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1、1.簡(jiǎn)述Km的意義?1當(dāng)V/v =2時(shí), Km =S , Km是反應(yīng)速率v等于最大速率V一半時(shí)的底物濃度,單位為摩爾/升(mol/L)。2Km =K2+K3/K1,當(dāng)K2 K3時(shí),Km值可用來(lái)表示酶對(duì)底物的親和力。Km值越小,酶與底物的親和力越大;反之,則越小。3Km是酶的特征性常數(shù),它只與酶的結(jié)構(gòu)和酶所催化的底物有關(guān),與酶濃度無(wú)關(guān)。Km和Vmax可用圖解法根據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)測(cè)出。通過(guò)測(cè)定在不同底物濃度下的Vo,再用1/Vo對(duì)1/S的雙倒數(shù)作圖,又稱(chēng)Lineweaver-BurK作圖法,即取米氏方程式倒數(shù)形式。2.何為糖酵解?糖異生與糖酵解代謝途徑有何差異?3.簡(jiǎn)述影響酶促反應(yīng)速率的主要因素有哪些?
2、(1)酶濃度:在底物充足情況下,酶濃度越高反應(yīng)速率越快;(2)底物濃度:底物濃度對(duì)酶反應(yīng)速率的影響符合米氏方程,即 v=Vmax*S/(Km+S),當(dāng)有抑制劑存在時(shí),方程要進(jìn)行修改;(3)抑制劑:與酶結(jié)合,降低酶反應(yīng)速率,但不使蛋白質(zhì)變性,主要分為可逆與不可逆二種,可逆抑制又分競(jìng)爭(zhēng)性、非競(jìng)爭(zhēng)性和反競(jìng)爭(zhēng)性三種;(4)激活劑:能提高酶反應(yīng)活性的無(wú)機(jī)或有機(jī)小分子,如 Cl-是唾液淀粉酶的激活劑,離子之間對(duì)酶激活有拮抗作用,即一種離子對(duì)一種酶激酶但對(duì)另一種離子激活的酶可能是抑制;(5)溫度:溫度對(duì)酶的影響呈鐘形,大部分酶都有一個(gè)最適溫度,此時(shí)酶活性較高,溫度過(guò)高可能會(huì)酶蛋白變性而失活;(6)pH:它對(duì)
3、酶反應(yīng)速率的影響也呈現(xiàn)鐘形,也有一個(gè)最高活性時(shí)的 pH,有的酶在酸性有在酶在堿性 pH 有最高活性; 4.簡(jiǎn)述化學(xué)滲透假說(shuō)。一種學(xué)說(shuō),主要論點(diǎn)是底物氧化期間建立的質(zhì)子濃度梯度提供了驅(qū)動(dòng) ADP 和 Pi 形成 ATP 的能量(P352)5.簡(jiǎn)述磷酸戊糖的生理意義?(1)是細(xì)胞產(chǎn)生還原力 NADPH 的主要途徑。NADPH 在生物體中的主要用途有脂肪酸、類(lèi)固醇的生物合成;光合作用中戌糖磷酸途徑的部分參加由 CO2 合成 Glc 的途徑;核苷酸轉(zhuǎn)變成脫氧核苷酸;保持紅細(xì)胞中谷胱甘肽的還原性;(2)是細(xì)胞內(nèi)不同結(jié)構(gòu)糖分子的重要來(lái)源,并為各種單糖的互相轉(zhuǎn)變提供條件。三碳糖、四碳糖、五碳糖、六碳糖及七碳
4、糖等的碳骨架都是細(xì)胞內(nèi)糖類(lèi)不同的結(jié)構(gòu)分子,其中核糖及其衍生物 ATP、CoA、NAD+、 FAD、RNA、DNA 等都是重要生物分子的組成部分,它們都來(lái)源于戌糖磷酸途徑。6.簡(jiǎn)述tRNA二級(jí)結(jié)構(gòu)的組成特點(diǎn)及每一部分的功能?tRNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)為“三葉草”形,包括4個(gè)螺旋區(qū)、3個(gè)環(huán)及一個(gè)附加叉。