pcr質(zhì)量手冊(cè)前言.doc

1、文件編號(hào)版本 第二版某某省某某醫(yī)院臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室建于 2003年12月。實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置、設(shè)備及人員配置均嚴(yán)格按照部、省臨床基因診斷實(shí)驗(yàn)室規(guī)范化標(biāo)準(zhǔn)結(jié)合自身?xiàng)l件而建立。各項(xiàng)管理制度、質(zhì)量保證體系以及基本操作要求和標(biāo)準(zhǔn)操作程 序均已制定。某某省某某醫(yī)院臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室將面向全省衛(wèi)生系統(tǒng)，開展臨床基因診斷實(shí)驗(yàn)和相關(guān)知識(shí)的培訓(xùn)工作，使被培訓(xùn)人員掌握臨床基因診斷基礎(chǔ)理論知 識(shí)、實(shí)驗(yàn)室管理和質(zhì)量保證措施、規(guī)范化操作方法以及了解基因診斷領(lǐng)域的進(jìn)展。 同時(shí)還將開展基因（主要是遺傳基因方面）的臨床檢測(cè)及科學(xué)研究工作，為我省 臨床基因診斷事業(yè)的發(fā)展做出一份貢獻(xiàn)。質(zhì)量方針臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室是嚴(yán)格按照

2、部、省臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室規(guī)范化標(biāo)準(zhǔn) 進(jìn)行管理與操作，始終遵循：以病人為中心以質(zhì)量為核心以科學(xué)為依據(jù)崗位職責(zé)1 .實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人崗位職責(zé)(1)確定質(zhì)量方針，編制質(zhì)量手冊(cè)，并組織人員學(xué)習(xí)，統(tǒng)一思想。(2)負(fù)責(zé)實(shí)驗(yàn)室全面質(zhì)量，包括試劑盒的質(zhì)量檢驗(yàn)；操作的質(zhì)量檢查； 質(zhì)量控制(室內(nèi)室間質(zhì)評(píng))的結(jié)果檢查；實(shí)驗(yàn)結(jié)果的核對(duì)、質(zhì)檢和簽發(fā)報(bào)告；確 定人員培訓(xùn)計(jì)劃；安排日常工作，確保及時(shí)發(fā)出質(zhì)量合格的報(bào)告。(3)定期審核和評(píng)審質(zhì)量手冊(cè)的運(yùn)行情況。(4)對(duì)實(shí)驗(yàn)室對(duì)內(nèi)外發(fā)出的報(bào)告負(fù)責(zé)，并以簽名簽字形式表示。2 .技術(shù)人員崗位職責(zé)(1)按時(shí)消毒、清潔實(shí)驗(yàn)室，并記錄簽字。(2)檢查儀器設(shè)備的維護(hù)狀況，記錄使用情況并簽字。(

3、3)按質(zhì)量手冊(cè)規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP)操作試驗(yàn)，并填寫報(bào)告簽字(4)按規(guī)定進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的自主質(zhì)控工作(每次試驗(yàn)必須有室內(nèi)質(zhì)控措施) 并做好記錄簽字。人員培訓(xùn)及成果1 .人員組成及技術(shù)檔案本室有工作人員2人，其中1名中級(jí)，1名初級(jí)。2 .培訓(xùn)記錄及專業(yè)文章發(fā)表情況編制：日期：審批：日期：#文件編號(hào)版本 第二版實(shí)驗(yàn)室設(shè)施環(huán)境及規(guī)章制度1、實(shí)驗(yàn)室分區(qū)管理平面圖：見圖示 1。2、實(shí)驗(yàn)室基本設(shè)施：分隔和面積：實(shí)驗(yàn)室嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)，分隔為三個(gè)獨(dú)立的工作室：試劑準(zhǔn)備室、 樣品處理室、基因擴(kuò)增室。工作流程：從試劑準(zhǔn)備一樣品處理一基因擴(kuò)增，工作人員只能單向流動(dòng)。進(jìn)入下一區(qū)域，必須更換工作服、手套。通風(fēng)：各室空氣流

