苯磺酸氨氯地平片劑含量的HPLC測定

1、苯磺酸氨氯地平片劑含量的HPLC測定（單點校正法）一、 目的要求1. 學習高效液相色譜儀器的基本使用方法。2. 掌握單點校正法的色譜定量分析方法。二、 基本原理 苯磺酸氨氯地平為抗心律失常藥，臨床主要用于治療高血壓和心絞痛。采用非極性的十八烷基鍵合相（ODS）為固定相和極性的甲醇水溶液為流動相的反相分離模式適合于苯磺酸氨氯地平片劑含量的測定，空白輔料均無干擾?？梢杂脝吸c校正法直接進行分析測定。 wi = ci =三、 實驗條件a) 高效液相色譜儀（配紫外檢測器），以色譜工作站聯(lián)機控制儀器、處理實驗數(shù)據(jù)。超聲波清洗機進樣器：手動進樣器，100L微量注射器色譜柱：C18 0.5m，250×

2、;4.6mmb) 分離條件流動相比例：甲醇0.03 mol·L-1磷酸二氫鉀溶液(6535)進樣量：20 L檢測波長：237 nm流動相流量： 1.0 mL/min四、 實驗步驟a) 按儀器的要求打開計算機和液相色譜主機，調(diào)整好流動相的流量、檢測波長等參數(shù)，用流動相沖洗色譜柱，直至工作站上色譜流出曲線為一平直的基線。b) 稱取苯磺酸氨氯地平對照品約50 mg，置50mL量瓶中，加甲醇適量，超聲10min使溶解，并加甲醇至刻度，搖勻得1.0 mg/mL貯備液。精密量取1.0 mg/mL貯備液5.0mL至50mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻、過濾，得100g/mL的對照品溶液。c)

3、取苯磺酸氨氯地平片劑10粒，研勻。精密稱取適量（相當于苯磺酸氨氯地平5mg）置50mL容量瓶中，加流動相超聲溶解，過濾，濾液作樣品溶液。d) 分別取苯磺酸氨氯地平對照品和樣品溶液20L進樣，記錄色譜圖。e) 根據(jù)對照品和樣品的峰面積，用單點校正法計算苯磺酸氨氯地平片劑的含量。五、問題討論1. 紫外檢測器是否適用于檢測所有的有機化合物？為什么？2. 為什么液相色譜多在室溫下進行分離檢測而氣相色譜法相對要在較高的柱溫下操作？  實驗?zāi)康模簩W習氧化還原滴定法的原理與實驗方法,各種滴定終點確定方法(VE曲線法,二次微商法)。實驗原理：用K2Cr2O7滴定Fe2+,其反應(yīng)式如下： K2Cr2O

4、7 +6Fe2+ +14H+2Cr3+ +6Fe3+ + H2O利用鉑電極作指示電極,飽和甘汞電極作參比電極,與被測溶液組成工作電池。在滴定過程中,隨著滴定劑的加入,鉑電極的電極電位發(fā)生變化。在化學計量點附近鉑電極的電極電位產(chǎn)生突躍,從而確定滴定終點。儀器和試劑:儀器：飽和甘汞電極  鉑電極 pHmv計  滴定管（酸式） 攪拌磁試劑：K2Cr2O7溶液（0.01mol/L）硫酸亞鐵銨溶液二苯胺磺酸鈉（指示劑）實驗步驟：1準備好鉑電極和飽和甘汞電極；在滴定管中加入重鉻酸鉀標準滴定溶液。2試樣的配制：在50mL燒杯中，將10mL Fe2+和8mL 3mol的H2SO4相混合；再

