分子生物學(xué)試題及答案(深大整理版)

1、一、名詞解釋1 .cDNA與cccDNA:cDNA是由mRNAB過反轉(zhuǎn)錄酶合成的雙鏈DNAcccDNA是游離于染色體之外的質(zhì)粒雙鏈閉合環(huán)形DNA。2 .標(biāo)準(zhǔn)折疊單位：蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)單元螺旋與3-折疊通過各種連接多肽可以組成特殊幾何排列的結(jié)構(gòu)塊，此種確定的折疊類型通常稱為超二級(jí)結(jié)構(gòu)。幾乎所有的三級(jí)結(jié)構(gòu)都可以用這些折疊類型，乃至他們的組合型來予以描述，因此又將其稱為標(biāo)準(zhǔn)折疊單位。3 .CAP環(huán)腺甘酸（cAMP受體蛋白CRP（cAMPreceptorprotein）,cAMP與CRP結(jié)合后所形成的復(fù)合物稱激活蛋白CAP（cAMPactivatedprotein）4 .回文序列：DNA片段上的一段所具

2、有的反向互補(bǔ)序列，常是限制性酶切位點(diǎn)。5 .micRNA互補(bǔ)干擾RNA稱反義RNA與mRNA列互補(bǔ)，可抑制mRNA勺翻譯。6 .核酶：具有催化活性的RNA在RNA的剪接加工過程中起到自我催化的作用。7 模體：蛋白質(zhì)分子空間結(jié)構(gòu)中存在著某些立體形狀和拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)頗為類似的局部區(qū)域8 .信號(hào)肽：在蛋白質(zhì)合成過程中N端有1536個(gè)氨基酸殘基的肽段，引導(dǎo)蛋白質(zhì)的跨膜。9 弱化子：在操縱區(qū)與結(jié)構(gòu)基因之間的一段可以終止轉(zhuǎn)錄作用的核苷酸序列。10 魔斑：當(dāng)細(xì)菌生長過程中，遇到氨基酸全面缺乏時(shí)，細(xì)菌將會(huì)產(chǎn)生一個(gè)應(yīng)急反應(yīng)，停止全部基因的表達(dá)。產(chǎn)生這一應(yīng)急反應(yīng)的信號(hào)是鳥昔四磷酸（ppGpp）和鳥昔五磷酸（pppGpp

3、）。PpGpp與pppGpp的作用不只是一個(gè)或幾個(gè)操縱子，而是影響一大批，所以稱他們是超級(jí)調(diào)控子或稱為魔斑。11 .上游啟動(dòng)子元件：是指對(duì)啟動(dòng)子的活性起到一種調(diào)節(jié)作用的DNA序列，-10區(qū)的TATA-35區(qū)的TGACA及增強(qiáng)子，弱化子等。12 .DNA探針：是帶有標(biāo)記的一段已知序列DNA用以檢測未知序列、篩選目的基因等方面廣泛應(yīng)用。13 .SD序列：是核糖體與mRN砧合序列，對(duì)翻譯起到調(diào)控作用。14 單克隆抗體：只針對(duì)單一抗原決定簇起作用的抗體。15 .考斯質(zhì)粒：是經(jīng)過人工構(gòu)建的一種外源DN期體，保留噬菌體兩端的COSK,與質(zhì)粒連接構(gòu)成。16 .藍(lán)-白斑篩選：含LacZ基因（編碼3半乳糖甘酶）

4、該酶能分解生色底物X-gal（5-澳-4-氯-3-口引味-3-D-半乳糖甘）產(chǎn)生藍(lán)色，從而使菌株變藍(lán)。當(dāng)外源DNA插入后，LacZ基因不能表達(dá)，菌株呈白色，以此來篩選重組細(xì)菌。稱之為藍(lán)-白斑篩選。17 .順式作用元件：在DNA中一段特殊的堿基序列，對(duì)基因的表達(dá)起到調(diào)控作用的基因元件。18 .Klenow酶：DNAM合酶I大片段，只是從DNA聚合酶I全酶中去除了5'f3'外切酶活性19 .錨定PCR用于擴(kuò)增已知一端序列的目的DNA在未知序列一端加上一段多聚dG的尾巴，然后分別用多聚dC和已知的序列作為引物進(jìn)行PCRF增。20 融合蛋白：真核蛋白的基因與外源基因連接，同時(shí)表達(dá)翻譯出

5、的原基因蛋白與外源蛋白結(jié)合在一起所組成的蛋白質(zhì)。二、填空1 .DNA的物理圖譜是DNA分子的（限制性內(nèi)切酶酶解）片段的排列順序。2 RNA酶的剪切分為（自體催化）、（異體催化）兩種類型。3 原核生物中有三種起始因子分別是（IF-1）、（IF-2）和（IF-3）。4 蛋白質(zhì)的跨膜需要（信號(hào)肽）的引導(dǎo)，蛋白伴侶的作用是（輔助肽鏈折疊成天然構(gòu)象的蛋白質(zhì)）。5 啟動(dòng)子中的元件通?？梢苑譃閮煞N：（核心啟動(dòng)子元件）和（上游啟動(dòng)子元件）。6 .分子生物學(xué)的研究內(nèi)容主要包含（結(jié)構(gòu)分子生物學(xué)）、（基因表達(dá)與調(diào)控）、（DNAM組技術(shù)）三部分。7 .證明DN蝠遺傳物質(zhì)的兩個(gè)關(guān)鍵性實(shí)驗(yàn)是（肺炎球菌感染小鼠）、（T2噬

6、菌體感染大腸桿菌）這兩個(gè)實(shí)驗(yàn)中主要的論點(diǎn)證據(jù)是：（生物體吸收的外源DNA改變了其遺傳潛能）。8 .hnRNAmRNA間的差別主要有兩點(diǎn)：（hnRNA轉(zhuǎn)變?yōu)閙RNA勺過程中經(jīng)過剪接，）、（mRNA勺5'末端被加上一個(gè)m7pGppp帽子，在mRNA3末端多了一個(gè)多聚腺甘酸（polyA）尾巴）。9 .蛋白質(zhì)多亞基形式的優(yōu)點(diǎn)是（亞基對(duì)DNA的利用來說是一種經(jīng)濟(jì)的方法）、（可以減少蛋白質(zhì)合成過程中隨機(jī)的錯(cuò)誤對(duì)蛋白質(zhì)活性的影響）、（活性能夠非常有效和迅速地被打開和被關(guān)閉）。10蛋白質(zhì)折疊機(jī)制首先成核理論的主要內(nèi)容包括（成核）、（結(jié)構(gòu)充實(shí)）、（最后重排）。11 半乳糖對(duì)細(xì)菌有雙重作用；一方面（可以作

7、為碳源供細(xì)胞生長）；另一方面（它又是細(xì)胞壁的成分）。所以需要一個(gè)不依賴于cAMPCRP的啟動(dòng)子S2進(jìn)行本底水平的永久型合成；同時(shí)需要一個(gè)依賴于cAMP-CRP勺啟動(dòng)子S1對(duì)高水平合成進(jìn)行調(diào)節(jié)。有G時(shí)轉(zhuǎn)錄從（S2）開始，無G時(shí)轉(zhuǎn)錄從（S1）開始。12 DNA重組技術(shù)也稱為（基因克隆）或（分子克?。?。最終目的是（把一個(gè)生物體中的遺傳信息DNA專入另一個(gè)生物體）。典型的DNA重組實(shí)驗(yàn)通常包含以下幾個(gè)步驟：提取供體生物的目的基因（或稱外源基因），酶接連接到另一DNA分子上（克隆載體），形成一個(gè)新的重組DNg子。將這個(gè)重組DNA分子轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞并在受體細(xì)胞中復(fù)制保存，這個(gè)過程稱為轉(zhuǎn)化。對(duì)那些吸收了重組D

