燈盞細辛注射液對兔動脈粥樣硬化病變進展的抑制作用

1、燈盞細辛注射液對兔動脈粥樣硬化病變進展的抑制作用                             作者：衛(wèi)景沛，李劍，史哲，王擁軍【摘要】  目的觀察燈盞細辛對兔動脈粥樣硬化病變進展的抑制作用。方法將35只雄性新西蘭白兔隨機分為正常對照組(n=9)及高脂飲食組(n=26)。高脂飼料組以1%膽

2、固醇飼料，喂養(yǎng)6周，6周后隨機抽取2只，觀察主動脈組織病理形態(tài)，以明確動脈粥樣斑塊形成。6周時高脂組依據(jù)兔子體質(zhì)量隨機分為高脂組(高脂飲食)(n=12)、燈盞細辛組(5 ml/kg/d 腹腔注射)(n=12)，藥物與高脂飲食同步干預。實驗前、6周、14周取血清，測定血脂濃度(TC，TG，LDL，HDL)。14周時取胸主動脈行蘇木精伊紅染色(HE),測定內(nèi)膜、中膜厚度;測粥樣斑塊面積;免疫組化測定IL-6的陽性細胞百分比，染色結(jié)果行定量分析。結(jié)果高脂飲食各組血脂顯著增高，主動脈見典型脂質(zhì)條紋，局部斑塊形成，病變處IL-6顯著表達。與單純高脂組相比，中藥燈盞細辛組主動脈內(nèi)膜增厚顯著減輕，粥樣斑塊面

3、積縮小(P<0. 05);燈盞細辛治療組能減低斑塊中IL-6百分數(shù)，兩者之間差異有顯著性;燈盞細辛不能降低血清中膽固醇水平。結(jié)論中藥燈盞細辛有抑制內(nèi)膜增生和動脈粥樣硬化病變進展的作用，中藥燈盞細辛不能降低血清中膽固醇水平。 【關(guān)鍵詞】  動脈粥樣硬化; 炎癥; 白細胞介素-6; 燈盞細辛腦血管疾病(cerebrovascular discases,CVD)具有發(fā)病率、死亡率、致殘率和復發(fā)率高的特點，是導致全球人口死亡的三大疾病之一。我國每年新發(fā)腦卒中患者約200萬人，每年死于腦卒中的患者約150萬;存活的患者人數(shù)600萬700萬1。在所有腦血管疾病中，缺血性腦血管疾病(isch

4、emiccerebrovascular diseases，ICVD)占了大約85%2。動脈粥樣硬化被認為是缺血性腦血管病獨立重要的危險因素，因此積極干預動脈粥樣硬化形成是預防缺血性卒中發(fā)生的重要措施。本實驗研究燈盞細辛注射液對兔動脈粥樣硬化病變進展的抑制作用。1 材料與方法1.1 藥品和試劑總膽固醇(CHO)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C) 、低密度脂蛋白(LDL-C)(中生北控生物科技股份有限公司); IL-6單克隆鼠抗人抗體(Sant Cruz公司)、PV-9000二步法免疫組化檢測試劑盒(北京中杉試劑公司)。1.2 動物分組和模型建立健康新西蘭純種雄性大白兔35只(質(zhì)量在2

5、.03.0 kg)，單獨喂養(yǎng)并檢疫3 d備用，隨機分為兩組：正常對照組為A組：9只白兔，予正常飼料、普通飲水飼養(yǎng)14周。余26只給予1%膽固醇飼料，普通飲水飼養(yǎng)6周，隨機處死2只兔，近主動脈弓處取約2 cm的血管,肉眼觀察和病理形態(tài)學檢查，了解主動脈處斑塊形成情況。然后依據(jù)24只白兔體重隨機分組，依次為B、C組。B組為單純高脂組12只，每日上午給予高脂飲食，普通飲水。C組為燈盞細辛組12只白兔，上午給予高脂飲食喂養(yǎng)，同期給予燈盞細辛5 ml/(kg·d)(腹腔注射)。1.3 血脂檢測實驗前、6周、14周(實驗結(jié)束時)耳緣靜脈取血，測量兔子血脂情況。1.4 病理形態(tài)學觀察飼養(yǎng)14周處死

6、動物后細分離主動脈，觀察動脈大體形態(tài)，包括內(nèi)膜是否光滑、有無增厚及斑塊形成等。激光攝影，利用圖像分析技術(shù)和分析軟件，斑塊面積及整個內(nèi)膜面積。取主動脈弓起始部約3. 0 cm動脈段，選取較長的一段置液氮中保存，用于進行免疫組化染色。較短的一段(約1. 0 cm)置入4%多聚甲醛中固定48 h，常規(guī)酒精脫水，石蠟包埋制成蠟塊。動脈的蘇木精伊紅(HE)染色，從每張HE染色片上隨機選取5個病變視野，圖像分析儀測定內(nèi)膜和中膜厚度，并計算內(nèi)膜/中膜厚度比，取其平均值。1.5 免疫組化胸主動脈的常規(guī)二步法IL-6免疫組化染色。1.6 結(jié)果觀察陽性為棕黃色或棕褐色，并呈顆粒壯。每只家兔觀察3張石蠟切片，每張切