各部分的結(jié)構(gòu)都和它的功能有關(guān)。5端17位與近3端6772位形成的雙螺旋區(qū)稱(chēng)氨基酸臂,似“葉柄”,3端有共同的-CCA-OH結(jié)構(gòu),用于連接該RNA轉(zhuǎn)運(yùn)的氨基酸。3個(gè)環(huán)是二氫尿嘧啶環(huán)(D環(huán))、反密碼子環(huán)、TC環(huán)。7.簡(jiǎn)述別構(gòu)調(diào)節(jié)的特點(diǎn)?簡(jiǎn)述共價(jià)修飾的特點(diǎn)?8.試列表比較糖酵解和有氧氧化進(jìn)行的部位。反應(yīng)條件、關(guān)鍵
5、酶、產(chǎn)物、能量生成及生理意義?部位:1.細(xì)胞溶質(zhì)2.是在細(xì)胞的胞液和線粒體兩個(gè)部位進(jìn)行的。反應(yīng)條件:1.無(wú)氧2.有氧關(guān)鍵酶:1.己糖激酶、果糖磷酸激酶(PFK)和丙酮酸激酶2. 己糖激酶、果糖磷酸激酶(PFK)和丙酮酸激酶丙酮酸脫氫酶、檸檬酸合成酶、異檸檬酸脫氫酶、- 酮戊二酸脫氫酶系產(chǎn)物及能量生成:1.葡萄糖+2Pi+2ADP+2NAD+ 2丙酮酸+2ATP+2NADH+2H+2H2O葡萄糖+2Pi+2ADP+2H+ 2乳酸+2ATP+2H2O葡萄糖+2Pi+2ADP+2H+ 2乙醇+2CO2+2ATP+2H2O 2. 葡萄糖+6O2+36/38ADP+36/38Pi6 CO2+42/44H
6、2O+36/38ATP生理意義:1.糖酵解是生物界普遍存在的供能途徑,其生理意義是為機(jī)體在無(wú)氧或缺氧條件下(應(yīng)激狀態(tài))提供能量滿(mǎn)足生理需要。例如,劇烈運(yùn)動(dòng)時(shí),肌肉內(nèi)ATP大量消耗,糖酵解加速可迅速得到ATP;成熟的紅細(xì)胞沒(méi)有線粒體,完全靠糖酵解供能;神經(jīng)細(xì)胞、白細(xì)胞、骨髓、視網(wǎng)膜細(xì)胞代謝極為活躍,不缺氧時(shí)亦由糖酵解提供部分能量。2. 糖的有氧氧化生理意義:為機(jī)體提供更多的能量,是機(jī)體利用糖和其他物質(zhì)氧化而獲得能量的最有效方式。三羧酸循環(huán)是糖、脂、蛋白質(zhì)三大營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)最終代謝通路和轉(zhuǎn)化的樞紐。糖轉(zhuǎn)變成脂是最重要的例子。三羧酸循環(huán)在提供某些物質(zhì)生物合成的前體中起重要作用。9.簡(jiǎn)述糖異生的生理意義?1
7、.補(bǔ)充血糖,可保持其濃度的相對(duì)恒定。在饑餓或劇烈運(yùn)動(dòng)時(shí)對(duì)保持血糖水平是重要的,在腦和紅細(xì)胞,幾乎完全依靠血糖作為能量的來(lái)源。2.回收乳酸能量,防止乳酸中毒。劇烈運(yùn)動(dòng)時(shí),肌糖原酵解產(chǎn)生大量乳酸,部分由尿排出,但大部分經(jīng)血液運(yùn)到肝臟,通過(guò)糖異生作用合成肝糖原和葡萄糖,以補(bǔ)充血糖,再被肌肉利用,形成乳酸循環(huán)。所以糖異生途徑對(duì)乳酸的再利用、肝糖原的更新、補(bǔ)充肌肉消耗的糖及防止乳酸中毒都有一定的意義。10.簡(jiǎn)述三羧酸循環(huán)的要點(diǎn)?1.檸檬酸合成酶催化乙酰CoA與草酰乙酸縮合成檸檬酸和CoASH。是第一個(gè)關(guān)鍵酶催化的限速反應(yīng)。2.順烏頭酸酶催化檸檬酸異構(gòu)成異檸檬酸。3.異檸檬酸在異檸檬酸脫氫酶的催化下生成草
