公共場所微生物檢驗(yàn)作業(yè)指導(dǎo)書

1、作業(yè)垣號節(jié)編號：ZQCDC/ZY02第1頁共1頁公共場所毛巾、床上臥具微生物檢驗(yàn)方法大腸 菌群測定操作規(guī)程第1次修訂實(shí)施日期：2011年5月1日1、目的依據(jù)GB/-2000公共場所茶具微生物檢驗(yàn)方法大腸菌群測定，熟練掌握此規(guī)程，保證檢驗(yàn) 結(jié)果的準(zhǔn)確性。2、適用范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了公共場所公用毛巾、床上臥具大腸菌群的測定方法。3、責(zé)任使操作者熟悉此規(guī)程，井在具體樣品檢驗(yàn)中嚴(yán)格道照操作，確保檢測結(jié)果準(zhǔn)確性。4、內(nèi)容：定義：大腸菌群指一群在37C、24h能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸、產(chǎn)氣、需氧和兼性厭癢的革蘭氏陰性無芽胞桿 菌。該菌主要來源于人畜糞便，故以次作為糞便污染指標(biāo)來評價(jià)公用毛巾' 床上臥具的衛(wèi)生質(zhì)

2、儀器：見GB/T 一 2000中第3章。培養(yǎng)基和試劑：見GB/T -2000中第4章。檢驗(yàn)程序：見GB/T -2000中第5章。操作步摞4.5.1采樣方法4.5.1.1隨機(jī)法：隨機(jī)抽取清洗消毒后準(zhǔn)備使用的毛巾、床上臥具。4.5.1.2涂抹法：用測定細(xì)菌總數(shù)時采集的樣品，無需重采。4.5.1.3紙片法：用滅菌生理鹽水濕潤5cmx 5cm大腸菌群快速測定紙片兩張，分別貼在毛 巾、床上臥具規(guī)定部位和面積范圍內(nèi)，約30s后取下，置于無菌塑料袋內(nèi)。4.5.2檢驗(yàn)方法4.5.2.1發(fā)酵法4.5.2. 用測定細(xì)菌總數(shù)剩余的檢樣，倒入雙料乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)液中。置36C± 1C培養(yǎng)箱 內(nèi)培養(yǎng)24X4.

3、5.2. 觀察是否產(chǎn)算、產(chǎn)氣，若有變黃和氣體產(chǎn)生，該管推測是檢驗(yàn)陽性.如不產(chǎn)酸、產(chǎn) 氣則為大腸菌群陰性。4.5.2. 自推測性檢驗(yàn)陽性管中取一接種環(huán)培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)種伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，置36C± 1C培養(yǎng)箱培養(yǎng)1824h,然后取出，觀察菌落形態(tài)，并做革蘭氏染色和證實(shí)性試驗(yàn)。4.5.2. 在上述平板上，挑取可疑大腸菌群菌落12個進(jìn)行染色鏡檢；同時接種乳糖發(fā)酵管，只36C± 1C培養(yǎng)24h04.5.3紙片法將已采樣的紙片置36C土 1C培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)16T8 h,觀察結(jié)果。結(jié)果報(bào)告見GB/ 2000中第7章。作業(yè)指導(dǎo)書編號：ZQCDC/ZY03第1頁共2頁公共場所浴盆、臉（腳）盆微生