7、片隨機選取5個視野，所有切片采用IM50顯微攝像系統(tǒng)、NiKON數(shù)碼相機、Simple PCI細胞圖象分析系統(tǒng)、醫(yī)學圖象分析軟件進行圖象分析，計算陽性染色百分比，取其均值。1.7 統(tǒng)計處理所有指標數(shù)據(jù)都以±s表示，數(shù)據(jù)處理采用統(tǒng)計軟件SPSS 11. 5分析。各處理組間比較用one-way ANOVA方差分析，以P<0. 05為統(tǒng)計學上差異有顯著性意義，P<0. 01表示有非常顯著性差異。1         2 結(jié)果2.1 血脂檢測結(jié)果實驗結(jié)束時動物死亡及其他原因剔除后，每組留動物9只。各組之

8、間體質(zhì)量在實驗開始時、6周及14周時無顯著性差異(P>0.05)。實驗開始時，各組之間血脂水平無差異。6周時，B、C組血脂水平明顯高于A組，而B、C之間無差異。14周時TC、TC、HDL-C、LDL-C水平，B、C組血脂水平各組存在差異，但無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表1。2.2 病理形態(tài)學觀察14周時，正常對照組病理切片鏡下見主動脈內(nèi)膜較薄，結(jié)構(gòu)完整，內(nèi)皮下無脂質(zhì)沉積，未見脂質(zhì)斑點或粥樣斑塊形成(見表2及圖1)。高脂組(B組)可見明顯的脂質(zhì)條紋病變，部分出現(xiàn)纖維脂肪性病變和局部粥樣硬化病灶，大量泡沫細胞聚集于血管內(nèi)膜，導致血管內(nèi)膜顯著性增厚或向管腔內(nèi)隆起，許多血管內(nèi)膜斷裂，局

9、部血栓形成，部分可見泡沫細胞崩解(圖2)。燈盞細辛組(C組)亦可見血管內(nèi)膜大量泡沫細胞聚集，內(nèi)膜增厚，部分血管內(nèi)膜斷裂。但較高脂飲食組減輕(圖3)。統(tǒng)計學顯示主動脈厚度、斑塊面積、IL-6表達陽性率各組之間P=0.000。B與C，用Bonferroni檢驗P=0.01。表明組組之間差異有統(tǒng)計學意義。正常飲食組IL-6表達極少(圖4);高脂飲食組IL-6表達均顯著增加(P<0.01與正常組相比)(圖5)，與高脂組相比，燈盞細辛組IL-6表達均顯著減低(圖6)。表1 各組之間0、6、14周時體重及血脂水平表2 14周時各組動物動脈內(nèi)膜厚度內(nèi)/中膜厚度比、斑塊面積IL-6陽性比3 討論動脈粥樣

10、硬化(AS)是大多數(shù)心肌梗塞和腦血管病變的病理基礎(chǔ)，是威脅人類健康和生存的最重要疾病之一。其發(fā)病機制有多種學說:脂肪浸潤學說、血小板聚集和血栓形成學說、氧化學說、巨噬細胞受體缺失學說、損傷反應學說等。高膽固醇血癥、高血壓病、糖尿病、吸煙等動脈硬化危險因子都能損傷血管內(nèi)皮,血管內(nèi)皮細胞受損后LDL滲入并積聚于內(nèi)皮下，被血管壁細胞的脂氧合酶及反應性氧基團氧化為OX-LDL， OX-LDL中的某些脂類作為信號分子,與細胞的受體結(jié)合后激活基因表達,促使內(nèi)皮細胞表達許多黏附分子,進而血流中的單核細胞、T淋巴細胞黏附于受損內(nèi)皮表面,單核細胞趨化蛋白-1 (MCP-1)使單核細胞遷移入內(nèi)皮下,攝取OX-LD

11、L 轉(zhuǎn)化為激活的巨噬細胞,最終成為充滿脂質(zhì)的泡沫細胞3。動脈粥樣硬化的發(fā)生和是一個復雜的過程，動脈粥樣硬化是一種涉及循環(huán)血小板、白細胞與血管壁上各種細胞相互作用的炎癥性疾病，激活的血小板及血小板與白細胞聚集能促進動脈粥樣硬化病變的形成和發(fā)展4。燈盞細辛又名燈盞花、東菊,盛產(chǎn)于云南，是菊科植物短葶飛蓬 Erigeron breviscap us (V ant) HandM azz. 的干燥全草，藥典1977年版曾予以收載,其性寒、微苦、甘辛，具有散寒解表、祛風除濕、活血化淤、通經(jīng)活絡(luò)、止痛功效。燈盞細辛注射液為純中藥制劑，有活血化瘀之功效，具有擴張血管、抑制血栓形成、清除自由基、抑制鈣超載和抑制

12、細胞外興奮性氨基酸的堆積而減輕腦缺血損傷，對腦缺血損傷有確切的療效5。研究證明燈盞細辛具有抑制血小板CD62p的表達、降低前炎性因子TNF-、IL-6表達的作用，從而可能具有降低了sICAM-1 的表達的作用6。本研究結(jié)果顯示，中藥燈盞細辛藥物不僅具活血化瘀，改善血小板功能，而且具有明顯抗炎作用;從而阻斷動脈粥樣硬化的啟動，抑制動脈粥樣硬化發(fā)展?！尽?#160; 1 吳 江，賈建平，崔麗英.神經(jīng)病學，第1版M.北京：人民衛(wèi)生出版社，2006.2 張 茁，張微微.缺血性卒中二級預防循證醫(yī)學證據(jù)M.北京：人民衛(wèi)生出版社，2007：1.3 Anne Hackman, YasunoriAbe. Levels of soluble adhesion in patientswith dyslip idemiaJ. Circulation，1996，93:1334.4 Huo Y，Sehober A，F(xiàn)orlow SB，et a1.Circulating activatedplatelets exacerbate atheroselemsis in mice def