8、NA的受體細(xì)胞進(jìn)行篩選和鑒定。對(duì)含有重組DNA的細(xì)胞進(jìn)行大量培養(yǎng)，檢測外援基因是否表達(dá)。13、質(zhì)粒的復(fù)制類型有兩種：受到宿主細(xì)胞蛋白質(zhì)合成的嚴(yán)格控制的稱為（嚴(yán)緊型質(zhì)粒），不受宿主細(xì)胞蛋白質(zhì)合成的嚴(yán)格控制稱為（松弛型質(zhì)粒）。14. PCR的反應(yīng)體系要具有以下條件：a、被分離的目的基因兩條鏈各一端序列相互補(bǔ)的DNA引物（約20個(gè)堿基左右）。b、具有熱穩(wěn)定性的酶如：TagDNAm合酶。c、dNTPd、作為模板的目的DNA序列15. PCR的基本反應(yīng)過程包括：（變性）、（退火）、（延伸）三個(gè)階段。16、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的基本過程通常包括：將克隆的外源基因?qū)氲揭粋€(gè)受精卵或胚胎干細(xì)胞的細(xì)胞核中；接種后的受精卵

9、或胚胎干細(xì)胞移植到雌性的子宮；完成胚胎發(fā)育，生長為后代并帶有外源基因；利用這些能產(chǎn)生外源蛋白的動(dòng)物作為種畜，培育新的純合系。17.雜交瘤細(xì)胞系的產(chǎn)生是由（脾B）細(xì)胞與（骨髓瘤）細(xì)胞雜交產(chǎn)生的，由于（脾細(xì)胞）可以利用次黃喋吟，（骨細(xì)胞）提供細(xì)胞分裂功能，所以能在HAT培養(yǎng)基中生長。18隨著研究的深入第一代抗體稱為（多克隆抗體）、第二代（單克隆抗體）、第三代（基因工程抗體）。19目前對(duì)昆蟲病毒的基因工程改造主要集中于桿狀病毒，表現(xiàn)在引入（外源毒蛋白基因）；（擾亂昆蟲正常生活周期的基因）；（對(duì)病毒基因進(jìn)行修飾）。20 .哺乳類RN咪合酶H啟動(dòng)子中常見的元件TATAGCCAAT所對(duì)應(yīng)的反式作用蛋白因子

10、分別是（TFIID）、（SP-1）和（CTF/NF1）。21 .RNA聚合酶H的基本車t錄因子有、TFH-A、TFH-B、TFII-D、TFH-E他們的結(jié)合順序是：（D、ABE）。其中TFII-D的功能是（與TATA盒結(jié)合）。22 .與DNA吉合的轉(zhuǎn)錄因子大多以二聚體形式起作用，轉(zhuǎn)錄因子與DNA結(jié)合的功能域常見有以下幾種（螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋）、（鋅指模體）、（堿性-亮氨酸拉鏈模體）。23限制性內(nèi)切酶的切割方式有三種類型分別是（在對(duì)稱軸5'側(cè)切割產(chǎn)生5'粘端）、（在對(duì)稱軸3'側(cè)切割產(chǎn)生3'粘端）（在對(duì)稱軸處切割產(chǎn)生平段）。24.質(zhì)粒DNA具有三種不同的構(gòu)型分別是：（

11、SC構(gòu)型）、（oc構(gòu)型）、（L構(gòu)型）。在電泳中最前面的是（SC構(gòu)型）。25外源基因表達(dá)系統(tǒng)，主要有（大腸桿菌）、（酵母）、（昆蟲）和（哺乳類細(xì)胞表）。26.轉(zhuǎn)基因動(dòng)物常用的方法有：（逆轉(zhuǎn)錄病毒感染法）、（DNA顯微注射法）、（胚胎干細(xì)胞法）。三、簡答1.分別說出5種以上RNA勺功能？轉(zhuǎn)運(yùn)RNAtRNA轉(zhuǎn)運(yùn)氨基酸；核蛋白體RNArRNA核蛋白體組成成；信使RNAmRNAg白質(zhì)合成模板；不均一核RNAhnRNA成熟mRNA勺前體；小核RNAsnRNA參與hnRNA勺剪接；小胞漿RNAscRNA/7SL-RNA蛋白質(zhì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位合成的信號(hào)識(shí)別體的組成成分；反義RNAanRNA/micRNA對(duì)基因的表達(dá)

12、起調(diào)節(jié)作用；核酶RibozymeRNA有酶活性的RNA2原核生物與真核生物啟動(dòng)子的主要差別？原核生物TTGACA-TATAAT起始位點(diǎn)-35-10真核生物增強(qiáng)子-GC-CAAT-TATAA5mGpp-起始位點(diǎn)-110-70-253對(duì)天然質(zhì)粒的人工構(gòu)建主要表現(xiàn)在哪些方面？天然質(zhì)粒往往存在著缺陷，因而不適合用作基因工程的載體，必須對(duì)之進(jìn)行改造構(gòu)建：a、加入合適的選擇標(biāo)記基因，如兩個(gè)以上，易于用作選擇，通常是抗生素基因。b、增加或減少合適的酶切位點(diǎn)，便于重組。c、縮短長度，切去不必要的片段，提高導(dǎo)入效率，增加裝載量。d、改變復(fù)制子，變嚴(yán)緊為松弛，變少拷貝為多拷貝。e、根據(jù)基因工程的特殊要求加裝特殊的

13、基因元件4.舉例說明差示篩選組織特異cDNA的方法？制備兩種細(xì)胞群體，目的基因在其中一種細(xì)胞中表達(dá)或高表達(dá)，在另一種細(xì)胞中不表達(dá)或低表達(dá)，然后通過雜交對(duì)比找到目的基因。例如：在腫瘤發(fā)生和發(fā)展過程中，腫瘤細(xì)胞會(huì)呈現(xiàn)與正常細(xì)胞表達(dá)水平不同的mRNA因此，可以通過差示雜交篩選出與腫瘤相關(guān)的基因。也可利用誘導(dǎo)的方法，篩選出誘導(dǎo)表達(dá)的基因。5雜交瘤細(xì)胞系的產(chǎn)生與篩選？脾B細(xì)胞+骨髓瘤細(xì)胞，加聚乙二醇（PEG促進(jìn)細(xì)胞融合，HAT培養(yǎng)基中培養(yǎng)（內(nèi)含次黃喋吟、氨基蝶吟、T）生長出來的脾B-骨髓瘤融合細(xì)胞繼續(xù)擴(kuò)大培養(yǎng)。細(xì)胞融合物中包含：脾-脾融合細(xì)胞：不能生長，脾細(xì)胞不能體外培養(yǎng)。骨-骨融合細(xì)胞：不能利用次黃嘌