5、加入幾滴二苯胺磺酸鈉作指示劑。3用酸式滴定管裝入0.01mol/L：K2Cr2O7溶液，排氣泡，調(diào)零后置于鐵架臺上4試液中Fe2+含量的測定：開動攪拌磁子，待電位值穩(wěn)定后讀數(shù)。向燒杯中滴加K2Cr2O7 溶液，記錄滴定劑為1 mL，2 mL，3 mL，4 mL，4.4 mL,4.5 mL,4.6 mL,4.7 mL,4.8 mL,4.9 mL,5.0 mL,5.1 mL,5.2 mL,6.0 mL,7.0 mL,8.0 mL,9.0 mL處的電動勢值。5關(guān)閉儀器和攪拌電源開關(guān)。清洗滴定管,電極,燒杯并放回原處。6根據(jù)數(shù)據(jù)，給出E-V曲線，確定滴定終點；用二次微商法確定終點，比較兩種結(jié)果。實驗現(xiàn)

6、象：溶液因加入了指示劑，隨著K2Cr2O7溶液的加入，溶液由無色變成淺綠色最后變成紫色，可幫助指示滴定終點。當K2Cr2O7溶液加入的體積達到4.8mL時，電位發(fā)生突躍。實驗結(jié)果：1實驗數(shù)據(jù)記錄如下：V（K2Cr2O7）（mL）0.01.02.03.04.04.44.6電位數(shù)（V）-388-432-456-476-504-524-542 4.74.84.95.05.15.26.07.09.0-559-649-719-745-762-772-789-801-813 2E-V曲線：曲線上拐點對應(yīng)的體積即為滴定終點時所耗標準滴定溶液的體積。根據(jù)此曲線，當體積為4.8mL時，發(fā)生突

7、躍。此時電動勢數(shù)值為-649V。根據(jù)體積可計算出Fe2+ 的含量為0.0288 mol/L.3.二階微商法(計算法)滴定體積 V1 Vep V22E/V2作E-V曲線所用數(shù)據(jù)作E/V -V曲線所用數(shù)據(jù)作2E/V 2-V曲線所用數(shù)據(jù)加K2Cr2O7溶液體積V/mLE-mVE/mVV/mLE/V加K2Cr2O7溶液體積V/mL2E/V 2加K2Cr2O7溶液體積V/mL0.0-388-441.0-440.520 1.01.0-432-241.0-241.52.0-456-201.0-202.542.03.0-476-281.0-283.5-83.04.0-504-200.4-504.2-

8、31.43.854.4-524-180.2-904.5-133.34.354.6-542-170.1-1704.65-533.34.5754.7-559-900.1-9004.75-73004.74.8-649-700.1-7004.8520004.84.9-719-260.1-2604.9544004.95.0-745-170.1-1705.059005.005.1-762-100.1-1005.157005.3755.2-772-170.8-21.35.6174.895.3756.0-789-121.0-126.510.336.057.0-801-122.0-68.047.259.0-81

9、3計算如下：加入4.7mL時，2E/V 2=-7300;       加入4.8 mL時，2E/V 2=2000滴定劑體積/mL    4.7    x     4.82E/V 2         -7300   0     20004.8-4.7=x-4.72000+73000+7300x=4.7

10、8mL4.2E/V 2 - V曲線: 此曲線最高點與最低點連線與橫坐標的交點即為滴定終點體積實驗討論：1.電位滴定:  每滴加一次滴定劑，平衡后測量電動勢。關(guān)鍵: 確定滴定反應(yīng)的化學計量點時,所消耗的滴定劑的體積;快速滴定尋找化學計量點所在的大致范圍;突躍范圍內(nèi)每次滴加體積控制在0.1mL;記錄每次滴定時的滴定劑用量（V）和相應(yīng)的電動勢數(shù)值（E），作圖得到滴定曲線。2.電位滴定終點確定方法(1)E-V曲線法：圖（a）      簡單，準確性稍差。       