8、酰琥珀酸,再脫羧生成-酮戊二酸。此步是第一次氧化脫羧,異檸檬酸脫氫酶是第二個(gè)關(guān)鍵酶。4.- 酮戊二酸由- 酮戊二酸脫氫酶系催化氧化脫羧生成琥珀酰CoA。此酶系由3種酶和5種輔助因子組成,是第三個(gè)關(guān)鍵酶催化的第二次氧化脫羧。5.琥珀酰CoA在琥珀酰硫激酶催化下生成琥珀酸。這是循環(huán)中惟一的一次底物水平磷酸化,GDP磷酸化形成GTP。6.琥珀酸在琥珀酸脫氫酶催化下氧化為延胡索酸。這是第三步脫氫,生成FADH2。7.延胡索酸在延胡索酸酶作用下水化形成蘋(píng)果酸。8.蘋(píng)果酸在蘋(píng)果酸脫氫酶催化下氧化為草酰乙酸。這是第四步脫氫,生成NADH+H+一次三羧酸循環(huán)過(guò)程,可歸結(jié)為一次底物水平磷酸化,二次脫羧,三個(gè)關(guān)鍵
9、酶促反應(yīng),四步脫氫氧化反應(yīng)。每循環(huán)一次產(chǎn)生12分子ATP,總反應(yīng):乙酰CoA+2H2O+3NAD+ +FAD+ADP+Pi2CO2+3NADH+3H+FADH2+CoASH+ATP11.在糖代謝過(guò)程中生成的丙酮酸可進(jìn)入哪些代謝途徑?糖酵解產(chǎn)生丙酮酸的去路主要有三條:第一是在有氧條件下,經(jīng)過(guò)丙酮酸脫氫酶系催化生成乙酰 CoA,然后經(jīng)三羧酸循環(huán)降解生成二氧化碳和水并釋放能量和電子載體;第二是在無(wú)氧條件下,在乳酸脫氫酶的催化下使丙酮酸還原成乳酸,同時(shí)使 NAD+再生;第三是在無(wú)氧化條件下(發(fā)酵母的酒精發(fā)酵過(guò)程), 12.簡(jiǎn)述信使RNA的結(jié)構(gòu)特征?1細(xì)胞內(nèi)含量較少的一類(lèi)RNA,約占總RNA的3%。其功
10、能是將核內(nèi)DNA的堿基順序(遺傳信息)按堿基互補(bǔ)原則轉(zhuǎn)錄至核糖體,指導(dǎo)蛋白質(zhì)的合成。2種類(lèi)多,作為不同蛋白質(zhì)合成的模板,其一級(jí)結(jié)構(gòu)差異很大。真核細(xì)胞的mRNA有不同于原核細(xì)胞的特點(diǎn):3- 末端有多聚A(polyA)尾,5-末端加有一個(gè)“帽”式結(jié)構(gòu),(m7 Gppp)13. 簡(jiǎn)述 tRNA 的二級(jí)結(jié)構(gòu)的組成特點(diǎn)及每一部分的功能。 tRNA 的二級(jí)結(jié)構(gòu)組成和功能如下:1)、氨基酸臂:由 7 對(duì)堿基組成、富含鳥(niǎo)嘌呤,末端為 CCAOH,起接受氨基酸的作用;2)、二氫尿嘧啶環(huán):由 8-12 個(gè)核苷酸組成,含有二個(gè)二氫尿嘧啶,通過(guò) 3-4 對(duì)堿基對(duì)形成的雙螺旋區(qū)與 tRNA 的其余部分相連,該環(huán)可能與識(shí)
11、別特定的氨酰 tRNA 合成酶有關(guān);)、反密碼環(huán):由對(duì)核苷酸組成,環(huán)中部有個(gè)堿基形成反密碼子,它可識(shí)別 mRNA 上的密碼子;)、額外環(huán):由 3-18 個(gè)不配對(duì)的堿基組成,位于反密碼環(huán)和 TC 環(huán)之間,不同的 tRNA 具有不同的額外環(huán),它是 tRNA 分類(lèi)和重要指標(biāo);5)、TC 環(huán):由 7 個(gè)核苷酸組成,通過(guò) 5 對(duì)堿基組成的雙螺旋區(qū)與tRNA 分子其部分相連,它可能參與跟核糖體的結(jié)合。 14. RNA 有哪三種類(lèi)型,各有何主要功能? RNA 有三種即 tRNA(轉(zhuǎn)運(yùn) RNA)、mRNA(信使 RNA)和 rRNA(核糖體RNA)。主要功能有:1)tRNA:約占總 RNA 的 16%,含有
