關(guān)于協(xié)助復(fù)核鹽酸左氧氟沙星膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的函

1、關(guān)于協(xié)助復(fù)核“鹽酸左氧氟沙星膠囊”質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的函安徽省藥品檢驗(yàn)所、成都市藥品檢驗(yàn)所、內(nèi)蒙古藥品檢驗(yàn)所和海南省藥品檢驗(yàn)所：按照國(guó)家藥典會(huì)國(guó)藥典化發(fā)200825號(hào)文，我所承擔(dān)了鹽酸左氧氟沙星膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的修訂工作?，F(xiàn)將我所修訂后的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及起草說(shuō)明呈上，請(qǐng)協(xié)助復(fù)核。隨文另附三批樣品。附件：1鹽酸左氧氟沙星膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)2鹽酸左氧氟沙星膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)起草說(shuō)明3. 鹽酸左氧氟沙星膠囊標(biāo)準(zhǔn)起草與復(fù)核工作運(yùn)轉(zhuǎn)單二九年二月十三日主題詞：鹽酸左氧氟沙星膠囊 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)抄 報(bào)：國(guó)家藥典委員會(huì) 北京市藥品檢驗(yàn)所 2009年2月13日印發(fā)鹽酸左氧氟沙星膠囊 （修改稿）09，7，24Yansuan Zuoyangfushax

2、ing JiaonangLevofloxacin Hydrochloride Capsules本品含鹽酸左氧氟沙星以左氧氟沙星（C18H20FN3O4）計(jì)，應(yīng)為標(biāo)示量的90.0%110.0%?！捐b別】（1）取本品的內(nèi)容物適量（約相當(dāng)于左氧氟沙星10mg）,置干燥具塞試管中，加丙二酸約10mg與醋酐0.5ml，在水浴中加熱510分鐘，溶液顯紅棕色。（2）取溶出度項(xiàng)下的溶液，照紫外-可見(jiàn)分光光度法（附錄IVA）測(cè)定，在294nm的波長(zhǎng)處有最大吸收。（3）取本品內(nèi)容物適量，用0.1mol/L的鹽酸溶液制成每1ml中約含左氧氟沙星0.1mg的溶液，濾過(guò)，取續(xù)濾液適量，用流動(dòng)相稀釋制成每1ml中含左氧氟

3、沙星0.02mg的溶液，作為供試品溶液；另取氧氟沙星對(duì)照品，用0.1mol/L的鹽酸溶液溶解并稀釋制成每1ml中約含氧氟沙星0.1mg的溶液，精密量取適量，用流動(dòng)相稀釋成每1ml中含氧氟沙星0.04mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照高效液相色譜法（附錄V D）試驗(yàn)。用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以硫酸銅D-苯丙氨酸溶液（取D-苯丙氨酸1.32g與硫酸銅1g，加水1000ml溶解后，用氫氧化鈉試液調(diào)節(jié)pH值至3.5）甲醇（82：18）為流動(dòng)相；柱溫40，流速為1ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為293nm。取供試品溶液與對(duì)照品溶液各20l，分別注入色譜儀，記錄色譜圖，左氧氟沙星峰與其異構(gòu)體的色譜峰之間的分離

4、度應(yīng)符合要求。供試品溶液主峰的保留時(shí)間應(yīng)與氧氟沙星對(duì)照品中左氧氟沙星峰（后）的保留時(shí)間一致。（4）取本品的內(nèi)容物適量，加水振搖使鹽酸左氧氟沙星溶解，濾過(guò)，濾液顯氯化物鑒別反應(yīng)（附錄 III）。【檢查】 溶出度 取本品，照溶出度測(cè)定法（附錄X C第一法），以鹽酸溶液（91000）900ml為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為每分鐘50轉(zhuǎn)，依法操作，經(jīng)30分鐘時(shí)，取溶液10ml，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液適量，加鹽酸溶液（91000）稀釋制成每1ml約含左氧氟沙星5.5g的溶液，作為供試品溶液；另精密稱(chēng)取左氧氟沙星對(duì)照品適量，加鹽酸溶液（91000）溶解并定量稀釋制成每1ml中約含5.5g的溶液，作為對(duì)照品溶液。取上述兩

5、種溶液，照紫外-可見(jiàn)分光光度法(附錄IV A)，在294nm 的波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸光度，計(jì)算每粒的溶出量。限度為標(biāo)示量80%，應(yīng)符合規(guī)定。有關(guān)物質(zhì) 取本品細(xì)粉適量，精密稱(chēng)定，用流動(dòng)相溶解并定量稀釋制成每1ml中約含左氧氟沙星1mg的溶液，搖勻，作為供試品溶液；精密量取適量，加流動(dòng)相定量稀釋制成每1ml中含左氧氟沙星5g的溶液，作為對(duì)照溶液。照含量測(cè)定項(xiàng)下的色譜條件，取對(duì)照溶液10l注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為滿(mǎn)量程的10%-20；再精密量取對(duì)照溶液和供試品溶液各10l，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的3倍。供試品溶液的色譜圖中如有雜質(zhì)峰，雜質(zhì)A,B,

6、C(以左氧氟沙星峰為參比，相對(duì)于保留時(shí)間約為0.74，1.08，2.57處)峰面積不得大于對(duì)照溶液主峰面積的1/5(0.1)，其他單個(gè)雜質(zhì)峰面積不得大于對(duì)照溶液主峰面積的1/2（0.25），各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對(duì)照溶液主峰面積（0.5）。取本品內(nèi)容物適量，按標(biāo)示量用0.1mol/L鹽酸溶液溶解并定量稀釋制成每1ml中約含1.2mg的溶液，作為供試品溶液；照鹽酸左氧氟沙星項(xiàng)下的方法測(cè)定，供試品溶液色譜圖中如有雜質(zhì)峰，含雜質(zhì)A（238nm檢測(cè)）的量，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，不得過(guò)0.3%。其他單個(gè)雜質(zhì)（294nm檢測(cè)）峰面積不得大于對(duì)照溶液主峰面積的1.5倍（0.3%）。其他各雜質(zhì)峰面積的和（2

7、94nm檢測(cè)）不得大于對(duì)照溶液主峰面積的3.5倍（0.7%）。（供試品溶液中任何小于對(duì)照溶液主峰面積0.1倍的峰可忽略不計(jì)）。其他 應(yīng)符合膠囊劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定（附錄I E）?！竞繙y(cè)定】 取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混合均勻，精密稱(chēng)取適量（約相當(dāng)于氧氟沙星0.12g），置100ml量瓶中，用0.1mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5ml，置50ml量瓶中，加0.1mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，照鹽酸左氧氟沙星項(xiàng)下的方法測(cè)定，即得。 取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物（約相當(dāng)于左氧氟沙星50mg），置50ml量瓶中，加鹽酸溶液（0.03mol/L）溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾

8、過(guò)，精密量取續(xù)濾液5ml置另一50ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，照鹽酸左氧氟沙星含量測(cè)定項(xiàng)下的方法測(cè)定，即得?！绢?lèi)別】 同鹽酸左氧氟沙星?！疽?guī)格】按C18H20FN3O4計(jì)算（1）0.1g ；（2）0.2g；（3）0.25g 【貯藏】 遮光，密封保存。 北京市藥品檢驗(yàn)所對(duì)鹽酸左氧氟沙星膠囊擬定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的起草說(shuō)明根據(jù)國(guó)家藥典會(huì)國(guó)藥典化發(fā)200825號(hào)文，我所承擔(dān)了中國(guó)藥典2010年版鹽酸左氧氟沙星片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的起草工作。經(jīng)在國(guó)家藥監(jiān)局的數(shù)據(jù)庫(kù)中查詢(xún)，共有57個(gè)批準(zhǔn)文號(hào)，我所向所有生產(chǎn)廠(chǎng)家發(fā)文征集樣品，共收到18個(gè)廠(chǎng)家55批樣品（有兩個(gè)規(guī)格，分別為0.1g和0.2g）。中國(guó)藥典2004增補(bǔ)本

9、中收載了該品種，同時(shí)有散頁(yè)國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)2個(gè)，標(biāo)準(zhǔn)號(hào)詳見(jiàn)表1，綜合上述標(biāo)準(zhǔn)并結(jié)合試驗(yàn)，制定了新的標(biāo)準(zhǔn)，現(xiàn)說(shuō)明如下：一、各標(biāo)準(zhǔn)的方法及限度比較（詳見(jiàn)表1）表1. 各標(biāo)準(zhǔn)比較項(xiàng)目中國(guó)藥典2004增補(bǔ)本YBH28972005YBH20502006性狀硬膠囊，內(nèi)容物類(lèi)白色或淡黃色粉末或顆粒硬膠囊，內(nèi)容物類(lèi)白色或淡黃色粉末或顆粒硬膠囊，內(nèi)容物類(lèi)白色至淡黃色粉末或顆粒鑒別顯色（2）HPLC(異構(gòu)體檢查方法)（3）氯化物鑒別（1）顯色（2）HPLC(異構(gòu)體檢查方法)（3）氯化物鑒別（1）顯色（2）HPLC(異構(gòu)體檢查方法)（3）氯化物鑒別檢查溶出度無(wú)溶劑：水，籃法，50rmp，30分鐘取樣，290nm測(cè)定，限