11、60;   (2)E/V - V曲線法：圖（b）   一階微商由電位改變量與滴定劑體積增量之比計算之。曲線上存在著極值點，該點對應(yīng)著E-V 曲線中的拐點。3)2E/V 2 - V曲線法：圖（c）。靈敏準確且不受試液底色的影響。 2E/V 2二階微商計算：     3在計量點時，二苯胺磺酸鈉顏色如何變化二苯胺磺酸鈉的氧化態(tài)為紫色，還原態(tài)為無色，變色的條件電極電位為0.85V。變色范圍為0.85±0.059/2V，用K2Cr2O7滴定Fe2+的突躍范圍的電位正好將指示劑的變色范圍

12、包含在內(nèi)，故計量點時，指示劑由無色而氧化為紫色。4在本實驗中為何要加H2SO4及H3PO4？    K2Cr2O7在酸性溶液中顯示很強的氧化能力，因此要加1 mol/L H2SO4，此時Cr2O72-Cr3的條件電極電位為1.08，能使Fe2+氧化為Fe3+。    在1 mol/L H2SO4中EFe3+Fe2+0.68V，加入1：3（VV）的H3PO4后由于PO43-與Fe3+形成穩(wěn)定的無色絡(luò)離子Fe(PO4)23-，而使Fe3+Fe2+電對的條件電極電位降低，所以在有H3PO4存在的H2SO4介質(zhì)中滴定Fe2+時，起始條件電極電

13、位最低，滴定突躍最長。5. 從EV曲線上確定的計量點位置，是否位于突躍的中點？為什么？    從EV曲線上確定的計量點位置，并不位于突躍的中點，因為在該氧化還原反應(yīng)中所涉及的二個半反應(yīng)為：                     Fe2+ e Fe3+          

14、;                 n11              Cr2O72- 14H 6e 2Cr37H2O                n26

15、60;   n1n2，所以等當點并不在滴定突躍的中點，而是偏向電子轉(zhuǎn)移數(shù)較多的Cr2O72-一方。在這里是用K2Cr2O7滴定Fe2+，因此等當點偏向于滴定突躍的末端。6為什么氧化還原滴定可以用鉑電極作為指示電極鉑是一種性質(zhì)穩(wěn)定的惰性金屬，當鉑電極插入可溶性氧化態(tài)或還原態(tài)物質(zhì)的滴定溶液中，電極本身并不參加反應(yīng)，而是作為一個導體，在這里僅起傳導電子的作用,沒有離子穿越相界面.。為物質(zhì)的氧化態(tài)(Fe3+)和還原態(tài)(Fe2)轉(zhuǎn)移電子提供了場所，它能顯示溶液中對應(yīng)的氧化態(tài)和還原態(tài)離子濃度間的關(guān)系，因而可在氧化還原滴定中用作指示電極。目的與要求1、掌握吸收曲線的測定與繪制方法 2、掌

16、握直接比較法定量的方法 3、熟悉紫外分光光度計的使用方法原理樣品中的苯甲酸在酸性條件下可用水蒸氣蒸餾法提取，在堿性條件下形成苯甲酸鹽。苯甲酸及其鹽對紫外光有選擇性吸收，其吸收光譜的最大吸收波長在225nm左右。 用紫外可見分光光度計可測定物質(zhì)在紫外光區(qū)、可見光區(qū)的吸收光譜，并可定量測定。儀器與試劑1、儀器 751型分光光度計；1cm石英吸收池一套；50ml容量瓶二只；刻度吸管5ml、10ml各一只；滴管一只。 2、試劑 苯甲酸標準儲備液（1ml相當于0.1mg苯甲酸）；0.1mol/L、0.01mol/L氫氧化鈉溶液。操作步驟操作步驟1、苯甲酸吸收曲線的繪制 取苯甲酸儲備液4.00ml，置于50ml容量瓶中，用0.01mol/L氫氧化鈉溶液定容，搖勻。此液1ml相當于8g苯甲酸。 測定條件：氫燈，1cm石英比色皿，0.01mol/L氫氧化鈉為參比測定波長：從210nm-240nm每隔一定波長（2nm-5nm）測定一次吸光度，在225nm左右隔1nm測定一次