12、70-90 個(gè)核苷酸, tRNA 的種類(lèi)很多,核酸中的稀有核苷酸也主在出現(xiàn)于 tRNA 中,tRNA 與蛋白合成所需的單體氨基酸形成復(fù)合物,將氨基酸運(yùn)輸?shù)胶颂求w中 mRNA 的特定位置上。2)、mRNA:約占 RNA 的 5%,上合成蛋白質(zhì)的直接模板,每一條多肽鏈均有一種特定的 mRNA 作為模板。它將 DNA 上的遺傳信息轉(zhuǎn)錄下來(lái),攜帶到核糖體上以密碼方式控制蛋白質(zhì)合成的氨基酸排列順序。3)、 rRNA:約占總 RNA 的 80%,原核生物和真核生物中 rRNA 種類(lèi)都很多,如5SrRNA、16SrRNA、28SrRNA 等。它與蛋白質(zhì)共同構(gòu)成核糖體,核糖體是蛋白質(zhì)合成的場(chǎng)所,同時(shí)還協(xié)助或參
13、與了蛋白質(zhì)合成的起始。 15.酶的抑制劑種類(lèi)及其特點(diǎn)?使酶活性下降而不導(dǎo)致酶變性的物質(zhì)稱(chēng)為酶的抑制劑。抑制劑作用有可逆和不可逆抑制兩類(lèi)。以可逆抑制最為重要。 (一) 不可逆抑制作用這類(lèi)抑制劑通常以共價(jià)鍵與酶活性中心上的必需基團(tuán)相結(jié)合,使酶失活,一般不能用透析、超濾等物理方法去除。這類(lèi)抑制作用可用某些藥物解毒,使酶恢復(fù)活性。如農(nóng)藥敵百蟲(chóng)、敵敵畏、1059等有機(jī)磷化合物能特異地與膽堿酯酶活性中心的絲氨酸羥基結(jié)合,使酶失活,導(dǎo)致乙酰膽堿不能水解而積存。迷走神經(jīng)興奮呈現(xiàn)中毒狀態(tài)。解磷定(PAM)可解除有機(jī)磷化合物對(duì)羥基酶的抑制作用,顯然這類(lèi)解毒藥物和有機(jī)磷農(nóng)藥結(jié)合的強(qiáng)度大于和酶結(jié)合。重金屬鹽引起的巰基
14、酶中毒,可用絡(luò)合劑或加入其他過(guò)量的巰基化合物,如二巰基丙醇(BAL)來(lái)解毒。(二) 可逆抑制作用這類(lèi)抑制劑通常以非共價(jià)鍵與酶可逆性結(jié)合,使酶活性降低或失活,采用透析、超濾的方法可去除抑制劑,恢復(fù)酶活性。可逆抑制有競(jìng)爭(zhēng)、非競(jìng)爭(zhēng)、反競(jìng)爭(zhēng)3種類(lèi)型,以競(jìng)爭(zhēng)性抑制研究的最多。三種作用的共同點(diǎn)是因Km和Vmax值的變化導(dǎo)致酶促反應(yīng)初速度下降。競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑的結(jié)構(gòu)與底物類(lèi)似,且在酶的同一部位(活性中心)和酶結(jié)合,僅在加大底物濃度時(shí)才逐漸抵消,顯然Km值要增加,Vmax不變。非競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑不直接影響酶與底物的結(jié)合,酶同時(shí)和二者結(jié)合生成的中間產(chǎn)物是三元復(fù)合物,也無(wú)正常產(chǎn)物生成,所以Km不變,而Vmax減小。反競(jìng)爭(zhēng)
15、抑制劑促進(jìn)酶與底物的結(jié)合,形成的三元復(fù)合物也不能形成正常產(chǎn)物,所以Km變小,Vmax也變小。藥物是酶的抑制劑。競(jìng)爭(zhēng)性抑制原理應(yīng)用范例是磺胺藥的研制?;前匪幒图?xì)菌合成葉酸所需的對(duì)氨基苯甲酸僅一個(gè)碳原子之別(變成了S),使細(xì)菌的葉酸不能正常合成,導(dǎo)致細(xì)菌的核苷酸合成受阻而死亡。而人以攝入葉酸為主,故磺胺藥對(duì)人的核酸合成無(wú)影響。16.檸檬酸循環(huán)的生物學(xué)意義?提示:三羧酸循環(huán)是由四個(gè)碳原子的草酰乙酸與二個(gè)碳原子的乙酰輔酶 A 縮合成具有三個(gè)羧基的檸檬酸開(kāi)始,經(jīng)過(guò)二次脫羧和四次氧化還原反應(yīng)后又以草酰乙酸結(jié)束。由于循環(huán)中首先生成含有三個(gè)羧基的檸檬酸,故又稱(chēng)三羧酸循環(huán)或檸檬酸循環(huán),簡(jiǎn)稱(chēng) TCA 循環(huán),為紀(jì)念
