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1、實驗三實驗三 溫度對動物能量代謝的影響溫度對動物能量代謝的影響生物呼吸耗氧生物呼吸耗氧生物能量代謝率生物能量代謝率間接評價間接評價密閉靜水法密閉靜水法水生動物呼吸率水生動物呼吸率測測 定定Winker法法測測 定定水中溶解氧水中溶解氧實驗動物:實驗動物:金魚金魚儀器與設(shè)備儀器與設(shè)備: 光照恒溫箱,電子天平,數(shù)字溫度計光照恒溫箱,電子天平,數(shù)字溫度計 廣口瓶(廣口瓶(6 6個,作為呼吸瓶個,作為呼吸瓶) 碘量瓶(碘量瓶(1212個)個) 三角瓶(三角瓶(1212個)個) 量筒量筒, ,移液槍,槍架,槍盒移液槍,槍架,槍盒, ,托盤,大燒杯,托盤,大燒杯, 橡皮管橡皮管, ,鐵架臺,酸式滴定管等鐵
2、架臺,酸式滴定管等試劑:試劑: 濃硫酸,硫酸錳溶液,堿性碘化鉀溶液,硫代硫酸鈉濃硫酸,硫酸錳溶液,堿性碘化鉀溶液,硫代硫酸鈉(0.01 0.01 mol /Lmol /L),),淀粉指示劑(淀粉指示劑(1 1) 設(shè)置三個溫度梯度:設(shè)置三個溫度梯度:1010, 20 ,3 30 0 ;記錄氣溫、氣壓;記錄氣溫、氣壓;用燒杯裝水調(diào)水溫用燒杯裝水調(diào)水溫,裝入廣口瓶(呼吸瓶)中,水要裝裝入廣口瓶(呼吸瓶)中,水要裝滿,到溢出為止;滿,到溢出為止;兩個廣口瓶為一組,其中一個放入金魚,另一個做空白兩個廣口瓶為一組,其中一個放入金魚,另一個做空白對照,蓋緊瓶塞(讓水自然溢出,避免產(chǎn)生氣泡),做對照,蓋緊瓶塞
3、(讓水自然溢出,避免產(chǎn)生氣泡),做好標簽;好標簽;將實驗瓶與對照瓶放入相應(yīng)實驗溫度的培養(yǎng)箱,記錄放將實驗瓶與對照瓶放入相應(yīng)實驗溫度的培養(yǎng)箱,記錄放置時間(置時間(3030minmin左右,具體時間自己記錄)。左右,具體時間自己記錄)。6. 6. 分別用分別用虹吸法虹吸法快速取水樣到碘量瓶中(每個取快速取水樣到碘量瓶中(每個取2 2份,碘量瓶中水一定要裝滿,使水自然溢出);份,碘量瓶中水一定要裝滿,使水自然溢出); 7. 7. 立即用立即用WinkerWinker法法固定水樣,測定水樣中溶解氧水平固定水樣,測定水樣中溶解氧水平8. 8. 用量筒測出呼吸瓶中水的體積用量筒測出呼吸瓶中水的體積Vb;
4、9. 9. 對金魚進行稱重;對金魚進行稱重;10. 10. 根據(jù)公式計算金魚在不同溫度下的耗氧量。根據(jù)公式計算金魚在不同溫度下的耗氧量。水樣的固定:水樣的固定:用移液槍向水樣中加入用移液槍向水樣中加入1 mL硫酸錳和硫酸錳和2 mL堿性碘鹽;堿性碘鹽;蓋緊瓶塞,將碘量瓶顛倒混合,產(chǎn)生沉淀,靜置;蓋緊瓶塞,將碘量瓶顛倒混合,產(chǎn)生沉淀,靜置;1. 用移液槍沿瓶口加入用移液槍沿瓶口加入1 mL濃硫酸,立即蓋緊瓶塞,濃硫酸,立即蓋緊瓶塞,搖動。待沉淀溶解后靜置搖動。待沉淀溶解后靜置5 min,使使I2全部析出來全部析出來 。滴滴 定:定:用量筒取用量筒取50 mL固定過的水樣于三角瓶中,用硫代硫固定過
5、的水樣于三角瓶中,用硫代硫酸鈉溶液滴定至淺黃色;酸鈉溶液滴定至淺黃色;1. 加人加人5-10滴淀粉溶液,繼續(xù)滴定至藍色剛好消失;滴淀粉溶液,繼續(xù)滴定至藍色剛好消失;記記錄用量錄用量 設(shè)置溫度梯度設(shè)置溫度梯度10, 20 ,30 記錄氣溫、氣壓記錄氣溫、氣壓調(diào)節(jié)水溫調(diào)節(jié)水溫放入金魚放入金魚放入培養(yǎng)箱放入培養(yǎng)箱30min左右左右取水入碘量瓶取水入碘量瓶Winker法固定法固定滴定滴定測呼吸瓶中測呼吸瓶中水的體積水的體積測魚體重測魚體重計算計算實驗流程實驗流程(實驗前接水放入溫箱保溫)(實驗前接水放入溫箱保溫)空白對照空白對照水樣中溶解氧與MnSO4和OH-,生成高價錳棕色沉淀。加酸溶解后,在I-存
6、在下,釋放出I2,然后用Na2S2O3 標準溶液滴定,換算溶解氧的含量。2MnSO4+4NaOH=2Mn(OH)2+2Na2SO42Mn(OH)2+O2=2H2MnO3H2MnO3十十Mn(OH)2MnMnO3 (棕色沉淀棕色沉淀) +2H2O2KI+H2SO4=2HI+K2SO4MnMnO3+2H2SO4+2HI=2MnSO4+I2+3H2OI2+2Na2S2O3=2NaI+Na2S4O6O22Mn(OH)222MnMnO32I24Na2S2O3 1mol的的O2和和4mol的的Na2S2O3相當相當 溶解氧溶解氧: :DO (mgL) CNa2S2O3VNa2S2O332/41000/V水
7、水動物單位體重呼吸耗氧率:動物單位體重呼吸耗氧率:R=(DOR=(DO0 0-DO)-DO)* *V Vb b/ /tWtW DODO0 0: :對照瓶中溶解氧含量對照瓶中溶解氧含量 DO:DO:呼吸瓶中溶解氧含量呼吸瓶中溶解氧含量 V Vb b: :呼吸瓶中水的體積呼吸瓶中水的體積 t:t:實驗時間實驗時間, ,h h W: W:動物體重動物體重, ,kgkg V V水水:50mL:50mL水樣水樣 實驗報告實驗報告分析:分析:水中溶解氧的含量與大氣壓力、空氣中水中溶解氧的含量與大氣壓力、空氣中氧的分壓及水的溫度有密切的關(guān)系。氧的分壓及水的溫度有密切的關(guān)系。同一溫度下,體重同一溫度下,體重 呼吸耗氧量呼吸耗氧量同一溫度下,體重同一溫度下,體重 單位體重呼吸率單位體重呼吸率 不同溫度不同溫度 單位體重呼吸率單位體重呼吸率 注意注意 :所有操作都要在托盤中進行,防止強酸所
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