14、呤，但可通過第二途徑利用葉酸還原酶合成嘌呤。氨基蝶呤對(duì)葉酸還原酶有抑制作用，因此不能生長。骨-脾融合細(xì)胞：在HAT中能生長，脾細(xì)胞可以利用次黃喋吟，骨細(xì)胞提供細(xì)胞分裂功能。6、利用雙脫氧末端終止法（Sanger法）測定DNA一級(jí)結(jié)構(gòu)的原理與方法？原理是采用核甘酸鏈終止劑一2,3,-雙脫氧核甘酸終止DNA勺延長。由于它缺少形成3/5/磷酸二脂鍵所需要的3-OH,一旦參入到DNA鏈中，此DNAB1就不能進(jìn)一步延長。根據(jù)堿基配對(duì)原則，每當(dāng)DNA聚合酶需要dNM畛入到正常延長的DNA鏈中時(shí)，就有兩種可能性，一是參入ddNTP,結(jié)果導(dǎo)致脫氧核甘酸鏈延長的終止；二是參入dNTP,使DNA鏈仍可繼續(xù)延長，直

15、至參入下一個(gè)ddNTR根據(jù)這一方法，就可得到一組以ddNTP結(jié)尾的長短不一的DNA段。方法是分成四組分別為ddAMPddGMPddCMPddTMP反應(yīng)后，聚丙烯酰胺凝膠電泳按泳帶可讀出DNA序列。7、激活蛋白（CAB對(duì)轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控作用？環(huán)腺甘酸（cAMB受體蛋白CRP（cAMPreceptorprotein）,cAMP與CRP吉合后所形成的復(fù)合物稱激活蛋白CAP（cAMPactivatedprotein）。當(dāng)大腸桿菌生長在缺乏葡萄糖的培養(yǎng)基中時(shí)，CAP合成量增加，CAP具有激活乳糖（Lac）等啟動(dòng)子的功能。一些依賴于CRPW啟動(dòng)子缺乏一般啟動(dòng)子所具有的典型的-35區(qū)序列特征（TTGACA。因此

16、RNA合合酶難以與其結(jié)合。CAP的存在（功能）：能顯著提高酶與啟動(dòng)子結(jié)合常數(shù)。主要表現(xiàn)以下二方面：CAP通過改變啟動(dòng)子的構(gòu)象以及與酶的相互作用幫助酶分子正確定向,以便與-10區(qū)結(jié)合，起到取代-35區(qū)功能的作用。CAP還能抑制RNAm合酶與DNA中其它位點(diǎn)的結(jié)合，從而提高與其特定啟動(dòng)子結(jié)合的概率。8、典型的DNA1組實(shí)驗(yàn)通常包括哪些步驟？a、提取供體生物的目的基因（或稱外源基因），酶接連接到另一DNA分子上（克隆載體），形成一個(gè)新的重組DNg子。b、將這個(gè)重組DN后子轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞并在受體細(xì)胞中復(fù)制保存，這個(gè)過程稱為轉(zhuǎn)化。c、對(duì)那些吸收了重組DNA的受體細(xì)胞進(jìn)行篩選和鑒定。d、對(duì)含有重組DNA勺細(xì)

17、胞進(jìn)行大量培養(yǎng)，檢測外援基因是否表達(dá)。9、基因文庫的構(gòu)建對(duì)重組子的篩選舉出3種方法并簡述過程?？股乜剐院Y選、抗性的插入失活、蘭-白斑篩選或PCRW選、差式篩選、DN琳針多數(shù)克隆載體均帶有抗生素抗性基因（抗氨芐青霉素、四環(huán)素）。當(dāng)質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌中后，該菌便獲得抗性，沒有轉(zhuǎn)入的不具有抗性。但不能區(qū)分是否已重組。在含有兩個(gè)抗性基因的載體中，如果外源DNA片段插入其中一個(gè)基因并導(dǎo)致該基因失活，就可用兩個(gè)分別含不同藥物的平板對(duì)照篩選陽性重組子。如pUC質(zhì)粒含LacZ基因（編碼3半乳糖甘酶）該酶能分解生色底物X-gal（5-澳-4-氯-3-口引味-3-D-半乳糖甘）產(chǎn)生藍(lán)色，從而使菌株變藍(lán)。當(dāng)外源DN

18、Affi入后，LacZ基因不能表達(dá)，菌株呈白色，以此來篩選重組細(xì)菌。10、說明通過胚胎干細(xì)胞獲得轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的基本過程？胚胎干細(xì)胞(embryonicstemcell,ES)：是胚胎發(fā)育期的胚細(xì)胞，可以人工培養(yǎng)增殖并具有分化成其它類型細(xì)胞的功能。ES細(xì)胞的培養(yǎng)：分離胚泡的內(nèi)層細(xì)胞團(tuán)進(jìn)行培養(yǎng)。ES在無飼養(yǎng)層中培養(yǎng)時(shí)會(huì)分化為肌細(xì)胞、N細(xì)胞等多種功能細(xì)胞，在含有成纖維細(xì)胞中培養(yǎng)時(shí)ES將保持分化功能。可以對(duì)ES進(jìn)行基因操作，不影響它的分化功能可以定點(diǎn)整合，解決了隨機(jī)整合的問題。向胚胎干細(xì)胞導(dǎo)入外源基因，然后植入到待孕雌鼠子宮，發(fā)育成幼鼠，雜交獲得純合鼠。蛋白質(zhì)的生物合成(1) 名詞解釋1 .翻譯(tra

19、nslation):以mRN的模板，氨酰-tRNA為原料直接供體，在多種蛋白質(zhì)因子和酶的參與下，在核糖體上將mRN粉子上的核甘酸順序表達(dá)為有特定氨基酸順序的蛋白質(zhì)的過程。2 .密碼子(codon):mRN的堿基順序與蛋白質(zhì)中氨基酸順序的對(duì)應(yīng)關(guān)系是通過密碼實(shí)現(xiàn)的，mRNA中每三個(gè)相鄰的堿基決定一個(gè)氨基酸，這三個(gè)相鄰的堿基稱為一個(gè)密碼子。3 密碼的簡并性(degeneracy)：個(gè)氨基酸具有兩個(gè)以上密碼子的現(xiàn)象。4 同義密碼子(synonymcodon)：為同種氨基酸編碼的各個(gè)密碼子，稱為同義密碼了。5 變偶假說(wobblehypothesis)：指反密碼子的前兩個(gè)堿基(3-端)按照標(biāo)準(zhǔn)與密碼子

20、的前兩個(gè)堿基(5-端)配對(duì)，而反密碼子中的第三個(gè)堿墓則有某種程度的變動(dòng)，使其有可能與幾種不同的堿基配對(duì)。6 .移碼突變(frame-shiftmutation):在mRNA中，若插入或刪去一個(gè)核甘酸，就會(huì)使讀碼發(fā)錯(cuò)誤，稱為移碼，由于移碼而造成的突變、稱移碼突變。7,同功受體(isoacceptor):轉(zhuǎn)運(yùn)同一種氨基酸的幾種tRNA稱為同功受體。8 反密碼子(anticodon)：指tRNA反密碼子環(huán)中的三個(gè)核苷酸的序列，在蛋白質(zhì)合成過程中通過堿基配對(duì)，識(shí)別并結(jié)合到mRNA勺特殊密碼上。9 .多核糖體(polysome):mRN洞時(shí)與若干個(gè)核糖體結(jié)合形成的念珠狀結(jié)構(gòu)，稱為多核糖體。(2) 問答題

