凝膠凈化濃縮儀--培訓(xùn)

1、郭泰郭泰上海磐和電子科技有限公司上海磐和電子科技有限公司Tel:ax:PC.SPE原理介紹原理介紹Freestyle儀器硬件介紹儀器硬件介紹操作規(guī)程，日常維護(hù)及常見故障判操作規(guī)程，日常維護(hù)及常見故障判斷處理斷處理工作站操作培訓(xùn)工作站操作培訓(xùn)經(jīng)過經(jīng)過GPC凈化凈化未經(jīng)過未經(jīng)過 GPC凈化凈化目前在對(duì)各類中藥類樣品、環(huán)境樣品和食品樣品中的農(nóng)藥目前在對(duì)各類中藥類樣品、環(huán)境樣品和食品樣品中的農(nóng)藥殘留物分析時(shí)，一般樣品的萃取物中含有大量的高分子物殘留物分析時(shí)，一般樣品的萃取物中含有大量的高分子物質(zhì)質(zhì),比如色素、油脂、糖等，這些高分子聚集在比如色素、油

2、脂、糖等，這些高分子聚集在GC的進(jìn)樣的進(jìn)樣口和分析柱上，造成色譜分離效率降低。因此，這類樣品口和分析柱上，造成色譜分離效率降低。因此，這類樣品必須進(jìn)行有效的凈化。必須進(jìn)行有效的凈化。凝膠滲透色譜（凝膠滲透色譜（GPC）作為樣品凈化的手段之一，已被證）作為樣品凈化的手段之一，已被證明是一種使用最為方便的樣品凈化技術(shù)。這種凈化技術(shù)在明是一種使用最為方便的樣品凈化技術(shù)。這種凈化技術(shù)在國(guó)外已經(jīng)得到較為廣泛的應(yīng)用國(guó)外已經(jīng)得到較為廣泛的應(yīng)用,它已成為美國(guó)環(huán)保局它已成為美國(guó)環(huán)保局（EPA）,食品藥物管理（食品藥物管理（FDA）,美國(guó)分析化學(xué)協(xié)會(huì)美國(guó)分析化學(xué)協(xié)會(huì)（AOAC）及歐州）及歐州(EN)法定方法法定方

3、法 。流向流向高分子量廢棄物高分子量廢棄物收集被分析物收集被分析物 Bio-Beads先流出物先流出物主要流出物主要流出物tt SPE是一種吸附劑萃取，樣品通過填充吸附劑的一次性萃取柱，分析是一種吸附劑萃取，樣品通過填充吸附劑的一次性萃取柱，分析物和雜質(zhì)被保留在柱上，然后分別用選擇性溶劑去除雜質(zhì)，洗脫出分析物和雜質(zhì)被保留在柱上，然后分別用選擇性溶劑去除雜質(zhì)，洗脫出分析物，從而達(dá)到分離的目的。物，從而達(dá)到分離的目的。 SPE的分離模式主要取決于填充劑的類型和溶劑的性質(zhì)的分離模式主要取決于填充劑的類型和溶劑的性質(zhì). SPE也是一個(gè)柱色譜分離過程，分離機(jī)理、固定相和溶劑的選擇等方也是一個(gè)柱色譜分離過

4、程，分離機(jī)理、固定相和溶劑的選擇等方面與高效液相色譜（面與高效液相色譜（HPLC）有許多相似之處。）有許多相似之處。 但是但是SPE柱的填料粒徑（柱的填料粒徑（40m）要比）要比HPLC填料（填料（310m）大。）大。由于短的柱床和大的粒徑，由于短的柱床和大的粒徑，SPE柱效比柱效比HPLC色譜柱低得多。因此，用色譜柱低得多。因此，用SPE只能分開保留性質(zhì)有很大差別的化合物。只能分開保留性質(zhì)有很大差別的化合物。 與與HPLC的另一個(gè)差別是的另一個(gè)差別是SPE柱是一次性使用柱是一次性使用簡(jiǎn)單、快速和簡(jiǎn)化了樣品預(yù)處理操作步驟簡(jiǎn)單、快速和簡(jiǎn)化了樣品預(yù)處理操作步驟 ,縮縮短了預(yù)處理時(shí)間。短了預(yù)處理時(shí)間

