血型的鑒定方法及操作

1、精選課件1紅細(xì)胞血型系統(tǒng)及其檢測紅細(xì)胞血型系統(tǒng)及其檢測重慶醫(yī)科大學(xué)臨床血液教研室重慶醫(yī)科大學(xué)臨床血液教研室精選課件2血型的發(fā)現(xiàn)血型的發(fā)現(xiàn)n1900年，年，ABO血型系統(tǒng)血型系統(tǒng)n1940年，年，Rh血型系統(tǒng)血型系統(tǒng) Karl Landsteiner精選課件3血型（血型（blood type)n狹義地講，存在于紅細(xì)胞上的特異性同種抗原。狹義地講，存在于紅細(xì)胞上的特異性同種抗原。n廣義地講，是人類遺傳多態(tài)性的一種表現(xiàn)，血廣義地講，是人類遺傳多態(tài)性的一種表現(xiàn)，血液中各種成分都有其各自型別。液中各種成分都有其各自型別。精選課件4紅細(xì)胞血型（系統(tǒng)，抗原）紅細(xì)胞血型（系統(tǒng)，抗原）n是存在于紅細(xì)胞上的化學(xué)結(jié)

2、構(gòu)，化學(xué)本質(zhì)是糖是存在于紅細(xì)胞上的化學(xué)結(jié)構(gòu)，化學(xué)本質(zhì)是糖和多肽，是紅細(xì)胞膜上的和多肽，是紅細(xì)胞膜上的跨膜蛋白跨膜蛋白。n存在于紅細(xì)胞膜上（完全抗原），也存在于上存在于紅細(xì)胞膜上（完全抗原），也存在于上皮細(xì)胞以及各種體液和分泌液中（半抗原）。皮細(xì)胞以及各種體液和分泌液中（半抗原）。RBC存在于體液、分泌液中存在于體液、分泌液中精選課件5紅細(xì)胞血型抗體紅細(xì)胞血型抗體n天然抗體、免疫抗體天然抗體、免疫抗體n規(guī)則抗體、不規(guī)則抗體規(guī)則抗體、不規(guī)則抗體n完全抗體，不完全抗體完全抗體，不完全抗體n同種抗體，自身抗體同種抗體，自身抗體精選課件6天然抗體和免疫抗體天然抗體和免疫抗體n天然抗體：天然抗體：ABO血

3、型系統(tǒng)中，血型系統(tǒng)中，A型個體血漿中型個體血漿中天然存在抗天然存在抗B，B型個體血漿中存在抗型個體血漿中存在抗A。多。多數(shù)天然抗體是數(shù)天然抗體是IgM型，最佳反應(yīng)溫度為型，最佳反應(yīng)溫度為室溫室溫或或更低。更低。n免疫抗體：一般通過輸血、妊娠、注射三種方免疫抗體：一般通過輸血、妊娠、注射三種方式接受抗原刺激，多數(shù)免疫抗體是式接受抗原刺激，多數(shù)免疫抗體是IgG型，最型，最佳反應(yīng)溫度是佳反應(yīng)溫度是37oC。精選課件7天然抗體和免疫抗體特性比較天然抗體和免疫抗體特性比較精選課件8精選課件9規(guī)則抗體和不規(guī)則抗體規(guī)則抗體和不規(guī)則抗體n規(guī)則抗體：規(guī)則抗體：ABO系統(tǒng)產(chǎn)生抗、抗是有規(guī)律的。系統(tǒng)產(chǎn)生抗、抗是有規(guī)