21、1 參與蛋白質(zhì)生物合成體系的組分有哪些?它們具有什么功能?mRNA蛋白質(zhì)合成的模板；tRNA:蛋白質(zhì)合成的氨基酸運(yùn)載工具；核糖體：蛋白質(zhì)合成的場所；輔助因子：(a)起始因子-參與蛋白質(zhì)合成起始復(fù)合物形成；(b)延長因子-肽鏈的延伸作用；(c)釋放因子一-終止肽鏈合成并從核糖體上釋放出來。2 遺傳密碼是如何破譯的?提示：三個(gè)突破性工作(1)體外翻譯系統(tǒng)的建立；(2)核糖體結(jié)合技術(shù)；(3)核酸的人工合成。3 遺傳密碼有什么特點(diǎn)?(1) 密碼無標(biāo)點(diǎn)：從起始密碼始到終止密碼止，需連續(xù)閱讀，不可中斷。增加或刪除某個(gè)核苷酸會(huì)發(fā)生移碼突變。(2) 密碼不重疊：組成一個(gè)密碼的三個(gè)核苷酸只代表一個(gè)氨基酸，只使用

22、一次，不重疊使用。(3) 密碼的簡并性：在密碼子表中，除Met、Trp各對(duì)應(yīng)一個(gè)密碼外，其余氨基酸均有兩個(gè)以上的密碼，對(duì)保持生物遺傳的穩(wěn)定性具有重要意義。(4) 變偶假說：密碼的專一性主要由頭兩位堿基決定，第三位堿基重要性不大，因此在與反密碼子的相互作用中具有一定的靈活性。(5) 通用性及例外：地球上的一切生物都使用同一套遺傳密碼，但近年來已發(fā)現(xiàn)某些個(gè)別例外現(xiàn)象，如某些哺乳動(dòng)物線粒體中的UGM是終止密碼而是色氨酸密碼子。(6) 起始密碼子AUG同時(shí)也代表Met,終止密碼子UAAUAGUG砸用頻率不同。4.簡述三種RNM蛋白質(zhì)生物合成中的作用。(1)mRNADNA的遺傳信息通過轉(zhuǎn)錄作用傳遞給mR

23、NAmRNA乍為蛋白質(zhì)合成模板，傳遞遺傳信息，指導(dǎo)蛋白質(zhì)合成。(2)tRNA:蛋白質(zhì)合成中氨基酸運(yùn)載工具，tRNA的反密碼子與mRNAb的密碼子相互作用，使分子中的遺傳信息轉(zhuǎn)換成蛋白質(zhì)的氨基酸順序是遺傳信息的轉(zhuǎn)換器。(3)rRNA核糖體的組分，在形成核糖體的結(jié)構(gòu)和功能上起重要作用，它與核糖體中蛋白質(zhì)以及其它輔助因子一起提供了翻譯過程所需的全部酶活性。5簡述核糖體的活性中心的二位點(diǎn)模型及三位點(diǎn)模型的內(nèi)容。(1)二位點(diǎn)模型A位：氨酰-tRNA進(jìn)入并結(jié)合的部位；P位：起始氨酰-tRNA或正在延伸的肽基-tRNA結(jié)合部位，也是無載的tRNA從核糖體上離開的部位。(2)三位點(diǎn)模型大腸桿菌上的70S核糖體

24、上除A位和P位外，還存在第三個(gè)結(jié)合tRNA的位點(diǎn)，稱為E位，它特異地結(jié)合無負(fù)載的tRNA及無負(fù)載的tRNA最后從核糖體上離開的位點(diǎn)。6氨基酸在蛋白質(zhì)合成過程中是怎樣被活化的?催化氨基酸活化的酶稱氨酰-tRNA合成酶，形成氨酰-tRNA，反應(yīng)分兩步進(jìn)行：(1)活化需Mg2?？贛n2+,由ATP供能，由合成酶催化，生成氨基酸-AMP期復(fù)合物。，(2)轉(zhuǎn)移在合成酶催化下將氨基酸從氨基酸一AMP酶復(fù)合物上轉(zhuǎn)移到相應(yīng)的tRNA上，形成氨酰-tRNA。7簡述蛋白質(zhì)生物合成過程。蛋白質(zhì)在成可分四個(gè)步驟，以大腸桿菌為例：(1) 氨基酸的活化：游離的氨基酸必須經(jīng)過活化以獲得能量才能參與蛋白質(zhì)在成，由氨酰-tRN

25、A在成酶催化，消耗1分子ATP,形成氨酰-tRNA。(2) 肽鏈合成的起始：由起始因子參與，mRNA與30S小亞基、50S大亞基及起始甲酰甲硫氨酰-tRNA(fMet-tRNAt)形成70S起始復(fù)合物，整個(gè)過程需GTPK解提供能量。(3) 肽鏈的延長：起始復(fù)在物形成后肽鏈即開始延長。首先氨酰-tRNA結(jié)在到核糖體的A位，然后，由肽酰轉(zhuǎn)移酶催化與P位的起始氨基酸或肽?；纬呻逆I，tRNAf或空載tRNA仍留在P位最后核糖體沿mRNA5-3'方向移動(dòng)一個(gè)密碼子距離，A位上的延長一個(gè)氨基酸單位的肽酰-tRNA轉(zhuǎn)移到P位，全部過程需延伸因子EF-Tu、EF-Ts,能量由GTP提供。(4) 肽鏈

26、合成終止，當(dāng)核糖體移至終止密碼UAAUAG或UGAM,終止因子RF-1、RF-2識(shí)別終止密碼，并使肽酰轉(zhuǎn)移酶活性轉(zhuǎn)為水解作用，將P位肽酰-tRNA水解，釋放肽鏈，在成終止。8蛋白質(zhì)在成中如何保證其翻譯的正確性?提示：(1)氨基酸與tRNA的專一結(jié)合，保證了tRNA攜帶正確的氨基酸；(2)攜帶氨基酸的tRNA對(duì)mRNA勺識(shí)別，mRNAh的密碼子與tRNA上的反密碼子的相互識(shí)別，保證了遺傳信息準(zhǔn)確無誤地轉(zhuǎn)譯；(3)起始因子及延長因子的作用，起始因子保證了只有起始氨酰-tRNA能進(jìn)入核糖體P位與起始密碼子結(jié)在，延伸因子的高度專一性，保證了起始tRNA攜帶的fMet不進(jìn)入肽鏈內(nèi)部；(4)核糖體三位點(diǎn)模

27、型的E位與A位的相互影響，可以防止不正確的氨酰-tRNA進(jìn)入A位，從而提高翻譯的正確性；(5)校正作用：氨酰-tRNA在成酶和tRNA的校正作用；對(duì)占據(jù)核糖體A位的氨酰-tRNA的校對(duì)；變異校對(duì)即基因內(nèi)校對(duì)與基因間校對(duì)等多種校正作用可以保證翻譯的正確。9原核細(xì)胞和真核細(xì)胞在在成蛋白質(zhì)的起始過程有什么區(qū)別。(1) 起始因子不同：原核為IF-1，IF-2，IF-2，真核起始因子達(dá)十幾種。(2) 起始氨酰-tRNA不同：原核為fMet-tRNAf，真核Met-tRNAi(3)核糖體不同：原核為70S核粒體，可分為30S和50S兩種亞基，真核為80S核糖體，分40S和60S兩種亞基10蛋白質(zhì)在成后的加