4、通性良好。照明：室內(nèi)有良好的照明度。環(huán)境：潔凈、無菌；各室均配有紫外消毒設(shè)備。各室的儀器、實(shí)驗(yàn)和文具用具以及清潔物品均屬于各室專用。3、實(shí)驗(yàn)室消毒隔離及污物處理：見實(shí)驗(yàn)室廢棄物處理的標(biāo)準(zhǔn)操作程序。4、實(shí)驗(yàn)室規(guī)章制度：4.1 總則4.1.1 進(jìn)入基因診斷實(shí)驗(yàn)室的任何工作人員都必須遵守實(shí)驗(yàn)室規(guī)則； 非工作 人員未經(jīng)允許不得入內(nèi)，尤其不得為找人而逆向誤入 PCR實(shí)驗(yàn)室，以免造成不 應(yīng)有的污染。4.1.2 臨床基因診斷實(shí)驗(yàn)室分試劑準(zhǔn)備、樣品處理、基因擴(kuò)增室三個(gè)室, 各室擁有專用的儀器設(shè)備及實(shí)驗(yàn)物品（含加樣器、試管架、吸頭、記錄紙、筆、 甚至清潔用品等），不得混用，須貼上不同顏色標(biāo)簽予以區(qū)別；試劑準(zhǔn)備室

5、為白 色標(biāo)識(shí)、樣品制備室為藍(lán)色標(biāo)識(shí)、擴(kuò)增室為綠色標(biāo)識(shí)。4.1.3 臨床基因診斷實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)具備醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)、微生物學(xué)檢驗(yàn)基本 知識(shí)、大中專以上學(xué)歷、并受過 PCR實(shí)驗(yàn)的基本知識(shí)和技能培訓(xùn)。1.1.1 進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的工作人員必須遵守實(shí)驗(yàn)室的唯一流向的規(guī)定，嚴(yán)禁反向流動(dòng)。1.1.2 進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室，必須更換本室有顏色標(biāo)識(shí)的工作服（含帽和鞋）。勤換洗工作服。1.1.3 接收樣品時(shí)應(yīng)檢查樣品是否符合要求、貼上標(biāo)簽并做好登記。1.1.4 實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員必須嚴(yán)格按照 PCR實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作程序進(jìn)行，包括實(shí) 驗(yàn)室擦洗、臺(tái)面消毒，離心管、吸頭的無菌滅活準(zhǔn)備，儀器使用和廢棄物處理等。31.1.5 進(jìn)入PCR實(shí)驗(yàn)室后區(qū)的物

6、品不許帶進(jìn) PCR實(shí)驗(yàn)室前區(qū)。1.1.6 任何實(shí)驗(yàn)操作包括儀器使用等情況均須做好記錄。1.1.7 檢測(cè)結(jié)果報(bào)告應(yīng)完整（包括：檢驗(yàn)項(xiàng)目、靶核酸類型及結(jié)果等），并經(jīng)專業(yè)負(fù)責(zé)人審核簽字后方可發(fā)出。1.1.8 每天實(shí)驗(yàn)開始前，結(jié)束后均應(yīng)按要求清潔、消毒地面和實(shí)驗(yàn)臺(tái)面。1.1.9 保持臨床基因診斷實(shí)驗(yàn)室內(nèi)空氣唯一流向和空氣流通。1.1.10 定期校準(zhǔn)和維修PCR儀、離心機(jī)、水浴箱、冰箱等儀器、設(shè)備。1.1.11 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不得從事與實(shí)驗(yàn)無關(guān)事宜如聊天、飲食、吸煙等；室內(nèi)禁用電風(fēng)扇。1.1.12 每天下班前處理好廢棄物品，關(guān)好水、電和門窗。4.3 試劑準(zhǔn)備室4.3.1 實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)入該室須穿本室專用白色工作服

7、。實(shí)驗(yàn)中須戴手套。4.3.2 每天實(shí)驗(yàn)開始前，清潔實(shí)驗(yàn)臺(tái)并應(yīng)打開紫外線燈消毒30分鐘。4.3.3 取出當(dāng)天實(shí)驗(yàn)需配制和使用的試劑，其余試劑要立即收好，放回冰箱內(nèi)。4.3.4 試驗(yàn)中使用的離心管、吸頭等應(yīng)經(jīng)過滅活無菌處理，（應(yīng)在消毒的有效期內(nèi)） 。4.3.5 其它室的用品不得帶入本室。4.3.6 每次試驗(yàn)均有記錄；且使用本室專用的、帶有本室標(biāo)識(shí)的記錄本、紙 筆。4.3.7 實(shí)驗(yàn)完畢后要整理、清潔工作臺(tái)面。4.4 樣品準(zhǔn)備室4.4.1 實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)入該室須穿本室專用蘭色工作服。實(shí)驗(yàn)中須戴手套，手套 需常更換。4.4.2 每天實(shí)驗(yàn)開始前，清潔實(shí)驗(yàn)室和實(shí)驗(yàn)臺(tái)，并應(yīng)打開紫外燈消毒30分鐘。4.4.3 樣品