4、律的。Landsteiner規(guī)律：規(guī)律：型抗，型抗，型抗，抗型抗，型抗，型抗，抗n不規(guī)則抗體：除不規(guī)則抗體：除ABO 系統(tǒng)外，其他系統(tǒng)產(chǎn)生的抗體系統(tǒng)外，其他系統(tǒng)產(chǎn)生的抗體均不符合上述規(guī)律。均不符合上述規(guī)律。正常人血液中一般沒有不規(guī)則抗體正常人血液中一般沒有不規(guī)則抗體，又稱為意外抗體，又稱為意外抗體（unexpected antibody）。）。精選課件10完全抗體和不完全抗體完全抗體和不完全抗體n完全抗體：完全抗體：在鹽水介質(zhì)中能凝集紅細(xì)胞抗體，多為在鹽水介質(zhì)中能凝集紅細(xì)胞抗體，多為IgM抗體?？贵w。n不完全抗體不完全抗體：能使紅細(xì)胞致敏，但在鹽水質(zhì)中不能凝集紅細(xì)胞，：能使紅細(xì)胞致敏，但在鹽水

5、質(zhì)中不能凝集紅細(xì)胞，需要通過抗球蛋白法或其他非鹽水介質(zhì)法進(jìn)行檢測，多為需要通過抗球蛋白法或其他非鹽水介質(zhì)法進(jìn)行檢測，多為IgG抗體?？贵w?？箍笽gG精選課件11同種抗體、自身抗體同種抗體、自身抗體n同種抗體：針對患者缺乏的抗原所產(chǎn)生的抗體同種抗體：針對患者缺乏的抗原所產(chǎn)生的抗體即為同種抗體，如即為同種抗體，如Rh陰性者輸血后產(chǎn)生的抗陰性者輸血后產(chǎn)生的抗抗體?？贵w。n自身抗體：針對自身抗原產(chǎn)生的抗體，如引起自身抗體：針對自身抗原產(chǎn)生的抗體，如引起自身免疫型溶血性貧血。自身免疫型溶血性貧血。精選課件12紅細(xì)胞血型紅細(xì)胞血型n紅細(xì)胞血型分類：紅細(xì)胞血型分類： ISBT（The Internation

6、al Society of Blood Transfusion) 2002年，年，29個系統(tǒng)，個系統(tǒng)，200多個抗原多個抗原 目前，目前，30個系統(tǒng)，個系統(tǒng)，300多個抗原多個抗原精選課件13一、一、ABO血型系統(tǒng)血型系統(tǒng)1. ABO血型抗原和抗體特性血型抗原和抗體特性精選課件142.ABO血型的遺傳與生化血型的遺傳與生化（1）ABO基因型與表型基因型與表型 A型型AA，AO B型型BB，BO AB型型AB O型型O A，B是顯性基因，是顯性基因，O是隱性基因是隱性基因 ABO基因不是產(chǎn)生基因不是產(chǎn)生ABO抗原的遺傳密碼抗原的遺傳密碼精選課件15（2）ABO血型的生化合成血型的生化合成nH基因

7、基因 L-fucocyltransferase，19chr nA基因基因 N-acetyl-0-galactosaminyltransferase，9chr nB基因基因galactosyltransferase, 9chrnO基因基因無效基因，不產(chǎn)生轉(zhuǎn)移無效基因，不產(chǎn)生轉(zhuǎn)移酶，酶，O型紅細(xì)胞含有型紅細(xì)胞含有H物質(zhì)物質(zhì)基因基因酶酶合成抗原合成抗原精選課件16思考：思考：A、B、AB型紅細(xì)胞是否存在型紅細(xì)胞是否存在H物質(zhì)？物質(zhì)？精選課件17（3）ABH可溶性抗原形成可溶性抗原形成n分泌型血型物質(zhì)：分泌型血型物質(zhì)：ABH抗原存在于紅細(xì)胞、抗原存在于紅細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、血小板、淋巴細(xì)胞、上皮細(xì)胞等，內(nèi)