5、。處理過的樣品易于貯藏、運(yùn)輸處理過的樣品易于貯藏、運(yùn)輸 ,便于實(shí)驗(yàn)室間便于實(shí)驗(yàn)室間進(jìn)行質(zhì)控。進(jìn)行質(zhì)控。可選擇不同類型的吸附劑和有機(jī)溶劑用以處理可選擇不同類型的吸附劑和有機(jī)溶劑用以處理各種不同類的有機(jī)污染物。各種不同類的有機(jī)污染物。不出現(xiàn)乳化現(xiàn)象不出現(xiàn)乳化現(xiàn)象 ,提高了分離效率。提高了分離效率。僅用少量的有機(jī)溶劑僅用少量的有機(jī)溶劑 ,降低了成本。降低了成本。易于與其他儀器聯(lián)用易于與其他儀器聯(lián)用 ,實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化在線分析實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化在線分析。常見固相萃取小柱的構(gòu)造常見固相萃取小柱的構(gòu)造真空濃縮腔真空濃縮腔高效冷凝柱高效冷凝柱SPE模塊模塊進(jìn)樣泵進(jìn)樣泵GPC泵泵GPC柱柱定量環(huán)定量環(huán)GPC進(jìn)樣針進(jìn)樣針SP

6、E進(jìn)樣針進(jìn)樣針注射器注射器緩沖管緩沖管溶劑切換十通閥溶劑切換十通閥液相泵密封塞液相泵密封塞主機(jī)電源主機(jī)電源濃縮系統(tǒng)電源濃縮系統(tǒng)電源電源開關(guān)：關(guān)閉電源后，再打開中間要間隔電源開關(guān)：關(guān)閉電源后，再打開中間要間隔1分鐘。分鐘。低溫恒溫水槽低溫恒溫水槽低溫水槽：低溫水槽： 提供冷凝塔的冷凝水，冷凝水溫度提供冷凝塔的冷凝水，冷凝水溫度2-6 可選配：可選配：1、254或或280nm固定波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器固定波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器2、195800nm可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器紫外檢測(cè)器在前處理儀器中的作用：紫外檢測(cè)器在前處理儀器中的作用：1、驗(yàn)證柱效的一個(gè)輔助手段、驗(yàn)證柱效的一個(gè)輔助手段2、針對(duì)某些對(duì)紫外有

7、響應(yīng)的樣品進(jìn)行方法研發(fā)時(shí)的輔助作用、針對(duì)某些對(duì)紫外有響應(yīng)的樣品進(jìn)行方法研發(fā)時(shí)的輔助作用電源開關(guān)：主機(jī)電源，濃縮系統(tǒng)電源，開關(guān)機(jī)時(shí)間間電源開關(guān)：主機(jī)電源，濃縮系統(tǒng)電源，開關(guān)機(jī)時(shí)間間隔隔1 1分鐘以上。分鐘以上。 進(jìn)樣針：進(jìn)樣針：GPCGPC進(jìn)樣針，進(jìn)樣針，SPESPE進(jìn)樣針。進(jìn)樣針。GPCGPC柱子：柱子： 柱子規(guī)格，裝填填料的克數(shù)，裝填高度，柱子規(guī)格，裝填填料的克數(shù)，裝填高度，柱子帶有金屬保護(hù)外殼可重復(fù)使用。柱子帶有金屬保護(hù)外殼可重復(fù)使用。注射器，多通閥：抽取清洗溶劑。注射器，多通閥：抽取清洗溶劑。 樣品盤：規(guī)格，用于何種模式。樣品盤：規(guī)格，用于何種模式。濃縮系統(tǒng)：濃縮腔采用水浴和加熱片加熱模