8、的接受，登記，保存和提取按標(biāo)準(zhǔn)操作程序及試劑盒要求進(jìn)行。4.4.4 使用本室專用的，經(jīng)滅菌處理的加樣器和帶濾心的吸頭。4.4.5 做好實(shí)驗(yàn)記錄，并使用本室專用的記錄本和筆。4.4.6 PCR擴(kuò)增后區(qū)的物品不得帶入本室。4.4.7 實(shí)驗(yàn)完畢清潔實(shí)驗(yàn)室和實(shí)驗(yàn)臺(tái)，并打開紫外燈消毒。4.5 基因擴(kuò)增室4.5.1 實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)入該室須穿本室專用綠色工作服實(shí)驗(yàn)中須戴手套，手套需常更換。4.5.2 每天實(shí)驗(yàn)開始前，清潔實(shí)驗(yàn)室和實(shí)驗(yàn)臺(tái)，并應(yīng)打開紫外燈消毒30分鐘。4.5.3 使用本室專用的，經(jīng)滅菌處理的加樣器和帶濾心的吸頭。4.5.4 需在此進(jìn)行操作的，如巢式擴(kuò)增，第一次擴(kuò)增的模板必須在本室內(nèi)從 反應(yīng)管中取出，

9、并加入另一只反應(yīng)管中，此操作不可返回?cái)U(kuò)增前區(qū)進(jìn)行。4.5.5 非全封閉操作（即須開啟反應(yīng)管），應(yīng)打開排風(fēng)扇24小時(shí)排氣，保持 室內(nèi)負(fù)壓狀態(tài)。4.5.6 做好實(shí)驗(yàn)記錄，且使用本室專用的記錄本和筆。4.5.7 PCR擴(kuò)增室的物品不得帶入擴(kuò)增前區(qū)。4.5.8 實(shí)驗(yàn)完畢清潔實(shí)驗(yàn)室和實(shí)驗(yàn)臺(tái)，并打開紫外燈消毒。編制：日期：審批：日期：5文件編號(hào)版本 第二版儀器設(shè)備和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)1 .儀器設(shè)備的配置1.1 試劑準(zhǔn)備室內(nèi)配置的設(shè)備：紫外燈、普通高速臺(tái)式離心機(jī)、旋渦振蕩器、一套連續(xù)可調(diào)式移液槍和無菌 過濾咀型移液器槍頭、冰箱、各種規(guī)格的無菌備用的離心管、PCR反應(yīng)管和玻璃器皿、實(shí)驗(yàn)臺(tái)及本室專用的文具、紙張；本室專用

10、的白色隔離服、一次性手套、污物桶及清潔用品。1.2 樣品制備室內(nèi)配置的設(shè)備：紫外燈、臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)、旋渦振蕩器、恒溫水浴鍋、二套連續(xù)可調(diào)式 移液槍、無菌過濾咀型移液器槍頭、冰箱、各種規(guī)格的無菌備用的離心管和玻璃 器皿、實(shí)驗(yàn)臺(tái)及本室專用的樣品登記本、文具、紙張；本室專用的藍(lán)色隔離服、一次性手套、污物桶及清潔用品。1.3 基因擴(kuò)增室內(nèi)配置的設(shè)備：紫外燈、PCR擴(kuò)增儀、實(shí)驗(yàn)臺(tái)及本室專用的文具、紙張；本室專用的綠色隔離服、一次性手套、污物桶及清潔用品。2 . 儀器設(shè)備的使用、維護(hù)及校準(zhǔn)見儀器使用、維護(hù)及校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)操作程序。3 . 儀器設(shè)備的記錄和標(biāo)識(shí)所有有關(guān)基因診斷實(shí)驗(yàn)室儀器使用、 維護(hù)及校準(zhǔn)的操作