8、皮細(xì)胞、血小板、淋巴細(xì)胞、上皮細(xì)胞等，也可出現(xiàn)在除腦脊液外的分泌液中，也可出現(xiàn)在除腦脊液外的分泌液中，唾液中最唾液中最豐富。豐富。nSe，se基因基因與體液分泌有關(guān)，與體液分泌有關(guān)，Se編碼編碼 L-fucocyltransferase，形成分泌液中的，形成分泌液中的H抗抗原，原，H也可轉(zhuǎn)化為也可轉(zhuǎn)化為A或或B抗原，抗原，Se不影響紅細(xì)不影響紅細(xì)胞上胞上ABH形成形成，Se為分泌型；為分泌型；se為非分泌型；為非分泌型；19chr。精選課件18分泌型血型物質(zhì)的意義：分泌型血型物質(zhì)的意義：n在在RBC抗原弱表達(dá)個體中確定抗原弱表達(dá)個體中確定ABO血型。血型。n檢測唾液、羊水中的血型物質(zhì)，輔助鑒定

9、血型檢測唾液、羊水中的血型物質(zhì)，輔助鑒定血型和預(yù)測胎兒血型。和預(yù)測胎兒血型。n能中和天然抗體（能中和天然抗體（IgM），有助鑒別），有助鑒別Ab性質(zhì)。性質(zhì)。精選課件193.ABO亞型：亞型：n亞型：同一血型抗原的亞型：同一血型抗原的結(jié)構(gòu)、性能（質(zhì)）結(jié)構(gòu)、性能（質(zhì)）或或抗抗原位點數(shù)（量）原位點數(shù)（量）存在一定差異。存在一定差異。nA亞型：A1，A2，A3，Ax，Ay，AmnB亞型：B1，B2，B3，Bx，Bm精選課件20二、二、Rh血型系統(tǒng)血型系統(tǒng)n1940年，年，Landerstein和和Wiener用恒河猴用恒河猴（rhesus）RBC免疫家兔或豚鼠，得到一種免疫家兔或豚鼠，得到一種抗體，可

10、與抗體，可與85%白種人紅細(xì)胞發(fā)生反應(yīng)。白種人紅細(xì)胞發(fā)生反應(yīng)。nRh系統(tǒng)有系統(tǒng)有50個抗原，最復(fù)雜，重要性僅次于個抗原，最復(fù)雜，重要性僅次于ABO血型。血型。精選課件211.遺傳與發(fā)育規(guī)律遺傳與發(fā)育規(guī)律n胎兒早期充分發(fā)育，臍帶血胎兒早期充分發(fā)育，臍帶血/新生兒紅細(xì)胞同新生兒紅細(xì)胞同成人。成人。n基因位于基因位于1chr，分別命名為，分別命名為RHD，RHCE，RHD編碼編碼D抗原，抗原，RHCE編碼不同組合的編碼不同組合的CE抗抗原，原，ce，cE，Ce，CE。精選課件22精選課件232.命名和種類命名和種類n三種命名方式三種命名方式 Fisher-Race、數(shù)字命名法、現(xiàn)代命名法、數(shù)字命名法

11、、現(xiàn)代命名法精選課件24Fisher-Race命名法（命名法（CDE命名法）命名法）精選課件253.Rh血型種類血型種類nD、E、C、e、cn抗原的強(qiáng)弱次序抗原的強(qiáng)弱次序 DECce精選課件265.Rh抗體抗體nRh抗體產(chǎn)生抗體產(chǎn)生 天然抗體罕見天然抗體罕見 主要通過輸血和妊娠免疫產(chǎn)生主要通過輸血和妊娠免疫產(chǎn)生IgG 初次免疫后初次免疫后36月出現(xiàn)，再次免疫后月出現(xiàn)，再次免疫后3周達(dá)高周達(dá)高峰峰nRh抗體種類抗體種類 抗抗D，抗，抗E，抗，抗C，抗，抗c，抗，抗e精選課件27ABO和和Rh血型系統(tǒng)的臨床意義血型系統(tǒng)的臨床意義n安全輸血的主要保證安全輸血的主要保證n新生兒溶血病的診斷新生兒溶血病

12、的診斷n器官移植的必要條件器官移植的必要條件n其他：遺傳學(xué)研究，法醫(yī)學(xué)鑒定其他：遺傳學(xué)研究，法醫(yī)學(xué)鑒定精選課件28四、四、ABO和和Rh血型鑒定血型鑒定n常用方法：常用方法： 鹽水介質(zhì)法、酶介質(zhì)法、抗人球蛋白法、聚凝鹽水介質(zhì)法、酶介質(zhì)法、抗人球蛋白法、聚凝胺法胺法 試管法、玻片法、微柱凝膠法試管法、玻片法、微柱凝膠法精選課件291.鹽水介質(zhì)法（鹽水介質(zhì)法（salt medium test）n原理：根據(jù)原理：根據(jù)IgM類抗體與紅細(xì)胞膜上特異性抗類抗體與紅細(xì)胞膜上特異性抗原能發(fā)生凝集反應(yīng)。原能發(fā)生凝集反應(yīng)。 正定型：已知血型抗體試劑正定型：已知血型抗體試劑 + 紅細(xì)胞紅細(xì)胞 反定型：已知標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞

13、反定型：已知標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞 + 血清血清鑒定紅細(xì)胞上血型抗原鑒定紅細(xì)胞上血型抗原鑒定血清中抗體鑒定血清中抗體精選課件30n反應(yīng)條件：生理鹽水介質(zhì)，室溫，肉眼可見凝反應(yīng)條件：生理鹽水介質(zhì)，室溫，肉眼可見凝集反應(yīng)集反應(yīng)n平板法，試管法，微孔板法，平板法，試管法，微孔板法，試管離心法最可試管離心法最可信賴。信賴。n應(yīng)用：應(yīng)用：ABO血型定型、血型定型、RhD抗原定型抗原定型（IgG+IgM，IgM單克隆抗體單克隆抗體），交叉合血），交叉合血精選課件31結(jié)果判斷結(jié)果判斷精選課件32注意事項（一）：注意事項（一）：n標(biāo)準(zhǔn)血清：標(biāo)準(zhǔn)血清：健康壯年人混合血清，培養(yǎng)細(xì)胞株健康壯年人混合血清，培養(yǎng)細(xì)胞株的單克隆抗體

14、的單克隆抗體n要求：要求： 高效價：抗高效價：抗A、抗、抗B1：128 高親和性：高親和性：15s內(nèi)出現(xiàn)凝集，內(nèi)出現(xiàn)凝集，3min后凝集塊后凝集塊 1mm1mm2 2 單克隆抗體具有檢出單克隆抗體具有檢出A2A2，A2BA2B的能力的能力 冷凝集素效價冷凝集素效價 1 1：4 4 無菌，病毒滅活無菌，病毒滅活精選課件33注意事項（二）：注意事項（二）：n紅細(xì)胞試劑紅細(xì)胞試劑：三個健康者同型新鮮紅細(xì)胞混合，：三個健康者同型新鮮紅細(xì)胞混合，用生理鹽水洗滌三次。用生理鹽水洗滌三次。n紅細(xì)胞懸液不能過濃或過淡，紅細(xì)胞懸液不能過濃或過淡，5%生理鹽水紅生理鹽水紅細(xì)胞懸液細(xì)胞懸液精選課件34注意事項（三）

15、：注意事項（三）：n所有器材清潔干燥所有器材清潔干燥n一般先加血清，后加紅細(xì)胞一般先加血清，后加紅細(xì)胞n反應(yīng)溫度：反應(yīng)溫度：IgM抗體反應(yīng)最適溫度為抗體反應(yīng)最適溫度為40C，為防，為防止冷凝集素干擾，采用室溫，止冷凝集素干擾，采用室溫，370C反應(yīng)減弱反應(yīng)減弱n離心時間和速度：離心時間和速度：3000g,30sn反定型不宜用玻片法反定型不宜用玻片法n結(jié)果核對，避免筆誤結(jié)果核對，避免筆誤n正、反定型結(jié)果一致才能報告，否則查找原因正、反定型結(jié)果一致才能報告，否則查找原因精選課件35正反定型不一致的可能原因（一）：正反定型不一致的可能原因（一）：n操作技術(shù)上的錯誤：主要原因操作技術(shù)上的錯誤：主要原因

16、 離心過度或不足離心過度或不足 細(xì)胞與血清反應(yīng)比例不適當(dāng)細(xì)胞與血清反應(yīng)比例不適當(dāng) 陽性反應(yīng)產(chǎn)生溶血現(xiàn)象而未能識別陽性反應(yīng)產(chǎn)生溶血現(xiàn)象而未能識別 漏加試劑、結(jié)果判讀錯誤等漏加試劑、結(jié)果判讀錯誤等 精選課件36正反定型不一致的可能原因（二）正反定型不一致的可能原因（二）：n出現(xiàn)假陰性的常見原因：出現(xiàn)假陰性的常見原因： 某些白血病患者和難治性貧血等導(dǎo)致某些白血病患者和難治性貧血等導(dǎo)致ABO抗抗原減弱；原減弱； 免疫系統(tǒng)尚未健全的新生兒、免疫系統(tǒng)尚未健全的新生兒、4月月6月內(nèi)嬰兒、月內(nèi)嬰兒、抗體水平下降的老人；抗體水平下降的老人； 亞型紅細(xì)胞抗原性弱，難以檢出；亞型紅細(xì)胞抗原性弱，難以檢出； 低丙種球

17、蛋白血癥患者，血清定型時不凝集或低丙種球蛋白血癥患者，血清定型時不凝集或弱凝集。弱凝集。 精選課件37正反定型不一致的可能原因（三）正反定型不一致的可能原因（三）n出現(xiàn)假陽性的常見原因：出現(xiàn)假陽性的常見原因： 紅細(xì)胞出現(xiàn)多凝集現(xiàn)象；紅細(xì)胞出現(xiàn)多凝集現(xiàn)象； 嚴(yán)重腸道革蘭氏陰性桿菌感染，可使紅細(xì)胞獲得類嚴(yán)重腸道革蘭氏陰性桿菌感染，可使紅細(xì)胞獲得類B現(xiàn)象；現(xiàn)象； 異常的血漿蛋白升高、白蛋白異常的血漿蛋白升高、白蛋白/球蛋白異常，高濃度纖球蛋白異常，高濃度纖維蛋白原造成假凝集現(xiàn)象；維蛋白原造成假凝集現(xiàn)象； 待檢血清中有不規(guī)則抗體存在；待檢血清中有不規(guī)則抗體存在； 右旋糖酐、靜脈注射某些造影劑等引起紅細(xì)

18、胞右旋糖酐、靜脈注射某些造影劑等引起紅細(xì)胞 類似凝類似凝集。集。 精選課件38方法學(xué)評價方法學(xué)評價n簡單，靈敏度低，只適合簡單，靈敏度低，只適合IgM抗體抗體n試管法：需時短，離心增強(qiáng)凝集，可發(fā)現(xiàn)亞型試管法：需時短，離心增強(qiáng)凝集，可發(fā)現(xiàn)亞型和較弱的反應(yīng)，正、反定型皆適合和較弱的反應(yīng)，正、反定型皆適合n玻片法：適合大規(guī)模血型普查，反應(yīng)時間長，玻片法：適合大規(guī)模血型普查，反應(yīng)時間長，有時漏掉弱反應(yīng)，反定型不適合。有時漏掉弱反應(yīng)，反定型不適合。精選課件392.酶介質(zhì)法（酶介質(zhì)法（enzymic medium test）：）：n原理和方法：主要用于原理和方法：主要用于Rh血型鑒定（血型鑒定（IgG抗體