16、德國(guó)科學(xué)家 Hans Krebs 在闡明三羧酸循環(huán)中所做出的突出貢獻(xiàn),三羧酸循環(huán)又稱(chēng) Krebs 循環(huán)。TCA 的生理意義主要包括二個(gè)方面:(1)為機(jī)體提供大量能量。1 分子葡萄糖經(jīng)酵解、 TCA 和呼吸鏈氧化后,可產(chǎn)生 38 分子 ATP。(2)TCA 是糖代謝、蛋白質(zhì)代謝、脂肪代謝、核酸代謝以及次生物質(zhì)代謝聯(lián)絡(luò)的樞紐,它的中間產(chǎn)物可參與其它代謝途徑,其它代謝的產(chǎn)物最終可通過(guò) TCA 循環(huán)氧化為 CO2 和 H2O,并釋放出能量。17.簡(jiǎn)述tRNA在蛋白質(zhì)的生物合成中是如何起作用的?(1)mRNA 在蛋白質(zhì)生物合成中的作用:攜帶遺傳信息,根據(jù)堿基配對(duì)原則,DNA 將遺傳信息轉(zhuǎn)錄給 mRNA,
17、帶有蛋白質(zhì)合成信息的 mRNA 在核糖體上指導(dǎo)蛋白質(zhì)的生物合成。(2)tRNA 在蛋白質(zhì)生物合成中的作用:由于遺傳密碼具有簡(jiǎn)并性,大多數(shù)氨基酸都具有二個(gè)以上的密碼子,所以每個(gè)氨基酸有不止一個(gè) tRNA與之相對(duì)應(yīng)。氨酰 tRNA合成酶催化氨基酸與相應(yīng)的 tRNA生成氨酰 tRNA,到達(dá)核糖體由 tRNA 上的反密碼子與 mRNA 上的密碼子相互識(shí)別,使其所推帶的氨基酸參加蛋白質(zhì)生物合成。 (3)rRNA 在蛋白質(zhì)生物合成中的作用:rRNA 和與蛋白質(zhì)合成有關(guān)的因子結(jié)合成核糖體,成為蛋白質(zhì)合成的場(chǎng)所,在許多核糖體上同時(shí)翻譯一個(gè)蛋白質(zhì)時(shí),一條 mRNA 上結(jié)合許多核糖體形成多聚核糖體。 18.簡(jiǎn)述D
18、NA復(fù)制的基本規(guī)律?DNA復(fù)制過(guò)程?DNA半保留復(fù)制、DNA半不連續(xù)復(fù)制19.糖類(lèi)、蛋白質(zhì)和脂類(lèi)及核酸這四大類(lèi)物質(zhì)代謝的相互關(guān)系如何?物質(zhì)代謝通過(guò)各代謝途徑的共同中間產(chǎn)物相互聯(lián)系,但在相互轉(zhuǎn)變的程度上差異很大,有些代謝反應(yīng)是不可逆的。乙酰CoA是糖、脂、氨基酸代謝共有的重要中間代謝物,三羧酸循環(huán)是三大營(yíng)養(yǎng)物最終代謝途徑,是轉(zhuǎn)化的樞紐。1. 糖代謝與脂肪代謝的關(guān)系糖可以轉(zhuǎn)變成脂肪、磷脂和膽固醇。二羥丙酮磷酸經(jīng)甘油磷酸脫氫酶催化變成甘油-磷酸;丙酮酸氧化脫羧變成乙酰輔酶A,再合成雙數(shù)碳原子的脂肪酸。在動(dòng)物和人,脂肪轉(zhuǎn)變成糖惟量很少。甘油可經(jīng)糖異生變成糖原,但脂肪酸代謝的乙酰輔酶A不能轉(zhuǎn)變成丙酮酸,
19、不能異生成糖。雖然甘油、丙酮和丙酰CoA可以轉(zhuǎn)變成糖,其量微不足道。植物體內(nèi)有乙醛酸循環(huán)途徑,所以,脂肪轉(zhuǎn)變成糖惟量大。 2. 糖代謝與蛋白質(zhì)代謝的關(guān)系糖不能轉(zhuