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文檔簡介

1、參參康心膠囊對小鼠心肌缺血線粒體膜SOD、MDA的影響      作者:蘭云 明海霞 劉喜平 李沛清 廖湘琦 【摘要】  目的:觀察參參康心膠囊對缺血小鼠心肌線粒體丙二醛、超氧化物歧化酶的影響。方法:腹腔注射垂體后葉素(Pit)造成小鼠心肌缺血損傷為模型,測定心肌線粒體膜超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量。結果:模型組與空白對照組相比,MDA明顯升高(p<0.01),參參康心膠囊大、中、小三劑量組與模型組比較MDA含量明顯下降,有顯著性差異,但無明顯的劑量-效應關系。模型組心肌細胞線粒體SOD活力略有下降,但不明顯,

2、而參參康心膠囊大劑量組SOD活力有顯著增高,而中小劑量不明顯。結論:參參康心膠囊保護缺血心肌細胞線粒體損傷的機理可能與升高線粒體SOD活性、降低MDA含量有關。 【關鍵詞】  參參康心膠囊 心肌缺血 線粒體 丙二醛 超氧化物歧化酶     氧自由基是造成心肌缺血的重要因素之一。細胞內豐富的線粒體對氧自由基損傷十分敏感1、2,所以通過對線粒體的代謝、結構及功能變化的研究,既可以了解心肌缺血性損傷的機制,又可以了解藥物的治療效果。新藥參參康心膠囊來源于名老中醫(yī)驗方,由人參等三味藥物組成,經現代制藥工藝加工而成,臨床應用多年,對冠心病、心肌梗死等心肌缺血性疾病

3、有顯著療效。為了近一步明確該方抗心肌缺血損傷的作用機制,我們觀察了該藥對缺血心肌線粒體膜氧自由基及脂質過氧化的影響,以期進一步了解該制劑對改善心肌缺血的作用機制,為臨床治療心肌缺血性疾病提供可靠的理論依據。     1  材料     1.1  實驗動物  昆明種普通級健康小鼠,雌雄各半,體重30.0±2.0g,由蘭州大學醫(yī)學實驗中心提供。動物合格證號:醫(yī)動字第14005。     1.2  實驗藥物  參參康心膠囊:處方由人參等三味藥物按一定的

4、比例組成。由蘭州佛慈制藥股份有限公司制備,蘭州中藥現代化工程技術中心監(jiān)制。規(guī)格為0.5g·粒-1(每粒相當于生藥1g),實驗時用生理鹽水溶解為120mg生藥/ml。地奧心血康膠囊:成都地奧制藥集團有限公司,批號:0503079 代號022,國藥準字:Z10910051。垂體后葉素:上海第一生化藥業(yè)公司,上海生物化學制藥廠,批號:041031。     1.3  主要試劑  丙二醛(MDA)測定試劑盒,南京建成生物工程研究所,批號:20050919。超氧化物歧化酶(SOD)測試盒,南京建成生物工程研究所,批號:20050927。 

5、60;   1.4  主要儀器  電子天平(Sartorius BL150,北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司);離心機(D-37520 ,德國 );數顯恒溫水浴鍋(HH-4,鄭州杜甫儀器廠 );紫外分光光度計(UV-9100,北京瑞利分析儀器公司)。     2  方法     2.1  分組及小鼠心肌缺血模型的建立     昆明種普通級健康小鼠,60只,體重30.0±2.0g,(蘭州大學醫(yī)學實驗中心提供)。將動物隨機分為空白對照組、模型組

6、、陽性對照組(地奧心血康組)、參參康心膠囊小劑量組、參參康心膠囊中劑量組、參參康心膠囊大劑量組共六組,每組10只。參參康心膠囊低劑量組(1.5g生藥/kg)、中劑量組(3g生藥/kg)、大劑量組 (6g生藥/kg)用參參康心膠囊溶液分別按0.25ml/次、0.5ml/次、1ml/次灌胃;陽性對照組按成人常規(guī)劑量折算后給藥即(0.076g/kg),1ml/次灌胃;空白對照組與模型組每日給予1ml生理鹽水, 各組每天灌胃2次,連續(xù)一周。參考文獻方法2,模型組、陽性對照組(地奧心血康組)、參參康心膠囊小劑量組、參參康心膠囊中劑量組、參參康心膠囊大劑量組于末次給藥30min后,腹腔注射垂體后葉素(Pi

7、t)30u/kg。     2.2  小鼠心肌細胞線粒體的分離、提取     參考文獻方法3,注射Pit15min后,將小鼠處死,立即摘取心臟,在冰冷的(4)磷酸緩沖液中洗去血液,濾紙拭干,稱重; 取心臟用眼科小剪刀盡快剪碎,倒入玻璃勻漿管中,加入9倍于心臟重的冰冷勻漿介質,將玻璃勻漿管插入盛有冰水混合物的容器中勻漿; 將制備好的勻漿移入2ml離心管,用低溫低速離心機以2000r/min離心10分鐘,棄沉淀; 取上清液用低溫高速離心機以10000r/min,4條件下離心15分鐘,棄上清,沉淀物即為線粒體。將分離的線粒體用20

8、倍的冰冷勻漿介質制備成混懸液,在04儲存待測。    2.3  參參康心膠囊對垂體后葉素模型小鼠心肌細胞線粒體超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)含量的影響     取各組線粒體混懸液,采用硫代巴比妥酸法,按照南京建成生物工程研究所MDA測定試劑盒說明書的步驟進行測定。     2.4  統(tǒng)計學方法     將所測結果按試劑盒說明書計算,采用SPSS13.0軟件統(tǒng)計,用t檢驗。計量資料,以均數±標準差(±)表示。 

9、60;   3  結果     3.1  參參康心膠囊對垂體后葉素模型小鼠心肌細胞線粒體超氧化物歧化酶(SOD)活性的影響     結果見表1。從表中可見,垂體后葉素所致心肌缺血模型組SOD活力與空白對照組比較無明顯變化,而參參康心膠囊大劑量組與模型組比較,SOD活性明顯增強,p<0.01。參參康心膠囊的其它兩組與模型組比較SOD活力有一定的增強,但無統(tǒng)計學意義。表1  參參康心膠囊對Pit模型小鼠心肌細胞線粒體SOD活性的影響(略)注:與模型組比較*P0.01。  &

10、#160;  3.2  參參康心膠囊對垂體后葉素模型小鼠心肌細胞線粒體丙二醛(MDA)含量的影響     結果見表2。從表中可見,模型組與空白對照組相比(p<0.01),即說明用垂體后葉素腹腔注射復制心肌缺血模型成功;陽性對照組與模型組比較(p<0.01),與參參康心膠囊組比較無統(tǒng)計學意義;參參康心膠囊大、中、小三劑量組與模型組比較MDA含量明顯下降有顯著性差異,表明參參康心膠囊對心肌缺血有明顯防治作用,但參參康心膠囊三劑量組間無顯著性差異。 表2  參參康心膠囊對Pit模型小鼠線粒體MDA含量的影響(略)注:與空白對照組

11、相比#P0.01,與模型組比較*P0.01,與模型組比較*P0.05。     4  討論     心肌缺血、缺氧多見于冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(冠心?。?,主要由冠脈分支部分或完全阻塞引起,屬于祖國醫(yī)學“胸痹”、“心痛”范疇。中醫(yī)認為其病位在心,與脾(胃)、腎、肝(膽)等多臟腑相關,呈現本虛標實的病理特征。本虛責之于氣、血、陰、陽,標實主要涉及氣滯、血瘀、痰飲、寒凝、火熱等病理產物或因素。本虛又以心氣不足最為突出,標實則以心絡瘀阻為主。心主血脈,氣為血帥、血為氣母,心氣虛則無力推動血液運行,以致血行緩慢、終成瘀血。氣行則水行

12、,氣滯則津停,水液代謝發(fā)生障礙而成痰飲,痰飲阻滯心脈,又會加重瘀血的病理變化,所以心絡瘀阻的病機貫穿于整個病程的始終,冠心病的每個證型或多或少均有血瘀的表現。故氣虛血瘀是冠心病的主要發(fā)病機制。大量臨床資料也表明,益氣養(yǎng)心,活血通絡是防治冠心病的基本治法。     參參康心膠囊是基于中醫(yī)學對心肌缺血性疾病的上述認識,以名老中醫(yī)的臨床有效驗方為基礎,研制成的純中藥制劑,功能益氣養(yǎng)心活血通絡。該方臨床應用多年,對冠心病、心肌梗死等心肌缺血性疾病有顯著療效。其組方精煉便于藥物成分檢測和質量控制。     心肌缺血可致心肌功能紊亂,伴有嚴重的心

13、肌細胞損傷,其損傷機制一直是心血管領域的重要研究課題。線粒體是一種膜性細胞器,其重要的生物學功能是氧化代謝和鈣代謝。近年來隨著心肌缺血損傷機制的深入研究,發(fā)現自由基的產生及脂質過氧化物反應增強與心肌缺血損傷的病理改變關系密切。心肌缺血時,自由基的生產增多,而自由基清除酶的活性降低,導致體內大量自由基堆積,進而使生物膜產生脂質過氧化反應,導致細胞膜的結構和功能損傷,從而加劇缺血心肌的組織損失及功能障礙4、5。本研究結果表明:腹腔注射垂體后葉素后線粒體MDA含量明顯增高(p<0.01),參參康心膠囊大、中、小三劑量組線粒體MDA含量均明顯下降,并且有顯著性差異。從本實驗結果看,腹腔注射垂體后

14、葉素后模型組心肌細胞線粒體SOD活力略有增高,這可能是由于注射垂體后葉素后的機體發(fā)生的應激性反應而造成的,而參參康心膠囊組SOD活力雖有所增高,但無統(tǒng)計學意義。因此,參參康心膠囊通過清除MDA,可防止氧自由基對心肌線粒體的破壞,達到對心肌損傷的保護作用,其作用途徑可能不在于提高SOD活性,可能作用于其他途徑,有待進一步研究。 【參考文獻】  1 Wu,JX,Wang YX,Niu RX,Zhou YG,Liang N.Protective effects XMLon the rats with myocardial injury induced by isoprenalineJ.zh

15、ongguo Bingli Zazh(Chin J Pathophysiol),2002,18(1):9798.2 Peng SD,Conk PL,Zheng FD.Effect of magnesium fructose-1,6-diphosphate on myocardial lesoin induced by isoproterenoi in tatsJ.Zhonggeo year He Duli Zazhi(Chin,J Pharmcal Taxicold).2000,14(4):300304.3 趙明奇通心絡改善缺血心肌供血的NO機制研究J中國實驗方劑學雜志,2003,9(6):43454 Lafont A,Marw

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