8、式；可以濃縮系統(tǒng)：濃縮腔采用水浴和加熱片加熱模式；可以使用減壓蒸餾和氮吹模式進(jìn)行濃縮；清洗采用噴霧式，使用減壓蒸餾和氮吹模式進(jìn)行濃縮；清洗采用噴霧式，使用很少的溶劑就可以清洗干凈；激光定容，定容體使用很少的溶劑就可以清洗干凈；激光定容，定容體積從積從0.5-5ml0.5-5ml。冷凝系統(tǒng)：冷凝塔將濃縮后的氣態(tài)溶劑冷凝到液態(tài)，冷凝系統(tǒng)：冷凝塔將濃縮后的氣態(tài)溶劑冷凝到液態(tài)，以保證對(duì)實(shí)驗(yàn)環(huán)境的保護(hù)。以保證對(duì)實(shí)驗(yàn)環(huán)境的保護(hù)。低溫水槽：低溫水槽： 提供冷凝塔的冷凝水，冷凝水溫度提供冷凝塔的冷凝水，冷凝水溫度2-6C。先打開低溫水槽制冷，在打開電源，再電源打開至少先打開低溫水槽制冷，在打開電源，再電源打開

9、至少1min1min后才可以打開工作站。后才可以打開工作站。 在進(jìn)樣針移動(dòng)的過程中，不要碰到針，以免造成運(yùn)行在進(jìn)樣針移動(dòng)的過程中，不要碰到針，以免造成運(yùn)行樣品的終止。樣品的終止。確認(rèn)樣品架的位置刻度和工作站的樣品架位置一致。確認(rèn)樣品架的位置刻度和工作站的樣品架位置一致。運(yùn)行樣品前，確認(rèn)溶劑瓶?jī)?nèi)的溶劑是否足夠，廢液瓶運(yùn)行樣品前，確認(rèn)溶劑瓶?jī)?nèi)的溶劑是否足夠，廢液瓶?jī)?nèi)的空間是否足夠。內(nèi)的空間是否足夠。 儀器的維護(hù)：至少儀器的維護(hù)：至少2周沖一次柱子。具體操作，開機(jī)周沖一次柱子。具體操作，開機(jī)自檢完成后，直接點(diǎn)擊自檢完成后，直接點(diǎn)擊“start pump”，運(yùn)行，運(yùn)行15-30min后，點(diǎn)擊后，點(diǎn)擊“

10、stop pump”，退出工作站，關(guān)，退出工作站，關(guān)閉電源。閉電源。上樣樣品的要求：樣品體系必須和柱子的體系一致；上樣樣品的要求：樣品體系必須和柱子的體系一致；脫水；去除可見雜質(zhì)；油脂的上樣量控制在脫水；去除可見雜質(zhì)；油脂的上樣量控制在1g1g以下以下（標(biāo)準(zhǔn)柱）。（標(biāo)準(zhǔn)柱）。常見故障的判斷和處理：常見故障的判斷和處理： 1. 1.低壓報(bào)警：由于泵頭里有空氣造成溶劑抽不上。低壓報(bào)警：由于泵頭里有空氣造成溶劑抽不上。 解決方案：打開液相泵的密封塞，在工作站上解決方案：打開液相泵的密封塞，在工作站上將流速調(diào)制將流速調(diào)制20ml/min20ml/min，運(yùn)行，運(yùn)行“start pump”“start

11、pump”，待有連，待有連續(xù)溶劑流出，續(xù)溶劑流出，”stop”stop”并關(guān)閉密封塞，將并關(guān)閉密封塞，將流速流速調(diào)回至調(diào)回至5ml/min5ml/min。再次沖柱子，壓力上升至正常值，問題解決。再次沖柱子，壓力上升至正常值，問題解決。 2. 2.高壓報(bào)警：由于管路里有堵塞。高壓報(bào)警：由于管路里有堵塞。 解決方案：將柱子倒過來用，反沖，如果壓力解決方案：將柱子倒過來用，反沖，如果壓力下降，可以繼續(xù)使用；如果壓力仍然偏高，建議更換下降，可以繼續(xù)使用；如果壓力仍然偏高，建議更換柱內(nèi)過濾膜。同時(shí)也可將反壓閥拆下來，用丙酮超聲。柱內(nèi)過濾膜。同時(shí)也可將反壓閥拆下來，用丙酮超聲。 液相泵的壓力范圍液相泵的壓