4、物第1次修訂檢驗(yàn)方法細(xì)菌總數(shù)測定操作規(guī)程實(shí)施日期：2011年5月1日1、目的：公共場所浴盆' 臉（腳）盆微生物檢驗(yàn)方法細(xì)菌總數(shù)測定。2、適用范圍：本標(biāo)準(zhǔn)適用于公共場所浴盆' 臉（腳）盆細(xì)菌總數(shù)的測定。3、責(zé)任：使操作者熟悉本規(guī)程，并在具體樣品檢驗(yàn)中嚴(yán)格道照操作，確保檢測結(jié)果準(zhǔn)確性。4、內(nèi)容定義細(xì)菌總數(shù)：指公共場所浴盆' 臉（腳）盆經(jīng)過采樣處理，在一定條件下培養(yǎng)后（培養(yǎng)基成 分、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時間、PH值、需氧性質(zhì)等），25cm,表面上含菌落的總數(shù)。本方法規(guī)定的培養(yǎng)條件下所得結(jié)果，只包括一群在營養(yǎng)瓊脂上生長發(fā)育的嗜中溫性 需氧菌落總數(shù)。細(xì)菌總數(shù)可作為判定公共場所浴盆、臉（

5、腳）盆被污染程度的標(biāo)志，也可以為公共場所浴 盆、臉（腳）盆消毒效果的判定和評價(jià)提供依據(jù)。儀器見GBZ 2000中第四章培養(yǎng)基和試劑431營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基見 GB/ 2000 中4.3.2無菌生理鹽水：分裝125mL瓶供浴盆采樣，50mL瓶供臉（腳）盆采樣。米樣4.4.1采樣必須在無菌操作下進(jìn)行，采樣用具應(yīng)高壓滅菌121C 20分鐘。4.4.2采樣部位，選擇在盆內(nèi)側(cè)壁二分之一至三分之一高度釆樣。4.4.3采樣布點(diǎn)，浴盆可在四壁及盆底呈梅花布點(diǎn)，臉（腳）盆可在相對兩側(cè)壁布點(diǎn)。4.4.4米樣方法4.4.4.1涂抹法：用侵有無菌生理鹽水的棉拭子在規(guī)格板（5cmx5cm）內(nèi)來回均勻涂滿 整個方格，井隨之轉(zhuǎn)

6、動棉試子，剪去手接觸部位后，將涂抹浴盆的5個棉試子一井放入125mL生 理鹽水燒瓶中，涂抹臉（腳）盆的2個棉試子一井放入50111L生理鹽水三角燒瓶中，充分振搖或 在旋渦振蕩器上振蕩1分鐘，每毫升的菌濃度相當(dāng)于1平方厘米的菌量。4.4.4.2斑貼法：將5cmx5cm無菌濾紙片放入滅蘭平皿中，注入滅菌生理鹽水1mL片 （吸滿為止），以無菌操作將濾紙片貼到采樣部位，1分鐘后按序取下，將貼浴盆的5片濾紙一井 放入125,mL生理鹽1分鐘，每毫升的菌嘗試相當(dāng)于1平方厘米的菌量。檢驗(yàn)方法4.5.1用1mL滅菌吸管吸取樣品1mL加到滅菌平皿內(nèi)，同樣再吸1mL加到作業(yè)指導(dǎo)書公共場所浴盆、臉（腳）盆微生物檢驗(yàn)

7、方法細(xì)菌總數(shù)測定操作規(guī)程編號：ZQCDC/ZY03第2頁 共2頁第1次修訂實(shí)施日期：2011年5月1日平皿內(nèi)。4.5.2如污染嚴(yán)重，可作10倍遞増稀釋，每遞增稀釋一次，換一支無菌吸客，每個稀釋 度接種兩個平皿C4.5.3稀釋液移入平皿后，應(yīng)及時將冷卻至46 C的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（可放置46C±1C 水浴保溫）注入平皿約15mL并轉(zhuǎn)動平皿使混合均勻。待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置36C士 1C溫箱內(nèi)培養(yǎng)48h.菌落計(jì)數(shù)方法見GB/2000中第8章。浴盆、臉（腳）的細(xì)菌數(shù)按式（1）計(jì)算:m=式中：m一細(xì)菌總數(shù)，cfu/25 m2; k一稀釋倍數(shù)； n一平均菌落數(shù)；9菌落計(jì)數(shù)的報(bào)告見GB/ 20

