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1、維生素C含量的測(cè)定【目的和要求】1.學(xué)習(xí)定量測(cè)定維生素C的原理和方法。2. 進(jìn)一步掌握滴定法的基本操作技術(shù)。3. 了解松針、水果及蔬菜中維生素C的含量情況?!緦?shí)驗(yàn)原理】維生素C是人類(lèi)營(yíng)養(yǎng)中最重要的維生素之一,缺少它時(shí)會(huì)產(chǎn)生壞血病,因此又稱(chēng)抗壞血酸。它對(duì)物質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)具有重要的作用。維生素C是具有L系糖構(gòu)型的不飽和多羥化合物,屬于水溶性維生素。她分布很廣,植物的綠色部分及許多水果(如橘子、蘋(píng)果、草莓、山楂)、蔬菜(黃瓜、洋白菜西紅柿等)中的含量更為豐富。維生素C具有很強(qiáng)的還原性。它可分為還原型和脫氫型(氧化型)。根據(jù)它具有的還原性質(zhì)可測(cè)定其含量。還原型抗壞血酸能還原染料2,6-二氯酚靛酚(Dic
2、hlorophenolindo phenol,簡(jiǎn)寫(xiě) DCPIP),本身則氧化成脫氫型。在酸性溶液中,2,6-二氯酚靛酚呈紅色,還原后變?yōu)闊o(wú)色。因此,當(dāng)用2,6-二氯酚靛酚滴定含有抗壞血酸的酸性溶液時(shí),在抗壞血酸尚未被全部氧化前,則滴下的染料立即被還原成為無(wú)色。一旦溶液中的抗壞血酸已全部被氧化時(shí),則滴下的染料立即使溶液變成粉紅色。所以,當(dāng)溶液從無(wú)色轉(zhuǎn)變成微紅色時(shí)即表示溶液中的抗壞血酸剛剛被全部氧化,此時(shí)即為滴定終點(diǎn)。從滴定時(shí)2,6-二氯酚靛酚標(biāo)準(zhǔn)溶液的消耗量,可以計(jì)算出被檢物質(zhì)中抗壞血酸的含量。該法簡(jiǎn)便易行,但有下列缺點(diǎn):1。在生物組織內(nèi)和組織提取液中,抗壞血酸能以脫氫抗壞血酸及結(jié)合抗壞血酸的形
3、式存在。它們同樣具有維生素的生理功能,但不能將2,6-二氯酚靛酚還原脫色。(總抗壞血酸的量常用2,4-二硝基苯肼法和熒光分光光度法測(cè)定)2.生物組織提取物和生物體液中常含有其它還原性物質(zhì),其中有些在同樣的條件下也可使2,6-二氯酚靛酚還原脫色。3.在生物組織中,常有色素類(lèi)物質(zhì)存在,給滴定終點(diǎn)的觀(guān)察造成困難。【實(shí)驗(yàn)試劑和器材】(一)試劑1. 標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸溶液準(zhǔn)確稱(chēng)取10mg 純抗壞血酸(應(yīng)為潔白色,發(fā)黃則不能用)溶于1%草酸溶液中,并稀釋至100ml,貯于棕色瓶中,冷藏。最好臨用前配制。% 2,6-二氯酚靛酚溶液準(zhǔn)確稱(chēng)取250mg2,6-二氯酚靛酚溶于150ml含有52mg NaHCO3 的熱水
4、中,冷卻后加水稀釋至250ml,濾去不溶物,貯于棕色瓶中冷藏(4)約可保存一周。每次臨用時(shí),以標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸標(biāo)定。2%草酸溶液,1%草酸溶液。(二)器材架盤(pán)天平, 錐形瓶(100ml),容量瓶,移液管,漏斗,微量滴定管(5ml)等【實(shí)驗(yàn)方法】(一)提取水洗干凈松針或整株新鮮蔬菜(或整個(gè)新鮮水果),用紗布或吸水紙吸干表面水分。然后用天平準(zhǔn)確稱(chēng)取松針(或蔬菜水果)約0.5克,放在研缽中,加2% 鹽酸5-10毫升,研磨成漿狀。濾紙過(guò)濾,將濾液濾入50毫升容量瓶中。濾餅可用少量2% 鹽酸洗2-3次。最后用2%鹽酸溶液稀釋到刻度并混勻。(二)標(biāo)準(zhǔn)液的滴定準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸溶液1.0ml(含0.1mg抗壞
5、血酸)置100ml錐形瓶中,加 9ml 1%草酸,用微量滴定管以0.1% 2,6-二氯酚靛酚鈉溶液滴定至淡紅色,并保持15秒不褪色,即達(dá)終點(diǎn)。由所用染料的體積計(jì)算出1ml染料相當(dāng)于多少毫克抗壞血酸(取10ml 1%草酸作空白對(duì)照,按以上方法滴定)。(三)樣品的滴定準(zhǔn)確吸取濾液兩份,每份10毫升分別放入兩個(gè)錐形瓶(100ml)內(nèi),滴定方法同前。另取兩份10ml 1%草酸作空白對(duì)照滴定。(四)計(jì)算式中:VA:滴定樣品提取液所用染料的平均毫升數(shù)VB:滴定空白對(duì)照所用染料的平均毫升數(shù)C:樣品提取液總的毫升數(shù)D:滴定時(shí)所取樣品提取液的毫升數(shù)W:待測(cè)樣品的重量(g)T:為1ml染料能氧化抗壞血酸的毫克數(shù)【注意事項(xiàng)】1. 某些水果、蔬菜(如橘子、西紅柿)漿狀物泡沫太多,可加數(shù)滴丁醇或辛醇。2. 整個(gè)操作過(guò)程要迅速,防止還原型抗壞血酸被氧化。滴定過(guò)程一般不超過(guò)2分鐘。因?yàn)樵诒镜味l件下,一些非維生素C的還原性物質(zhì)也可與2,6-二氯酚靛酚發(fā)生反應(yīng),影響結(jié)果。
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