19、）抗體）蛋白水解酶蛋白水解酶增強(qiáng)增強(qiáng)IgG抗體抗體的凝集作用的凝集作用精選課件40注意事項：注意事項：nRh血型不需作反定型血型不需作反定型n每次實驗均需作陽性、陰性對照每次實驗均需作陽性、陰性對照精選課件41方法學(xué)評價方法學(xué)評價n簡單經(jīng)濟(jì)簡單經(jīng)濟(jì)n穩(wěn)定性、準(zhǔn)確性較差，不能檢出穩(wěn)定性、準(zhǔn)確性較差，不能檢出MN、Duffy血血型系統(tǒng)型系統(tǒng)精選課件423.抗人球蛋白實驗（抗人球蛋白實驗（Coombs test）n原理和方法原理和方法抗抗IgG待測紅細(xì)胞待測紅細(xì)胞 + 抗抗RhD（IgG）+ 抗人球蛋白抗人球蛋白紅細(xì)胞凝集紅細(xì)胞凝集精選課件43應(yīng)用延伸：應(yīng)用延伸：n檢測紅細(xì)胞同種抗體的經(jīng)典方法，新生

20、兒溶血、病、溶血性輸血反應(yīng)、自身免疫性溶血性貧血n直接Coombs（direct antiglobulin test, DAT）n間接Coombs（indirect antiglobulin test, IDAT）精選課件44DAT：檢查紅細(xì)胞是否致敏：檢查紅細(xì)胞是否致敏精選課件45IDAT：檢測血清中不完全抗體：檢測血清中不完全抗體精選課件464.聚凝胺介質(zhì)法（聚凝胺介質(zhì)法（polybrene test）n原理和方法原理和方法 低離子強(qiáng)度鹽溶液低離子強(qiáng)度鹽溶液（low ionic strength salt solution, LISS)：降低介質(zhì)離子強(qiáng)度，增加抗原抗體結(jié)合：降低介質(zhì)離子強(qiáng)度

21、，增加抗原抗體結(jié)合 聚凝胺：聚凝胺：中和紅細(xì)胞表面負(fù)電荷，使紅細(xì)胞發(fā)生非特異性中和紅細(xì)胞表面負(fù)電荷，使紅細(xì)胞發(fā)生非特異性凝集。凝集。 重懸液重懸液（resuspension)精選課件47方法學(xué)評價方法學(xué)評價n適于各類抗體（適于各類抗體（IgM，IgG）n快速、靈敏、可靠快速、靈敏、可靠n對檢測對檢測Kell血型系統(tǒng)抗體不理想，不能用肝素血型系統(tǒng)抗體不理想，不能用肝素抗凝。抗凝。精選課件485.微柱凝膠法微柱凝膠法(gel cards with microtubes)n1986年法國人Dr. Yves Lappierre發(fā)明n1994年，獲美國FDA認(rèn)證精選課件49原理和方法原理和方法n葡聚糖做成微型凝膠柱，葡聚糖做成微型凝膠柱，上端為反應(yīng)室，下端凝上端為反應(yīng)室，下端凝膠柱為抗原抗體凝集反膠柱為抗原抗體凝集反應(yīng)的介質(zhì)。應(yīng)的介質(zhì)。n抗原與抗體結(jié)合后離心，抗原與抗體結(jié)合后離心，經(jīng)過凝膠分子篩作用，經(jīng)過凝膠分子篩作用，游離紅細(xì)胞在凝膠底部，游離紅細(xì)胞在凝膠底部，而與抗體結(jié)合凝集的紅而與抗體結(jié)合凝集的紅細(xì)胞位于凝膠上部或懸細(xì)胞位于凝膠上部或懸浮于凝膠中。浮于凝膠中。 反應(yīng)室反應(yīng)室凝膠柱凝膠柱精選課件50結(jié)果判讀：結(jié)果判讀：n陽性結(jié)果：紅細(xì)胞凝集塊位于凝膠表面或凝膠中，和陽性結(jié)果：紅細(xì)胞凝集塊位于凝膠表面或凝膠中，和（或）出現(xiàn)溶血。（或）出現(xiàn)溶血。精選課件51注意事