同作用的計(jì)算 根據(jù)文獻(xiàn)11實(shí)驗(yàn)清除率或抑制率(ESC的計(jì)算公式為:ESC(%=(A 0-A s 100/A 0;理論清除率或抑制率(T SC的計(jì)算公式為:T SC(%=100-(100-ESC 1(100-ESC 2/100;其中A 0,A s 分別為陰性和樣品吸光度值

11、,ESC 1、ESC 2為兩樣品實(shí)驗(yàn)清除率或抑制率,協(xié)同作用(SE=ESC /T SC,SE1表示具有協(xié)同作用.1.3 統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù)用Excel 處理,以x -?S 表示.2 結(jié)果與討論2.1 蘆丁和綠原酸對DPPH 自由基清除的協(xié)同作用DPPH 是一種穩(wěn)定的以氮為中心的自由基,其甲醇溶液呈深紫色,在517nm 處有一吸收峰.DPPH 自由基與反應(yīng)體系中自由基清除劑提供的質(zhì)子結(jié)合后,溶液由紫色變?yōu)辄S色.因此,可根據(jù)A 517nm 的變化來評價樣品的抗氧化能力14.由圖12A 知,蘆丁和綠原酸以不同濃度組合后,對DPPH 自由基的清除能力隨組合濃度升高而增強(qiáng),最高達(dá)90123%?215.二者的濃

12、度影響它們之間的協(xié)同作用,蘆丁與綠原酸的組合濃度分別為5L mol /L 和20L mol /L 時,SE 高達(dá)1121(圖1,b. 圖1 蘆丁和綠原酸以不同濃度組合后對DPPH 自由基的清除率(a及協(xié)同作用(b( x ?S,n =3Fig.1 Scavenging eff ects of the mixtur e of r utin and CGA in differ ent concentr ation combinations onDPPH ra dical (aand syner gistic ef fects (b( x ?S,n =3第5期賈貴東等:蘆丁與綠原酸協(xié)同抗氧化活性研究6

13、32.2 蘆丁和綠原酸對O -#2自由基清除的協(xié)同作用O -#2自由基是O -#2的還原形式,是生物體內(nèi)線粒體電子傳遞過程中產(chǎn)生的主要自由基,其本身氧化性較弱,但它會分解成氧化性更強(qiáng)的單線態(tài)氧自由基或羥自由基,造成生物大分子的氧化損傷15.由圖2a 知,當(dāng)蘆丁與綠原酸以不同濃度組合后,低濃度(50L mol /L CGA 組,實(shí)驗(yàn)清除率均小于理論清除率;高濃度蘆丁(100L mol /L 組,結(jié)果類似,表現(xiàn)為負(fù)協(xié)同(SE1或累加效應(yīng)(SE =1;但CGA 濃度為100L mol /L 或150L mol /L ,蘆丁濃度為20L mol /L 或50L mol /L 組合,表現(xiàn)出較明顯的協(xié)同作

14、用,最大SE=1138(圖2,b. 圖2 蘆丁和綠原酸以不同濃度組合后對O -#2自由基的清除率(a及協(xié)同作用(b( x ?S,n =3Fig.2 Scavenging eff ects of the mixtur e of r utin and CGA in differ ent concentr ation combinations onO -#2r adica l (aand synergistic effects (b( x ?S,n =32.3 蘆丁和綠原酸對抑制脂質(zhì)過氧化的協(xié)同作用脂質(zhì)過氧化會形成許多降解產(chǎn)物如MDA,并伴隨著自由基的產(chǎn)生,過氧化物在酸性條件下加熱與TBA 反應(yīng)生成

15、的紅色絡(luò)合物在532nm 處有特征吸收峰.圖3a 表明,當(dāng)蘆丁與綠原酸以不同濃度組合后,具有較強(qiáng)的抑制脂質(zhì)過氧化能力,最大抑制率為88158%?217.當(dāng)CGA 濃度一定,蘆丁濃度為100L mol /L 或300L mol /L 時,表現(xiàn)為負(fù)協(xié)同(SE 1,但蘆丁濃度為200L mol /L 時,隨著CGA 濃度的增加,呈現(xiàn)協(xié)同作用,最大SE =1.12(圖3,b.提示SE 可能主要取決于蘆丁的濃度,過高或過低的蘆丁濃度均不利于CGA 與其在脂質(zhì)微環(huán)境中的協(xié)同作用. 圖3 蘆丁和綠原酸以不同濃度組合后對脂質(zhì)過氧化的抑制率(a及協(xié)同作用(b( x ?S,n =3Fig.3 Inhibition

16、 effet of the mixtone of r utin a nd CGA in dif fer ent concentration combinations onlipid per oxida tion (aand syner gistic ef fects (b( x ?S,n =364陜西師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版第38卷3結(jié)論蘆丁與綠原酸是兩種常見的多酚類化合物,廣泛存在于各種水果、蔬菜、及中藥中.本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明,蘆丁與綠原酸以一定的濃度組合后,在三個體外抗氧化體系中均表現(xiàn)出良好的協(xié)同作用,SE的最大值分別為1121(DPPH、1138(O-#2、1112(脂質(zhì)過氧化,但二者的濃

17、度過高或過低都不利于協(xié)同作用.二者的協(xié)同作用與各自的理化特性,如溶解度、化學(xué)結(jié)構(gòu)以及相互作用的微環(huán)境等有關(guān),其作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究.參考文獻(xiàn):1高錦明,張鞍靈,張康健,等.綠原酸分布、提取與生物活性研究綜述J.西北林學(xué)院學(xué)報(bào),1999,14(2:73282. 2關(guān)炳峰,譚軍,周志娣.金銀花提取物的抗氧化作用與其綠原酸含量的相關(guān)性研究J.食品工業(yè)科技.2007,28(10:1272129.3Xiang Zhinan,Ning Zhengxiang.Scavenging and antioxi2dant proper ties of compound derived fr om chlor og

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