10、度為標(biāo)示量的80%。溶劑：0.1mol/LHCl，籃法，100 rmp ，45分鐘取樣；293nm測(cè)定，限度為標(biāo)示量的70%。有關(guān)物質(zhì)無(wú)HPLC法：自身對(duì)照：流動(dòng)相：0.05mol/L枸櫞酸（pH4.0）：乙腈（79：21）總雜質(zhì)不得過(guò)1.0HPLC法：自身對(duì)照：流動(dòng)相：0.05mol/L枸櫞酸（pH4.0）：乙腈（85：15）總雜質(zhì)不得過(guò)1.0異構(gòu)體檢查無(wú)HPLC法：流動(dòng)相：甲醇-L-異亮氨酸(1:7), 檢測(cè)波長(zhǎng)：295nm；不得過(guò)1.0無(wú)含量測(cè)定HPLC法: （取己烷磺酸鈉0.98g，加磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫鉀6.8g，加水溶解并稀釋至1000ml，加0.05mol/L磷酸約500ml

11、，使pH值為2.4）1000ml）甲醇（3：1）為流動(dòng)相；柱溫40；流速1ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為293nm.紫外測(cè)定法（290nm）紫外測(cè)定法（290nm）二、對(duì)鹽酸左氧氟沙星膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的起草說(shuō)明：(一) 含量測(cè)定限度：各標(biāo)準(zhǔn)一致，未作修改。（二）性狀：參考上述標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的性狀及10個(gè)廠(chǎng)家樣品的檢驗(yàn)結(jié)果，發(fā)現(xiàn)本品的性狀由于工藝不同存在多樣性，內(nèi)容物為類(lèi)白色至淡黃色粉末，或顆粒，或粉末和顆粒，或微丸。按照起草原則中提出關(guān)于膠囊內(nèi)容物如不影響質(zhì)量可不定入標(biāo)準(zhǔn)的原則，本標(biāo)準(zhǔn)中不定性狀項(xiàng)。（三）鑒別：參照上述標(biāo)準(zhǔn)，在擬訂質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中設(shè)置四項(xiàng)鑒別：(1) 顯色反應(yīng)；(2)紫外鑒別；（3）高效液相鑒別；（

12、4）氯化物鑒別。（四） 有關(guān)物質(zhì) 4.1色譜條件確定：由于左氧氟沙星見(jiàn)光不穩(wěn)定，容易產(chǎn)生降解，因此，光降解產(chǎn)物為主要雜質(zhì)。上述標(biāo)準(zhǔn)中有關(guān)物質(zhì)檢查所提供的流動(dòng)相均不能有效的分離光降解產(chǎn)物，而且沒(méi)有系統(tǒng)適用性試驗(yàn)。而左氧氟沙星原料（JX20060020）標(biāo)準(zhǔn)中提供的流動(dòng)相則能很好的分離兩個(gè)光降解產(chǎn)物（分離度在1.5以上）。為保證雜質(zhì)的檢出，擬定標(biāo)準(zhǔn)有關(guān)物質(zhì)檢查采用JX20060020標(biāo)準(zhǔn)中的流動(dòng)相（詳見(jiàn)所附質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)）。以下為用一個(gè)色譜柱（L-column ODS 4.6mm×250mm）采用不同流動(dòng)相得到的色譜圖：圖1 采用標(biāo)準(zhǔn)YBH28972005得到的色譜圖圖2 采用標(biāo)準(zhǔn)JX2006