12、力范圍流速流速流動(dòng)相流動(dòng)相進(jìn)樣速度進(jìn)樣速度進(jìn)樣方式進(jìn)樣方式標(biāo)準(zhǔn)模式充滿定量環(huán)標(biāo)準(zhǔn)模式充滿定量環(huán)定量轉(zhuǎn)移（小于定量定量轉(zhuǎn)移（小于定量環(huán)體積）環(huán)體積）定量轉(zhuǎn)移（大于定量定量轉(zhuǎn)移（大于定量環(huán)體積一個(gè)小瓶）環(huán)體積一個(gè)小瓶）定量轉(zhuǎn)移（大于定量定量轉(zhuǎn)移（大于定量環(huán)體積多個(gè)小瓶環(huán)體積多個(gè)小瓶 分段收集時(shí)間分段收集時(shí)間紫外檢測(cè)器紫外檢測(cè)器廢液瓶廢液瓶GPC柱子柱子選擇和參選擇和參數(shù)編輯數(shù)編輯樣品收集模樣品收集模式選擇式選擇建立新方法建立新方法分段收集模式分段收集模式online聯(lián)機(jī)模式聯(lián)機(jī)模式收集瓶的選擇收集瓶的選擇建立新方法建立新方法樣品加樣品加入濃縮入濃縮腔腔水浴溫度水浴溫度加熱套溫度加熱套溫度濃縮腔真空

13、度濃縮腔真空度濃縮時(shí)體積濃縮時(shí)體積樣品瓶選擇樣品瓶選擇收集瓶選擇收集瓶選擇樣品全部轉(zhuǎn)移到濃縮腔樣品全部轉(zhuǎn)移到濃縮腔樣品部分轉(zhuǎn)移到濃縮腔樣品部分轉(zhuǎn)移到濃縮腔SPE或或GPC在線聯(lián)機(jī)在線聯(lián)機(jī)濃縮濃縮參數(shù)參數(shù)設(shè)定設(shè)定濃縮真空濃縮真空度設(shè)定度設(shè)定停止?jié)饪s時(shí)體積停止?jié)饪s時(shí)體積清洗溶劑體積清洗溶劑體積清洗溶劑選擇清洗溶劑選擇清洗次數(shù)清洗次數(shù)最大濃縮時(shí)間最大濃縮時(shí)間濃縮濃縮定容定容參數(shù)參數(shù)樣品瓶型號(hào)選擇樣品瓶型號(hào)選擇樣品瓶分瓶設(shè)定樣品瓶分瓶設(shè)定每瓶分樣每瓶分樣體積體積收集瓶設(shè)收集瓶設(shè)定定定容溶劑選擇定容溶劑選擇清洗溶劑選擇清洗溶劑選擇清洗溶劑體積設(shè)定清洗溶劑體積設(shè)定清洗次數(shù)設(shè)定清洗次數(shù)設(shè)定定容體積設(shè)定定容體

14、積設(shè)定濃縮濃縮清洗清洗參數(shù)參數(shù)設(shè)定設(shè)定清洗清洗溶劑溶劑選擇選擇清洗清洗溶劑溶劑選擇選擇第一次清洗體積第一次清洗體積清洗次數(shù)清洗次數(shù)第二次清洗體積第二次清洗體積清洗次數(shù)清洗次數(shù)方法名稱方法名稱建立新方法建立新方法調(diào)用的方法名調(diào)用的方法名稱稱調(diào)用的方法調(diào)用的方法的及參數(shù)的及參數(shù)樣品瓶規(guī)格及樣品瓶規(guī)格及數(shù)量數(shù)量收集瓶規(guī)格及數(shù)量收集瓶規(guī)格及數(shù)量清洗體積清洗體積重復(fù)次數(shù)重復(fù)次數(shù)吸取注入的吸取注入的等待時(shí)間等待時(shí)間該步后的該步后的等待時(shí)間等待時(shí)間該步驟溶劑的該步驟溶劑的流出位置流出位置該步該步驟運(yùn)驟運(yùn)行時(shí)行時(shí)間間吸溶劑速度吸溶劑速度使用溶劑使用溶劑注入溶劑速注入溶劑速度度抽氣體體積抽氣體體積重復(fù)次數(shù)重復(fù)次

15、數(shù)該步驟結(jié)該步驟結(jié)束后的等束后的等待時(shí)間待時(shí)間該步該步驟運(yùn)驟運(yùn)行時(shí)行時(shí)間間吸取注入吸取注入空氣速度空氣速度吸取注入吸取注入等待時(shí)間等待時(shí)間樣品瓶類型樣品瓶類型取樣體積取樣體積樣品上柱樣品上柱速度速度吸取樣品吸取樣品速度速度取樣方式取樣方式樣品收集位樣品收集位置置該步驟結(jié)該步驟結(jié)束后等待束后等待時(shí)間時(shí)間取樣注入取樣注入間隔時(shí)間間隔時(shí)間清洗體積清洗體積重復(fù)次數(shù)重復(fù)次數(shù)注入速度注入速度該步驟結(jié)該步驟結(jié)束后的等束后的等待時(shí)間待時(shí)間該步驟溶劑的該步驟溶劑的流出位置流出位置該步該步驟運(yùn)驟運(yùn)行時(shí)行時(shí)間間吸取溶劑吸取溶劑速度速度使用溶劑使用溶劑吸取注入間吸取注入間隔時(shí)間隔時(shí)間收集收集瓶類瓶類型及型及數(shù)量數(shù)量吹

16、干方式吹干方式空氣吹干空氣吹干空氣體積空氣體積該步驟溶劑的該步驟溶劑的流出位置流出位置該步該步驟運(yùn)驟運(yùn)行時(shí)行時(shí)間間注入空氣流注入空氣流速速洗脫體積洗脫體積重復(fù)次數(shù)重復(fù)次數(shù)注入速度注入速度該步驟結(jié)該步驟結(jié)束后的等束后的等待時(shí)間待時(shí)間該步驟溶劑的該步驟溶劑的流出位置流出位置該步該步驟運(yùn)驟運(yùn)行時(shí)行時(shí)間間吸取溶劑吸取溶劑速度速度使用溶劑使用溶劑吸取注入間吸取注入間隔時(shí)間隔時(shí)間收集收集瓶類瓶類型及型及數(shù)量數(shù)量樣品盤類型，必須樣品盤類型，必須和實(shí)際放置的盤類和實(shí)際放置的盤類型一致，刻度一致型一致，刻度一致選擇方法選擇方法選擇樣品選擇樣品盤類型盤類型樣品名稱樣品名稱運(yùn)行模式運(yùn)行模式方法名稱方法名稱標(biāo)準(zhǔn)柱標(biāo)準(zhǔn)

17、柱GPC10010（500*25mm），稱），稱取取50g填料（填料（Bio-Beads SX3），加入），加入200ml環(huán)己烷乙酸乙酯溶劑（體積比環(huán)己烷乙酸乙酯溶劑（體積比1：1的混合溶劑）或二氯甲烷的混合溶劑）或二氯甲烷迷你柱迷你柱GPC20010(500*10mm)，10g填料，填料，100ml混合溶液混合溶液高效快速柱高效快速柱GPC40010(500*10mm)，25g填料，填料，150ml混合溶液；混合溶液；EPA標(biāo)準(zhǔn)柱子標(biāo)準(zhǔn)柱子GPC50010(500*10mm)，70g填料，填料，300ml混合溶液；混合溶液； 填料的稱取填料的稱取稱取相應(yīng)重量填料稱取相應(yīng)重量填料加入適量環(huán)己烷、乙加入適量環(huán)己烷、乙酸乙酯混合溶劑（體酸乙酯混合溶劑（體積比積比1：1）或二氯甲）或二氯甲烷烷攪勻，用一次性橡膠攪勻，用一次性橡膠手套封口，放于避光手套封口，放于避光處浸泡處浸泡12h以上再裝以上再裝填填。1.裝柱之前，將空柱長(zhǎng)裝柱之前，將空柱長(zhǎng) 塞向上的固定在鐵塞向上的固定在鐵架架 臺(tái)上，拔去長(zhǎng)塞。臺(tái)上，拔去長(zhǎng)塞。短短 塞處連接一小段管塞處連接一小段管子。子。2.將浸泡好的填料攪勻?qū)⒔莺玫奶盍蠑噭?后，從上端倒入柱后，從上端倒入柱內(nèi)內(nèi) 3. 待填料都倒入后，等待待填料都倒入后，等待柱內(nèi)的溶劑盡