葡萄酒中有機(jī)酸的測(cè)定綜合技能實(shí)訓(xùn)指導(dǎo)書

1、儀器分析綜合技能實(shí)訓(xùn)指導(dǎo)書實(shí)訓(xùn)項(xiàng)目名稱葡萄酒中有機(jī)酸的測(cè)定學(xué)時(shí)6學(xué)時(shí)實(shí)訓(xùn)目的1.能正確操作和使用高效液相色譜儀測(cè)定樣品。2.能正確進(jìn)行色譜定性分析。3.能運(yùn)用標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行色譜定量分析。一、原理葡萄酒經(jīng)稀釋后的樣液經(jīng)0.22m濾膜過濾，以(NH4)2HPO4H3PO4緩沖溶液（pH=2.7）為流動(dòng)相，用高效液相色譜法在C18色譜柱上分離，于210 nm處經(jīng)紫外檢測(cè)器檢測(cè)，用峰面積標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定有機(jī)酸的含量。二、試劑和儀器1試劑本方法中所用試劑均為分析純，試驗(yàn)用水為重蒸水或同等純度的水，經(jīng)0. 45m濾膜真空抽濾。（1）1 mol/L磷酸氫二銨溶液。（2）1 mol/L磷酸。（3）有機(jī)酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液

2、：稱取酒石酸、蘋果酸、檸檬酸各0.500 0 g；用超濾水溶解后，定容至50 mL。酒石酸、蘋果酸、檸檬酸的濃度分別為10.0mg/mL，此液為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。（4）有機(jī)酸標(biāo)準(zhǔn)使用液；取5. 00 mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于50 mL容量瓶中用超純水稀釋到刻度。酒石酸、蘋果酸、檸檬酸的濃度分別為1.0 mg/mL。2儀器（1）組織搗碎機(jī)。（2）恒溫水浴箱。（3）高效液相色譜儀，配紫外可見檢測(cè)器。（4）酸度計(jì)。（5）針頭過濾器，0.22m合成纖維樹脂濾膜。三、分析步驟1試樣處理以市售果汁飲料為樣品。準(zhǔn)確吸取5.00 mL試樣（若試樣中含二氧化碳應(yīng)先加熱除去；若試樣中含有人工合成色素應(yīng)先加入聚酰胺粉于70水浴中

3、加熱脫色，樣液在3 000 r/min下離心10min，再取上清液），加入0.2 mL 1 mol/L磷酸，用超純水稀釋至10 mL，經(jīng)0.22m濾膜過濾，濾液供分析用。2標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制取有機(jī)酸標(biāo)準(zhǔn)使用液（1.0 mg/mL）0.50、1.00、2.00、5.00、10. 00 mL，加入0.2 mL 1 mol/L磷酸，用超純水稀釋至10mL，混勻。經(jīng)0.22m濾膜過濾，濾液供分析用。此溶液有機(jī)酸濃度分別為50g/mL、100g/mL、200g/mL、500g/mL、1000g/mL。3測(cè)定（1）色譜條件 預(yù)柱：C18柱，10m，4.6 mm30 mm。 分析柱：C18柱，5m，4.6 m

4、m250 mm。 流動(dòng)相：0. 01 mol/L磷酸氫二銨，用1 mol/L磷酸調(diào)至pH=2. 70，臨用前用超聲波脫氣。 流速：1 mL/min。 進(jìn)樣量：20L。 紫外檢測(cè)器波長(zhǎng)：210 nm。（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制將準(zhǔn)備好的有機(jī)酸標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)樣20L，于210 nm處測(cè)量峰高或峰面積，每個(gè)濃度重復(fù)進(jìn)樣2次3次，取平均值。以有機(jī)酸的濃度為橫坐標(biāo)，色譜峰面積的均值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線或經(jīng)過線性回歸得出回歸方程。（3）試樣測(cè)定在與繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線相同的色譜條件下，取20L試樣液注入色譜儀，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線或線性回歸方程，求出樣液中有機(jī)酸的濃度。四、數(shù)據(jù)處理1繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)未知樣圖譜進(jìn)行積分處理，計(jì)算樣品中有機(jī)酸的含量。2填寫 “高效液相色譜法測(cè)定樣品原始數(shù)據(jù)記錄表”。高效液相色譜法測(cè)定樣品原始數(shù)據(jù)記錄表樣品名稱生產(chǎn)廠家生產(chǎn)批號(hào)采樣日期測(cè)定項(xiàng)目檢測(cè)日期檢測(cè)依據(jù)檢測(cè)方法分析條件儀器名稱儀器型號(hào)實(shí)驗(yàn)環(huán)境溫度： ； 濕度： %色譜柱柱溫流動(dòng)相流速 mL/min檢測(cè)波長(zhǎng) nm進(jìn)樣量uL分析結(jié)果組分1名稱保留時(shí)間（min）標(biāo)準(zhǔn)溶液級(jí)別12345濃度g/mL峰面積A標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程相關(guān)系數(shù)r2試樣體積V（mL）樣品定容體積V1（mL）樣液中峰面積樣液中的濃度c（ug/mL）樣品中的含量X（mg/L）計(jì)算公式： x