8、00中的第9童。作業(yè)指導(dǎo)書編號：ZQCDC/ZY04第1頁共3頁公共場所茶具微生物檢驗(yàn)萬法細(xì)菌第1次修訂總數(shù)測定操作規(guī)程實(shí)施日期：2011年5月1日1、目的：公共場所茶具微生物檢驗(yàn)方法細(xì)菌總數(shù)測定。2、適用范圍：本標(biāo)準(zhǔn)適用于公共場所茶具細(xì)菌總數(shù)的測定。3、責(zé)任：使操作者熟悉本規(guī)程，并在具體樣品檢驗(yàn)中嚴(yán)格遵照操作，確保檢測結(jié)果準(zhǔn)確性。4、內(nèi)容定義細(xì)菌總數(shù)：指公用茶具經(jīng)過采樣處理，在一定條件下培養(yǎng)后（培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng) 吋間、PH值、需氧性質(zhì)等），icm表面上含菌落的總數(shù)。本方法規(guī)定的培養(yǎng)條件下所得結(jié)果，只 包括一群在營養(yǎng)瓊脂上生長發(fā)育的嗜中溫性需氧菌落總數(shù)。細(xì)菌總數(shù)可作為判定公用茶具被污

9、染程度的標(biāo)志，也可以為公用茶具消 毒效果的判定和評價(jià) 提供了依據(jù)。儀器高壓蒸汽滅菌器。干熱滅菌箱。培養(yǎng)箱：36C± 1CO冰箱。電爐。天平。滅菌。滅菌平皿：直徑9cm.滅菌刻度吸管：1mL,10mL滅菌棉拭子。滅菌剪刀。放大鏡。PH計(jì)或精密PH式紙。培養(yǎng)基和試劑4.3.1生理鹽水成分：愚化鈉|蒸水 1000mL制法：將氯化鈉（）溶解于蒸胡水（1000mL中，分裝到試管內(nèi)，每管10mL,12IC20min 高壓滅菌。4.3.2營養(yǎng)瓊脂檢驗(yàn)程序細(xì)菌總數(shù)檢驗(yàn)程序如下：作業(yè)指導(dǎo)書編號：ZQCDC/ZY04¥2公共場所茶具微生物檢驗(yàn)方法細(xì)菌總數(shù)測定操作規(guī)程第1次修訂實(shí)施日期：2011

10、年5月1日操作步驟4.5.1采樣方法4.5.1.1隨機(jī)抽取清洗消毒后準(zhǔn)備使用的茶具。50cm,將棉拭子放入10ml生皿1mL如污染嚴(yán)重,4.5.1.2 用滅菌生理鹽水濕潤棉拭子，在茶具內(nèi)、外緣,涂沬 即1 -1.5cm高處一圈（口唇接觸處）。用滅菌剪刀剪去棉簽手接觸的部分， 理鹽水內(nèi)，4h內(nèi)送檢。4.5.2檢驗(yàn)方法4.5.2.1將放有棉拭子的試管充分振搖。此液為1： 10稀釋液。4.522以無菌操作，吸取2ml檢樣，分別注入到兩塊滅菌平皿內(nèi)，每可十倍遞增稀釋，即吸取1ml加到9ml滅菌生理鹽水中，混勻，此液為1： 100稀釋液。每個稀釋度做兩塊平皿。4.5.2.3 將己融化冷至45 C左右的營

11、養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾入平皿，每皿約15ml,并立即旋搖 平皿。冷浪后放36C± 1C培養(yǎng)基培養(yǎng)48h.菌落計(jì)數(shù)方法作平皿菌落計(jì)數(shù)時，可用肉眼直接觀察，必要時用放大鏡檢查為防遺漏，在記下平皿的菌落數(shù) 后，求岀同一稀釋度各平皿生長的平均菌落數(shù)。若平皿中有連成片狀的菌落，該平皿不宜計(jì)數(shù)；若 片狀菌不到平皿中的一半，而其余一半中菌落分布均勻，則可將此半個平皿菌落計(jì)數(shù)后乘以2.所得 結(jié)果代表全皿菌落數(shù)。實(shí)際公用茶具菌落數(shù)，按式（1）計(jì)算:a=50式中：a細(xì)菌總數(shù)，cfu/cm 2b-平均菌落數(shù)c一稀釋倍數(shù)。菌落計(jì)數(shù)的報(bào)告編號：ZQCDC/ZY054.7.1選擇平均菌落在30300之間的稀釋度，乘以稀