13、00020得到的色譜圖從圖1圖2可以看出，只有JX200600020標(biāo)準(zhǔn)提供的流動(dòng)相可以將兩個(gè)光降解產(chǎn)物進(jìn)行有效分離。4.2輔料干擾試驗(yàn)：根據(jù)規(guī)格為0.1g的制劑的各生產(chǎn)廠(chǎng)家提供的生產(chǎn)工藝和處方組成，根據(jù)各處方中所用到的成分并按照其最大使用量制備一個(gè)大的處方（見(jiàn)表2）（即主藥（0.1g）+混合輔料（391.8mg）按照上述主藥與輔料的比例制備與供試品配制相同的空白輔料溶液，注入液相色譜儀（見(jiàn)圖1）圖1空白輔料溶液的色譜圖試驗(yàn)說(shuō)明輔料不干擾有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定。采用擬定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定方法對(duì)10個(gè)廠(chǎng)家鹽酸左氧氟沙星膠囊進(jìn)行的測(cè)定，結(jié)果詳見(jiàn)表2表2. 10個(gè)廠(chǎng)家鹽酸左氧氟沙星膠囊有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定結(jié)

14、果樣品批號(hào)生產(chǎn)廠(chǎng)家測(cè)定結(jié)果（）061001北京圣永制藥有限公司雜質(zhì)A：未檢出；雜質(zhì)B：未檢出；雜質(zhì)C：未檢出其它單個(gè)最大：0.04；總雜質(zhì)：0.1071203北京京豐制藥有限公司雜質(zhì)A：未檢出；雜質(zhì)B：未檢出；雜質(zhì)C：未檢出其它單個(gè)最大：0.07；總雜質(zhì)：0.1070313常州蘭陵制藥有限公司雜質(zhì)A：未檢出；雜質(zhì)B：未檢出；雜質(zhì)C：未檢出其它單個(gè)最大：0.04；總雜質(zhì)：0.0408022501揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)有限公司雜質(zhì)A：未檢出；雜質(zhì)B：未檢出；雜質(zhì)C：未檢出；其它單個(gè)最大：0.03；總雜質(zhì)：0.0320080103上海天龍藥業(yè)有限公司雜質(zhì)A：未檢出；雜質(zhì)B：未檢出；雜質(zhì)C：未檢出其它單個(gè)最大

15、：0.06；總雜質(zhì)：0.120071004 83吉林省東北亞藥業(yè)股份有限公司雜質(zhì)A：未檢出；雜質(zhì)B：未檢出；雜質(zhì)C：未檢出其它單個(gè)最大：0.09；總雜質(zhì)：0.10802212濟(jì)南利民制藥有限責(zé)任公司雜質(zhì)A：未檢出；雜質(zhì)B：未檢出；雜質(zhì)C：未檢出其它單個(gè)最大：0.05；總雜質(zhì)：0.1080301湖南康普制藥有限公司雜質(zhì)A：未檢出；雜質(zhì)B：未檢出；雜質(zhì)C：未檢出其它單個(gè)最大：0.04；總雜質(zhì)：0.04；071204海南普利制藥有限公司雜質(zhì)A：未檢出；雜質(zhì)B：未檢出；雜質(zhì)C：未檢出其它單個(gè)最大：0.07；總雜質(zhì)：0.1120071203廣東逸舒制藥有限公司雜質(zhì)A：未檢出；雜質(zhì)B：未檢出；雜質(zhì)C：未檢

16、出其它單個(gè)最大：0.03；總雜質(zhì)：0.034.3有關(guān)物質(zhì)的限度，根據(jù)樣品的測(cè)定結(jié)果（見(jiàn)表3），確定為：雜質(zhì)A,B,C(以左氧氟沙星峰為參比，相對(duì)于保留時(shí)間約為0.74，1.08，2.57處)峰面積不得大于對(duì)照溶液主峰面積的1/5(0.1)，其他單個(gè)雜質(zhì)峰面積不得大于對(duì)照溶液主峰面積的1/2（0.25），各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對(duì)照溶液主峰面積（0.5）。2溶出度：由于上述國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)溶出度測(cè)定方法有一定的差異，因此參考上述標(biāo)準(zhǔn)，統(tǒng)一了鹽酸左氧氟沙星膠囊的溶出度測(cè)定方法5.1溶出介質(zhì)的選擇：由于鹽酸左氧氟沙星在0.1mol/L鹽酸溶液中有很好的溶解性，而且0.1mol/L鹽酸溶液為溶出度首選的溶