11、均記錄備案。校準(zhǔn)后 的儀器貼上標(biāo)識(shí)，說明校準(zhǔn)日期和狀態(tài)。4 .標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)陽(yáng)性、陰性對(duì)照：來源于相應(yīng)的檢測(cè)試劑盒。室內(nèi)質(zhì)控物、室間質(zhì)評(píng)物：來源于衛(wèi)生部和省臨檢中心。1 .移液器、擴(kuò)增儀、離心機(jī)等對(duì)檢測(cè)結(jié)果有效性、準(zhǔn)確性有影響的檢驗(yàn) 設(shè)備，投入使用前必須進(jìn)行校準(zhǔn)，并每年校準(zhǔn) 1次。2 .參加衛(wèi)生部組織的室間質(zhì)評(píng)。編制:日期:審批:日期:檢驗(yàn)方法1. 檢驗(yàn)項(xiàng)目及方法項(xiàng)目：乙型肝炎病毒 DNA定量檢測(cè)、丙型肝炎病毒 RNA定量檢測(cè)方法：TaqMan熒光定量PCR法乙型肝炎病毒DNA定量檢測(cè)TaqMan熒光定量PCR法丙型肝炎病毒RNA定量檢測(cè)2. 操作手冊(cè)儀器使用、維護(hù)及校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)操作程序樣品采集、保存及

12、運(yùn)輸標(biāo)準(zhǔn)操作程序?qū)嶒?yàn)過程標(biāo)準(zhǔn)操作程序（包括：試劑準(zhǔn)備、樣品制備、基因擴(kuò)增和產(chǎn)物檢測(cè) SOP）各檢測(cè)項(xiàng)目標(biāo)準(zhǔn)操作程序?qū)嶒?yàn)室消毒及污物處理標(biāo)準(zhǔn)操作程序3. 質(zhì)量保證措施室內(nèi)質(zhì)控3. 1核酸提取質(zhì)控 在核酸提取中，帶一份弱陽(yáng)性質(zhì)控樣本和一份陰性質(zhì) 控樣本（基質(zhì)與待測(cè)樣本相同），分別判定核酸提取的有效性和核酸提取過程中 是否發(fā)生污染。3. 2核酸擴(kuò)增質(zhì)控靶核酸為DNA:帶一份弱陽(yáng)性靶DNA質(zhì)控和一份陰性質(zhì)控，以判定DNA擴(kuò)增的有效性；靶核酸為RNA: 一份弱陽(yáng)性cDNA質(zhì)控、一份弱陽(yáng)性RNA質(zhì)控和一份陰性對(duì)照 以判定轉(zhuǎn)錄和DNA擴(kuò)增的有效性3. 3產(chǎn)物檢測(cè)質(zhì)控 一份靶DNA或已稀釋的擴(kuò)增靶DNA陽(yáng)性質(zhì)

13、控、一份 陰性質(zhì)控以及一份試劑空白質(zhì)控與待測(cè)的擴(kuò)增樣本同步檢測(cè)， 以判定產(chǎn)物檢測(cè)中 核酸雜交及顯色測(cè)定的有效性。室間質(zhì)控參加由衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心組織的全國(guó)臨床基因擴(kuò)增項(xiàng)目的室間質(zhì) 量評(píng)價(jià)。樣品處置1 .樣本的標(biāo)識(shí)：標(biāo)識(shí)由三部分構(gòu)成-標(biāo)本采集日期、該檢測(cè)批次的標(biāo)本序號(hào)和標(biāo)本類型，三部分間無間隔符號(hào)，例如：02 08也0凡分別表示年、 月、 日、 序號(hào)和血液標(biāo)本，序號(hào)（01-99 ）,整個(gè)標(biāo)識(shí)為8-11位;2 .樣本的采集、保存和運(yùn)輸：見樣品采集、保存及運(yùn)輸標(biāo)準(zhǔn)操作程序。3 .樣本的接收、記錄：樣品接收后，立即貼上本室設(shè)計(jì)的樣品標(biāo)識(shí)，并在 接收標(biāo)本記錄表上按要求進(jìn)行登記。無簽、遲送的樣品、樣品量不足、溶血的樣品及其它未按規(guī)定采集的樣品， 拒絕接收并記錄于拒收標(biāo)本登記表。4 .樣本的處理：見樣品制備標(biāo)準(zhǔn)操作程序編制：日期：審批：日期：9編制：日期：審批：日期：文件編號(hào)版本 第二版報(bào)告包括以下信息：實(shí)驗(yàn)室名稱檢測(cè)項(xiàng)目（如丙型肝炎病毒 RNA定量檢測(cè)）樣本接