12、釋倍數(shù)報(bào)告作業(yè)指導(dǎo)書公共場所毛巾、床上臥具微第1次修訂生物檢驗(yàn)方法細(xì)菌總數(shù)測定實(shí)施日期：2011年5月1日1、目的依項(xiàng)GB/ 200。公共場所毛巾、床上臥具微生物檢驗(yàn)方法大腸菌群測定，熟練掌握此規(guī)程，保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。?、運(yùn)用范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了公共場所毛巾、床上臥具大腸菌群的測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了公共場所公用毛 巾、床上臥具大腸菌群的測定方法。3、責(zé)任使操作者熟悉此規(guī)程，并在具體樣品檢驗(yàn)中嚴(yán)格道照操作，確保檢測結(jié)果準(zhǔn)確性。4、內(nèi)容定義細(xì)菌總數(shù)：指被檢物品經(jīng)過采樣處理，在一定條件下培養(yǎng)后(培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時 間、PH值' 需氧性質(zhì)等)，25cm2表面上含菌落的總數(shù)。本方法規(guī)定

13、的培養(yǎng)條件下所得結(jié)果，只 包括一群在營養(yǎng)瓊脂上生長發(fā)育的嗜中溫性需氧菌落總數(shù)。細(xì)菌總數(shù)可作為判定公用毛巾、床上臥具被污染程度的標(biāo)志，檢測細(xì)菌總數(shù).公用毛巾、床 上臥具消毒效果的判定和評價(jià)提供依據(jù)。儀器見GB沖第4章4.2.2 培養(yǎng)基和試劑見GB沖第5章4.2.3檢驗(yàn)程序見GB/2000中第6章操作步驟4.3.1 米樣方法4.3.1.1隨機(jī)抽取清洗消毒后準(zhǔn)備使用的毛巾、床上臥具4.3.1.2 用滅菌生理鹽水濕潤棉試子，在毛巾、枕巾對折后兩面的各面各|2 22.5cm (5cmx 5cm)面積范圍；床單、被單在上下兩部各25cm面積范圍內(nèi)有順序地來回涂抹， 用滅菌剪刀剪去棉簽手接觸的部分，將棉試子

14、放入10mL生理鹽水內(nèi)，4h內(nèi)送檢。4.3.2 檢驗(yàn)方法4 3.2.1將放有棉試子的試管充分振搖。此液為1： 104.3.2 2 以無菌操作，吸取2mL檢樣，分別注入到兩塊滅菌平皿內(nèi)，每皿1mL.如污染嚴(yán) 重，可十倍遞増稀釋，即吸取1mL加到9mL滅菌生理鹽水中，混勻，此液為1： 100稀釋液。 每個稀釋度做兩塊平皿。4.3.2.3 將已融化冷至45C左右的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾入平皿，每皿約 15mL并立即旋搖平皿。冷凝后放入36C±1C培養(yǎng)箱培養(yǎng)48h.作業(yè)指導(dǎo)書編號：ZQCDC/ZY05:第2頁共2頁：公共場所毛巾、床上臥具微生物 檢驗(yàn)方法第1次修訂細(xì)菌總數(shù)測定實(shí)施日期：2011年5月1日菌落計(jì)數(shù)萬法作平皿菌落計(jì)數(shù)時，可用肉眼直接觀察，必要時用放大鏡檢 查以防遺漏, 在記下各平皿的菌落數(shù)后，求出同一稀釋