Folin-Wu法定量測(cè)定血糖的含量

1、血糖含量的定量測(cè)定(Folin-Wu法一、目的1、掌握FolinWu法測(cè)定血糖含量的原理和方法。2、學(xué)會(huì)制備無蛋白血濾液。3、掌握7200型可見分光光度計(jì)的使用方法。二、實(shí)驗(yàn)原理葡萄糖是一種多羥基的醛類化合物。其醛基具有還原性，與堿性銅試劑混合加熱，葡萄糖分子中的醛基被氧化成羧基， ，Cu2+即被葡萄糖還原成Cu+（Cu2O）而沉淀。無蛋白血濾液中的葡萄糖和酸性鉬酸鹽溶液共熱反應(yīng), Cu2O又把酸性鉬酸試劑（Mo6+）還原成低價(jià)的藍(lán)色鉬化合物鉬藍(lán) 。血濾液中葡萄糖的含量與產(chǎn)生的Cu2O成正比，而Cu2O的量與產(chǎn)生的鉬化合物的量成正比?？捎帽壬ǘ康臏y(cè)定。3、實(shí)驗(yàn)儀器1、25mL血糖管3支；

2、2、血糖管橡膠塞3個(gè)；3、1mL胖肚吸管1支； 4、100mL錐形瓶2個(gè)；5、漏斗架1個(gè)； 6、普通漏斗2個(gè)； 7、水浴鍋1個(gè)；8、電爐1個(gè)； 9、移液管 1mL2支; 2mL3支;5 mL2支;10 mL1支; 10、濾紙1盒；11、吸耳球2個(gè)；12、7200型分光光度計(jì)1臺(tái); 13、表面皿1個(gè)4、實(shí)驗(yàn)試劑1、標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液（）(11%葡萄糖母液：稱取葡萄糖，溶于蒸餾水，稀釋并定容至100ml。(2葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液：取葡萄糖母液于100ml容量瓶中，加蒸餾水定容。2、堿性硫酸銅溶液A液：無水碳酸鈉35g，酒石酸鈉13g及碳酸氫鈉11g溶于蒸餾水，稀釋定容至1000ml.B液：硫酸銅晶體5g，溶于

3、蒸餾水并定容至100ml。臨用時(shí)，A液：B液=9：1混合（體積比），混合液于冰箱中保存（4）。3、10%鎢酸鈉溶液：稱取鎢酸鈉10g，溶于蒸餾水并定容至100毫升。4、溶液：于53ml蒸餾水中加入1ml的濃硫酸。5、酸性鉬酸鹽溶液：稱取鉬酸鈉600g,用少量蒸餾水溶解后傾入2000ml 的容量瓶中，加蒸餾水至刻度，搖勻，傾入另一較大的試劑瓶中，加溴水，搖勻，靜止數(shù)小時(shí)后取上清夜500ml，于1000ml容量瓶中，徐徐加入225ml85%磷酸，邊加邊搖勻，再加25%硫酸150ml。置暗處次日，用空氣將剩余的溴趕去。然后加99%醋酸75ml，搖勻，用蒸餾水稀釋定容至1000ml,貯于棕色瓶中。5、

4、實(shí)驗(yàn)步驟1、無蛋白血濾液的制備：氏吸管吸取全血（已加抗凝劑）1ml,緩緩放入100ml錐形瓶中，加蒸餾水7ml，搖勻，溶血后（血液變?yōu)榧t色透明）加10%鎢酸鈉1ml，搖勻.。再加0.33mol/L H2SO41ml，邊加邊搖，加畢充分搖勻，放置515分鐘，至沉淀變?yōu)榘底厣ㄈ绮蛔兩稍偌?.33mol/L H2SO41-2滴）。用干濾紙過濾。先傾入少許，待濾紙濕潤(rùn)后在全部倒入，如濾液不清需重新過濾。每毫升無蛋白血濾液相當(dāng)于1/10ml全血。2、血糖的定量測(cè)定：1、取25ml的血糖管3支，編號(hào)。第一支血糖管中加入2ml蒸餾水（空白管）；第二支血糖管中加2ml標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液；用吸管吸取無蛋白血濾液2

5、ml，放入第三支血糖管中。2、然后向三支血糖管中各加入2ml新配制的堿性硫酸銅溶液，同時(shí)置于沸水浴中8分鐘，取出，在流水中迅速冷卻后,勿搖動(dòng)，各加4ml酸性鉬酸鹽溶液。3、一分鐘后，用蒸餾水稀釋至25ml，混勻，用7200分光光度計(jì)在420nm波長(zhǎng)處比色，以空白管調(diào)節(jié)零點(diǎn)。六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果樣品A1（吸光度）標(biāo)準(zhǔn)液A0（吸光度）水（吸光度）123平均值m=A1/A2*C*10*100m代表100ml全血中含血糖毫克數(shù)C0代表標(biāo)準(zhǔn)液葡萄糖含量（0.1mg/ml）A1代表樣品液光吸收值A(chǔ)0代表標(biāo)準(zhǔn)液光吸收值所以可得出m=0.184/0.131*0.1*10*100=140.4580153約等于140.458mg。7、實(shí)驗(yàn)分析1、實(shí)驗(yàn)過程中哪些操作可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性？在沉淀不完全時(shí)過濾，吸管中放出血液太快使大量血液黏在吸管內(nèi)壁，或有亞銅離子氧化成銅離子，比色測(cè)量時(shí)也可能會(huì)出現(xiàn)誤差。2、實(shí)驗(yàn)中，血糖管有什么作用？可減