28、工修飾有哪些內(nèi)容?提示：(1)水解修飾；(2)肽鍵中氨基酸殘基側(cè)鏈的修飾；(3)二硫鍵的形成；(4)輔基的連接及亞基的聚在。11蛋白質(zhì)的高級(jí)結(jié)構(gòu)是怎樣形成的?提示：蛋白質(zhì)的高級(jí)結(jié)構(gòu)是由氨基酸的順序決定的，不同的蛋白質(zhì)有不同的氨基酸順序，各自按一定的方式折疊而成該蛋白質(zhì)的高級(jí)結(jié)構(gòu)。折疊是在自然條件下自發(fā)進(jìn)行的，在生理?xiàng)l件下，它是熱力學(xué)上最穩(wěn)定的形式，同時(shí)離不開環(huán)境因素對(duì)它的影響。對(duì)于具有四級(jí)結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)，其亞基可以由一個(gè)基因編碼的相同肽鏈組成，也可以由不同肽鏈組成，不同肽鏈可以通過一條肽鏈加工剪切形成，或由幾個(gè)不同單順反子mRN腐譯，或由多順反子mRN葡譯合成。12真核細(xì)胞與原核細(xì)胞核糖體組成有

29、什么不同?如何證明核糖體是蛋白質(zhì)的在成場所?原核細(xì)胞：70S核糖體由30S和50S兩個(gè)亞基組成；真核細(xì)胞：80S核糖體由40S和60S兩個(gè)亞基組成。利用放射性同位素標(biāo)記法，通過核糖體的分離證明之。13 .已知一種突變的噬菌體蛋白是由于單個(gè)核苷酸插入引起的移碼突變的，將正常的蛋白質(zhì)和突變體蛋白質(zhì)用胰蛋白酶消化后，進(jìn)行指紋圖分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)只有一個(gè)肽段的差異，測得其基酸順序如下：正常肽段Met-Val-Cys-Val-Arg突變體肽段Met-Ala-Met-Arg(1)什么核苷酸插入到什么地方導(dǎo)致了氨基酸順序的改變？(2)推導(dǎo)出編碼正常肽段和突變體肽段的核苷酸序列.提示：有關(guān)氨基酸的簡并密碼分別為V

30、al:GUUGUCGUAGUGArg:CGUCGCCGACGAGAAGGCys:UGUUGCAla:GCUGCCGCACGC提示：（1）在正常肽段的第一個(gè)Val的密碼GUA勺G后插入了一個(gè)C;（2）正常肽段的核甘酸序列為：AUGGUAUGCGUCG；突變體肽段的核甘酸序列為：AUGGCUAUGCGU14 .試列表比較核酸與蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)。核酸(Nucleicacids)蛋白質(zhì)(Proteins)DNARNA一級(jí)結(jié)構(gòu)Primarystructure核甘酸序列AGTTCT或AGUUCU的排歹U順序3,5,-磷酸二酯鍵氨基酸排列順序肽鍵二級(jí)結(jié)構(gòu)Secondarystructure雙螺旋主要是氫鍵，堿基

31、堆積力配對(duì)（莖-環(huán)結(jié)構(gòu)）（同左）有規(guī)則重復(fù)的構(gòu)象(a-helix,3一sheet,3-turn)氫鍵三級(jí)結(jié)構(gòu)Tertiarystructure超螺旋RNA空間構(gòu)象一條肽鏈的空間構(gòu)象范德華力氫鍵疏水作用鹽橋二硫鍵等四級(jí)結(jié)構(gòu)Quaternarystructure多條肽鏈（或小同蛋白）15 .試比較原核生物與真核生物的翻譯。原核生物與真核生物的翻譯比較如下：僅述真核生物的，原核生物與此相反。（1）.起始Met不需甲?；?；（2）.無SD序歹U,但需要一個(gè)掃描過程；（3）.tRNA先于mRNAf核糖體小亞基結(jié)合；（4）.起始因子比較多；（5）.只一個(gè)終止釋放因子。（三）填空題1 .蛋白質(zhì)的生物合成是以m

32、RNA為模板,以氨酰-tRNA為原料直接供體,以核糖體為合成楊所。2 .生物界共有64個(gè)密碼子,其中出個(gè)為氨基酸編碼,起始密碼子為AUG;終止密碼子為UAA、UAG、UGA。3 .原核生物的起始tRNA以tRNAf表示,真核生物的起始tRNA以tRNAi表示,延伸中的甲硫氨酰tRNA以tRNAm表示。4 .植物細(xì)胞中蛋白質(zhì)生物合成可在核糖體、.線粒體和葉綠體三種細(xì)胞器內(nèi)進(jìn)行。5 .延長因子T由Tu和Ts兩個(gè)亞基組成，Tu為對(duì)熱不穩(wěn)定蛋白質(zhì)，Ts為對(duì)熱穩(wěn)定蛋白質(zhì)。6 .原核生物中的釋放因子有三種，其中RF-1識(shí)別終止密碼子UAA、UAG;RF-2識(shí)別UAA、UGA;真核中的釋放因子只有RF一種。

33、7 .氨酰-tRNA合成酶對(duì)氨基酸和相應(yīng)的tRNA有高度的選擇性。8 .原核細(xì)胞的起始氨基酸是_甲酰甲硫氨酸,起始氨酰-tRNA是甲酰甲硫氨酰-tRNA。9 .原核細(xì)胞核糖體的小亞基上的16SrRNA協(xié)助辨認(rèn)起始密碼子。10 .每形成一個(gè)肽鍵要消耗4個(gè)高能磷酸鍵,但在合成起始時(shí)還需多消耗1個(gè)高能磷酸鍵。11 .肽基轉(zhuǎn)移酶在蛋白質(zhì)生物合成中的作用是催化肽鍵形成和肽酰-tRNA的水解。12 .肽鏈合成終止時(shí)，終止因子進(jìn)入“A”位，識(shí)別出終止密碼子，同時(shí)終止因子使肽基轉(zhuǎn)移酶的催化作用轉(zhuǎn)變?yōu)樗庾饔谩?3 .原核生物的核糖體由30S小亞基和50S大亞基組成，真核生物核糖體由40S小亞基和60S大亞基組

34、成。14 .蛋白質(zhì)中可進(jìn)行磷酸化修飾的氨基酸殘基主要為Ser、Thr、Tyr。(四)選擇題1 蛋白質(zhì)生物合成的方向是()。從C-N端定點(diǎn)雙向進(jìn)行從N端、C端同時(shí)進(jìn)行從N-C端2 不能合成蛋白質(zhì)的細(xì)胞器是()。線粒體葉綠體高爾基體核糖體3 真核生物的延伸因子是()。ETuEF-2EF-GEF一14 真核生物的釋放因子是()。RFRF1RF2RF35 .能與tRNA反密碼子中的I堿基配對(duì)的是()。A、GC、UUU、C、A6 蛋白質(zhì)合成所需能量來自()。ATPGTPATRGTPGTP7 .tRNA的作用是()。將一個(gè)氨基酸連接到另一個(gè)氨基酸上把氨基酸帶到mRN前置上將mRN眼到核糖體上增加氨基酸的有

35、效濃度8關(guān)于核糖體的移位，敘述正確的是()。空載tRNA的脫落發(fā)生在“A”位上核糖體沿mRNA勺3'-5'方向相對(duì)移動(dòng)核糖體沿mRNA勺5'-3'方向相對(duì)移動(dòng)核糖體在mRNAb一次移動(dòng)的距離相當(dāng)于二個(gè)核甘酸的長度9在蛋白質(zhì)合成中，下列哪一步不需要消耗高能磷酸鍵()。肽基轉(zhuǎn)移酶形成肽鍵氨酰一tRNA與核糖體的“A，位點(diǎn)結(jié)合核糖體沿mRN般動(dòng)fMettRNAf與mRNA勺起始密碼子結(jié)合以及與大、小亞基的結(jié)合10在真核細(xì)胞中肽鏈合成的終止原因是()。已達(dá)到mRNA的盡頭具有特異的tRNA識(shí)別終止密碼子終止密碼子本身具有酯酶作用，可水解肽酰與tRNA之是的酯鍵終止密碼子

36、被終止因子(RF)所識(shí)別11蛋白質(zhì)生物合成中的終止密碼是()。UAAUAUUACUAGUGA12根據(jù)擺動(dòng)假說，當(dāng)tRNA反密碼子第1位堿基是I時(shí)，能夠識(shí)別哪幾種密碼子()ACGTU13下列哪些因子是真核生物蛋白質(zhì)合成的起始因子()。IF1IF2eIF2eIF4elF4A14蛋白質(zhì)生物合成具有下列哪些特征()。氨基酸必須活化需要消耗能量每延長一個(gè)氨基酸必須經(jīng)過進(jìn)位、轉(zhuǎn)肽、移位、稅落四個(gè)步驟合成月t鏈由C端向N端不斷延長新生肽鏈需加工才能成為活性蛋白質(zhì)15下列哪些內(nèi)容屬于蛋白質(zhì)合成后的加工、修飾()。切除N-端Met( ) 。氨酰tRNA 進(jìn)入核糖體A 位切除內(nèi)含子，連接外顯子切除信號(hào)肽形成二硫鍵

37、氨的側(cè)鏈修飾16蛋白質(zhì)生物合成過程中，下列哪些步驟需要消耗能量氨基酸分子的活化70S起始復(fù)合物的形成肽鍵形成核糖體移位17原核生物的肽鏈延伸過程有下列哪些物質(zhì)參與()。肽基轉(zhuǎn)移酶鳥苷三磷酸mRNA甲酰甲硫氨酰-tRNAEF-Tu、EF-Ts、EF-G1. .Shine-Dalgarno順序(SD-順序)是指：()在mRN粉子的起始碼上游8-13個(gè)核甘酸處的順序在DN后子上轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)前8-13個(gè)核甘酸處的順序16srRNA3'端富含喀咤的互補(bǔ)順序啟動(dòng)基因的順序特征以上都正確19. 在研究蛋白合成中,可利用嘌呤霉素,這是因?yàn)樗?()使大小亞基解聚使肽鏈提前釋放抑制氨基酰-tRNA合成酶活性

38、防止多核糖體形成以上都正確20. 氨基酸活化酶：（）活化氨基酸的氨基利用GTP作為活化氨基酸的能量來源催化在tRNA的5磷酸與相應(yīng)氨基酸間形成酯鍵每一種酶特異地作用于一種氨基酸及相應(yīng)的tRNA以上都不正確（五）是非題1 .DNA僅決定遺傳性狀，而且還直接表現(xiàn)遺傳性狀。（X）2 .密碼子在mRNAk的閱讀方向?yàn)?'f3'。（,）3 .每一種氨基酸都有兩種以上密碼子。（X）4 .一種tRNA只能識(shí)別一種密碼子。（X）(v )mRNA吉合。(X ) mRNA吉合。(V )5線粒體和葉綠體的核糖體的亞基組成與原核生物類似。6大腸桿菌的核糖體的小亞基必須在大亞基存在時(shí)，才能與7大腸桿菌的

39、核糖體的大亞基必須在小亞存在時(shí)，才能與8 .在大腸桿菌中，一種氨基酸只對(duì)應(yīng)于一種氨酰-tRNA合成酶。（V）9 .氨基酸活化時(shí)，在氨酰-tRNA合成酶的催化下，由ATP供能，消耗一個(gè)高能磷酸鍵。（X）10 .線粒體和葉綠體內(nèi)的蛋白質(zhì)生物合成起始與原核生物相同。（V）11 .每種氨基酸只能有一種特定的tRNA與之對(duì)應(yīng)。（X）12 .AUM可彳乍為fMet-tRNAf和Met-tRNAi的密碼子，又可作為肽鏈內(nèi)部Met的密碼子。（,）13 .構(gòu)成密碼子和反密碼子的堿基都只是AU、CG（X）14 .核糖體大小亞基的結(jié)合和分離與Mg2+,的濃度有關(guān)。（,）15 .核糖體的活性中心“A”位和“P”位都主

40、要在大亞基上。（X）16 .E.coli中，DnaA與復(fù)制起始區(qū)DNA吉合，決定復(fù)制的起始。（V）核酸的生物合成（1） 名詞解釋1 中心法則（centraldogma）：生物體遺傳信息流動(dòng)途徑。最初由Crick（1958）提出，經(jīng)后人的不斷補(bǔ)充和修改，現(xiàn)包括反轉(zhuǎn)錄和RNAM制等內(nèi)容。2 .半保留復(fù)制（簡稱復(fù)制）（semiconservativereplication）:親代雙鏈DNA以每條鏈為模板，按堿基配對(duì)原則各合成一條互補(bǔ)鏈，這樣一條親代DNAM螺旋，形成兩條完全相同的子代DNA1旋，子代DN后子中都有一條合成的“新”鏈和一條來自親代的舊鏈，稱為半保留復(fù)制。3 .DNA聚合酶（DNApol

41、ymerase）:指以脫氧核甘三磷酸為底物，按5'-3'方向合成DNA勺一類酶，反應(yīng)條件：4種脫氧核甘三磷酸、Mg卡模板、引物。DNAM合酶是多功能酶，除具有聚合作用外，還具有其它功能，不同DNA聚合酶所具有的功能不同。4 .解旋酶（helicase）:是一類通過水解ATP提供能量，使DNA螺旋兩條鏈分開的酶，每解開一對(duì)堿基，水解2分子ATP。5 .拓?fù)洚悩?gòu)酶（topoisomerase）:是一類引起DNAM撲異構(gòu)反應(yīng)的酶，分為兩類：類型I的酶能使DNA的一條鏈發(fā)生斷裂和再連接，反應(yīng)無需供給能量，類型n的酶能使DNA勺兩條鏈同時(shí)發(fā)生斷裂和再連接，當(dāng)它引入超螺旋時(shí)，需要由ATP供

42、給能量。6 .單鏈DNA吉合蛋白（single-strandbindingprotein,SSB）:是一類特異性和單鏈區(qū)DNA吉合的蛋白質(zhì)。它的功能在于穩(wěn)定DNAB開的單鏈，阻止復(fù)性和保護(hù)單鏈部分不被核酸酶降解。7 .DNA連接酶（DNAligase）:是專門催化雙鏈DNA中缺口共價(jià)連接的酶，不能催化兩條游離的單鏈DNA鏈間形成磷酸二酯鍵。反應(yīng)需要能量。8 .引物酶及引發(fā)體（primase&primosome）:以DNA為模板，以核糖核甘酸為底物，在DNA合成中，催化形成RNA引物的酶稱為引物酶及引物體。大腸桿菌的引物酶單獨(dú)沒有活性，只有與其它蛋白質(zhì)結(jié)合在一起，形成一個(gè)復(fù)合體，即引發(fā)體

43、才有生物活性。9 .復(fù)制叉（replicationfork）:復(fù)制中的DNA分子，末復(fù)制的部分是親代雙螺旋，而復(fù)制好的部分是分開的，由兩個(gè)子代雙螺旋組成，復(fù)制正在進(jìn)行的部分呈丫狀叫做復(fù)制叉。10 .復(fù)制眼0結(jié)構(gòu)：在一段DNA±,正在復(fù)制的部分形成眼斗結(jié)構(gòu)。復(fù)制眼在環(huán)狀DNA±形成的結(jié)構(gòu)與希臘字母0相象，所以叫0結(jié)構(gòu)。11 .前導(dǎo)鏈（1eadingstrand）:在DNAM制過程中，以親代鏈（3'-5'為模板時(shí)，子代鏈的合成（5'f3)是連續(xù)的這條能連續(xù)合成的鏈稱前導(dǎo)鏈。12 .岡崎片段(Okazakifragment)、后隨鏈(laggingstra

44、nd):在DNAM制過程中，以親代鏈(5'-3')為模板時(shí)，子代鏈的合成不能以3'-5'方向進(jìn)行，而是按5'-3'方向合成出許多小片段，因?yàn)槭菍榈热搜芯堪l(fā)現(xiàn)，因此稱岡崎片段。由許多岡崎片段連接而成的子代鏈稱為后隨鏈。13 .半不連續(xù)復(fù)制(Semidiscontinuousreplication):在DNA復(fù)制過程中，一條鏈的合成是連續(xù)的，另一條鏈的合成是不連續(xù)的，所以叫做半不連續(xù)復(fù)制。14 .逆轉(zhuǎn)錄(reversetranscription):以RNW模板合成DNA勺過程。15 .逆轉(zhuǎn)錄酶(reversetranseriptase):催化以RN

45、A為模板合成DNA的逆轉(zhuǎn)錄過程的酶。Temin(1960)首次從勞氏肉瘤病毒中發(fā)現(xiàn)。逆轉(zhuǎn)錄酶具有多種酶活性：依賴RNA的DNA聚合酶活性；依賴DNA的DNAM合酶活性，RNA水解酶活性，DN蛤成方向5'-3'。合成時(shí)需要引物與模板。16 .突變(mutation):基因組DNAM序上的任何一種改變都叫做突變。分點(diǎn)突變和結(jié)構(gòu)畸變。17 點(diǎn)突變(Pointmutation)：是指一個(gè)或幾個(gè)堿基對(duì)被置換(replacement)，這種置換又分兩種形式：轉(zhuǎn)換(transition)一-指用一個(gè)嘌呤堿置換另一個(gè)嘌呤堿，一個(gè)嘧啶堿置換另一個(gè)嘧啶堿；顛換(transversion)一-指用嘌

46、呤堿置換嘧啶堿或用嘧啶堿置換嘌呤堿。18 結(jié)構(gòu)畸變：基因中的缺口、或插入(insertion)或缺失(deletion)某些堿基造成移碼突變使DNA的模板鏈?zhǔn)スδ堋?9 誘變劑(mutagen)：使基因組發(fā)生突變的物理、化學(xué)、生物因素叫誘變劑。20 .修復(fù)(repair):除去DNA上的損傷，恢復(fù)DNA的正常結(jié)構(gòu)和功能是生物機(jī)體的一種保護(hù)功能。21 光裂合酶修復(fù)(又稱光復(fù)活)(photoreactivation)：可見光將光裂合酶激活，它分解DNA上由紫外線照射而形成的嘧啶二聚體，使它們恢復(fù)成兩個(gè)單獨(dú)的嘧啶堿。22 .切除修復(fù)(excisionrepair):在一系列酶的作用下，將DNA分子

47、中受損傷部分切除，以互補(bǔ)鏈為模板，合成出空缺的部分，使DNA恢復(fù)正常結(jié)構(gòu)的過程。23 .重組修復(fù)(recombinationrepair):DNA在有損傷的情況下也可以復(fù)制，復(fù)制時(shí)子代鏈躍過損傷部位并留下缺口，通過分子間重組，從完整的另一條母鏈上將相應(yīng)的核苷酸序列片段移至子鏈缺口處，然后用再合成的多核苷酸的序列補(bǔ)上母鏈的空缺，此過程稱重組修復(fù)。24 .誘導(dǎo)修復(fù)和應(yīng)急反應(yīng)(inductionrepairandSOSresponse)(SOS修復(fù))：由于DNA受到損傷或復(fù)制系統(tǒng)受到抑制所誘導(dǎo)引起的一系列復(fù)雜的應(yīng)急效應(yīng)，稱為應(yīng)急反應(yīng)。SOS反應(yīng)主要包括兩個(gè)方面：DNA損傷修復(fù)(SOS修復(fù)或稱誘導(dǎo)修復(fù)

48、)和誘變效應(yīng)。SOS修復(fù)是一種易出差錯(cuò)的修復(fù)過程，雖能修復(fù)DNA的損傷而避免死亡。但卻帶來高的變異率。25 .DNAM組(recombination):DNA重組是指在真核生物減數(shù)分裂過程中，細(xì)菌細(xì)胞的轉(zhuǎn)化中、病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)中等發(fā)生的DNA片段的交換或插入。26 基因工程(又稱基因重組技術(shù))(gene/geneticengineering)：是將外源基因經(jīng)過剪切加工，再插入到一個(gè)具有自我復(fù)制能力的載體DNA中，將新組合的DNA轉(zhuǎn)移到一個(gè)寄主細(xì)胞中，外源基因就可以隨著寄主細(xì)胞的分裂進(jìn)行繁殖，寄主細(xì)胞也借此獲得外源基因所攜帶的新特性。27 .轉(zhuǎn)錄(transcription):由依賴于DNA的RNA聚合

49、酶催化，以DNA的一條鏈的一定區(qū)段為模板，按照堿基配對(duì)原則，合成一條與DNAB1互補(bǔ)的RNA鏈的過程。28 模板鏈(templatestrand)又稱負(fù)(-)鏈，反意義鏈(antisensestrand)：轉(zhuǎn)錄過程中用作模板的這條DNA鏈，稱模板鏈。29 非模板鏈(nontemplatestrand)又稱正(+)鏈，編碼鏈(codingstrand)，有意義鏈(sensestrand)：與模板鏈互補(bǔ)的那條DNA鏈，稱非模板鏈。30 .不對(duì)稱轉(zhuǎn)錄(asymmetrictranscription):因?yàn)镽NA的轉(zhuǎn)錄只在DNA的任一條鏈上進(jìn)行，所以把RNA的合成叫做不對(duì)稱轉(zhuǎn)錄。31 .啟動(dòng)子(pro

50、moter):DNA®上能指示RNA專錄起始的DNA列稱啟動(dòng)子。32 .轉(zhuǎn)錄單位(transcriptionunit):RNA勺轉(zhuǎn)錄只在DNA的一個(gè)片段上進(jìn)行，這段DNA列叫轉(zhuǎn)錄單位。33 .內(nèi)含子(intron):真核生物基因中，不為蛋白質(zhì)編碼的、在mRNAm工過程中消失的DNA序列，稱內(nèi)含子。34 .外顯子(exon):真核生物基因中，在mRNAb出現(xiàn)并代表蛋白質(zhì)的DN際列，叫外顯子。35 .轉(zhuǎn)錄加工(post-transcriptionalprocessing):細(xì)菌中很多RNA分子和幾乎全部真核生物的RNA在合成后都需要不同程度的加工，才能形成成熟的RN肪子，這個(gè)過程叫轉(zhuǎn)錄后

51、加工。36 .核內(nèi)不均一RNA(hnRNA)是真核生物細(xì)胞核內(nèi)的mRN廁體分子，分子量較大，并且不均一，含有許多內(nèi)含子。37 .RNA勺復(fù)制（RNAreplication）:某些病毒RN幽可以做為模板合成病毒蛋白質(zhì)又可在RNA復(fù)制酶（RNAreplicase）的催化下，以自身RNA為模板，合成互補(bǔ)的RN順鏈，合成方向5'f3',這一過程叫RNA<制。（2） 問答題1 .試述Meselson和Stahl關(guān)于DNA半保留復(fù)制的證明實(shí)驗(yàn)。提示：將E.coli放入以15NH4Cl為唯一氮源的培養(yǎng)基中連續(xù)培養(yǎng)十幾代，使所有DNA分子標(biāo)記上15N;將15N標(biāo)記的E.coli再放入普通

52、的14N培養(yǎng)基中培養(yǎng)，在細(xì)胞生長一代、二代、n代的時(shí)間間隔內(nèi)采樣；采用氯化葩密度梯度離心分離DNA并用紫外照相技術(shù)檢測DNA所在位置；結(jié)果如下：其結(jié)果確切地證明DNA半保留方式復(fù)制。2 .描述大腸桿菌DNA聚合酶I在DNA生物合成過程中的作用。E.coliDNA聚合酶I是多功能酶，具有：DNAm合酶活性，能按模板要求，以5'-3'方向合成DNA在DNA復(fù)制中，常用以填補(bǔ)引物切除后留下的空隙；5'-3'外切酶活性，DNA復(fù)制后期，用于切除RNA引物；3'-5'外切酶活性，用以校對(duì)復(fù)制的正確性，當(dāng)出現(xiàn)錯(cuò)配堿基時(shí)，切除錯(cuò)配堿基直到正確配對(duì)為止；DNAM

53、合酶I不是DNAM制和校正中的主要聚合酶，它的功能主要是修復(fù)。3 .試述DNA復(fù)制過程，總結(jié)DNA復(fù)制的基本規(guī)律。以E.coli為例，DNA復(fù)制過程分三個(gè)階段；起始：從DNA上控制復(fù)制起始的序列即起始點(diǎn)開始復(fù)制，形成復(fù)制叉，復(fù)制方向多為雙向，也可以是單向，若以雙向進(jìn)行復(fù)制，兩個(gè)方向的復(fù)制速度不一定相同。由于DNA聚合酶不能從無到有合成新鏈，所以DNA復(fù)制需要有含3'-OH的引物，引物由含有引物酶的引發(fā)體合成一段含310個(gè)核甘酸的RNA片段；延長：DNA復(fù)制時(shí)，分別以兩條親代DNAg為模板，當(dāng)復(fù)制叉沿DNA移動(dòng)時(shí)，以親代3'-5'鏈為模板時(shí)，子鏈的合成方向是5'-

54、3',可連續(xù)進(jìn)行，以親代5'-3'鏈為模板時(shí)，子鏈不能以3'-5'方向合成，而是先合成出許多5'-3'方向的岡崎片段，然后連接起來形成一條子鏈；終止：當(dāng)一個(gè)岡崎片段的3'-OH與前一個(gè)岡崎片段的5'-磷酸接近時(shí)，復(fù)制停止，由DNAm合酶I切除引物，填補(bǔ)空隙，連接酶連接相鄰的DNM段。DNA復(fù)制時(shí)，由DNAB旋酶（又稱解鏈酶）通過水解ATP獲得能量來解開DNA<鏈，并沿復(fù)制叉方向移動(dòng)，所產(chǎn)生的單鏈很快被單鏈結(jié)合蛋白所覆蓋，防止DNA的變性并保護(hù)其單鏈不被降解，復(fù)制叉前進(jìn)過程中，雙螺旋產(chǎn)生的應(yīng)力在拓?fù)洚悩?gòu)酶的作用下得到調(diào)

55、整。DNA復(fù)制基本規(guī)律：復(fù)制過程為半保留方式；原核生物單點(diǎn)起始，真核生物多點(diǎn)起始，復(fù)制方向多為雙向，也有單向；復(fù)制方式呈多樣性，（直線型、Q型、滾動(dòng)環(huán)型等）；新鏈合成需要引物，引物RNA長度一般為幾個(gè)10個(gè)核甘酸，新鏈合成方向5'-3',與模板鏈反向，堿基互補(bǔ)；復(fù)制為半不連續(xù)的，以解決復(fù)制過程中，兩條不同極性白鏈同時(shí)延伸問題，即一條鏈可按5'-3'方向連續(xù)合成稱為前導(dǎo)鏈，另一條鏈先按5'-3'方向合成許多不連續(xù)的岡崎片段（原核生物一般長1000-2000個(gè)核苷酸，真核生物一般長100-200個(gè)核苷酸），再通過連接酶連接成完整鏈，稱后隨鏈，且前導(dǎo)鏈

56、與后隨鏈合成速度不完全一致，前者快，后者慢；復(fù)制終止時(shí)，需切除前導(dǎo)鏈、岡崎片段的全部引物，填補(bǔ)空缺，連接成完整DNA鏈；修復(fù)和校正DNA復(fù)制過程出現(xiàn)的損傷和錯(cuò)誤，以確保DNA復(fù)制的精確性。4 .什么是逆轉(zhuǎn)錄？病毒中的單鏈RNA如何利用逆轉(zhuǎn)錄酶合成雙鏈DNA并整合到寄主細(xì)胞的基因組中？提示：見名詞解釋“逆轉(zhuǎn)錄”。病毒的單鏈RNAE病毒進(jìn)入寄主細(xì)胞后被釋放出來，此RNA帶有與模板互補(bǔ)的tRNA引物，病毒的逆轉(zhuǎn)錄酶以此RNA為模板，從引物的3'-OH端，按堿基互補(bǔ)原則以5'-3'方向合成DNAB1（-）,形成RNA-DNA交分子，然后逆轉(zhuǎn)酶發(fā)揮RNA水解酶活性，水解雜交分子中的RNA鏈，最后以新合成的DNAB1（-）為模板，合成另一條DNA鏈（+）,形成雙鏈DNA分子（為病毒）整合到寄主基因組中，隨寄主細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄，產(chǎn)生病毒RNA（+）,此RNAM翻譯病毒蛋白質(zhì)，可作為后代病毒RNA5 .DNA的損傷原因是什么？提示：自身復(fù)制過程中發(fā)生的錯(cuò)誤：外界環(huán)境的影響，如物理因素（紫外線、X一射線車§射等），化學(xué)因素（各種誘變劑、抗菌素等）。造成嘧啶堿基形成聚合體，發(fā)生堿基錯(cuò)配、缺失和插入。6簡述基因工程的基本操作步驟及其應(yīng)用意義。提示：獲取外源目的基因；尋找基因載體（通常為質(zhì)粒、噬菌體等）使用限制性內(nèi)切