17、出介質(zhì)，因此選擇0.1mol/L鹽酸溶液作為溶出介質(zhì)。5.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的確定：取測(cè)定濃度的樣品溶液，以溶出介質(zhì)為空白，在200nm300nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，確定溶出度測(cè)定波長(zhǎng)為294nm。5.3 空白輔料的干擾：通過(guò)試驗(yàn)證明空白輔料對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。5.4. 溶出條件的選擇：溶出方法首選籃法。轉(zhuǎn)速的選擇，分別使用籃法50rpm和100rpm，取樣點(diǎn)分別為5分鐘，15分鐘，25分鐘，30分鐘，45分鐘對(duì)三個(gè)廠(chǎng)家的樣品進(jìn)行溶出曲線(xiàn)的測(cè)定，測(cè)定結(jié)果分別見(jiàn)圖4和圖5。 三個(gè)廠(chǎng)家分別為：北京圣永制藥有限公司、揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)有限公司、廣東逸舒制藥有限公司（順序?yàn)閳D標(biāo)上的系列一、二、三）。圖4. 三個(gè)廠(chǎng)家

18、膠囊50rmp的溶出曲線(xiàn)圖5. 三個(gè)廠(chǎng)家膠囊劑100rmp的溶出曲線(xiàn)根據(jù)上述三個(gè)廠(chǎng)家溶出曲線(xiàn)測(cè)定結(jié)果，最終選定籃法，由于轉(zhuǎn)速為50rmp時(shí)，30分鐘取樣，結(jié)果均達(dá)到90%，因此按照從嚴(yán)的原則確定溶出方法為：籃法；轉(zhuǎn)速為50rmp，30分鐘取樣。5.5溶出度測(cè)定方法的回收率：按照主藥（0.1g）與混合輔料（391.8mg）（大處方量）使用量的比例按照測(cè)定濃度100%、80%和70%配制溶出度的回收樣品溶液，高、中、低三個(gè)濃度平均回收率的測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。表3 回收試驗(yàn)結(jié)果加入量（mg）測(cè)得量(mg)：回收率(%)：平均回收率(%)：9.279.1698.8398.919.809.6698.5810

19、.8410.7799.338.108.0699.4499.758.478.4799.979.299.2799.847.747.81100.79100.387.337.36100.487.517.5099.889份的平均回收率為99.68%，RSD為0.73%。經(jīng)過(guò)上述溶出度方法學(xué)試驗(yàn)，說(shuō)明擬定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的方法可行（測(cè)定方法詳見(jiàn)擬定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)）。5.6 采用擬定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的溶出度測(cè)定方法對(duì)10個(gè)廠(chǎng)家鹽酸左氧氟沙星膠囊進(jìn)行的測(cè)定，結(jié)果詳見(jiàn)表4。表4. 10個(gè)廠(chǎng)家鹽酸左氧氟沙星膠囊的溶出度測(cè)定結(jié)果樣品批號(hào)生產(chǎn)廠(chǎng)家測(cè)定結(jié)果（）（平均值）061001北京圣永制藥有限公司95.8071203北京京豐制藥有限公司

20、99.2070313常州蘭陵制藥有限公司99.508022501揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)有限公司103.020080103上海天龍藥業(yè)有限公司108.420071004 83吉林省東北亞藥業(yè)股份有限公司97.70802212濟(jì)南利民制藥有限責(zé)任公司100.6080301湖南康普制藥有限公司98.6071204海南普利制藥有限公司95.820071203廣東逸舒制藥有限公司101.2(六) 含量測(cè)定 國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)中主要為液相色譜法和紫外-可見(jiàn)分光光度法?，F(xiàn)統(tǒng)一為液相色譜法，色譜條件與有關(guān)物質(zhì)方法相同。由于為已有標(biāo)準(zhǔn)，且在有關(guān)物質(zhì)項(xiàng)下進(jìn)行的輔料干擾試驗(yàn)中說(shuō)明輔料沒(méi)有干擾，因此不再進(jìn)行回收試驗(yàn)。按照擬定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的含量測(cè)定方法對(duì)10個(gè)廠(chǎng)家鹽酸左氧氟沙星膠囊進(jìn)行的測(cè)定，結(jié)果詳見(jiàn)表5。表5. 10個(gè)廠(chǎng)家鹽酸左氧氟沙星膠囊的含量測(cè)定結(jié)果樣品批號(hào)生產(chǎn)廠(chǎng)家測(cè)定結(jié)果（）（平均值）061001北京圣永藥廠(chǎng)93.5071203北京京豐制藥廠(chǎng)103.6070313常州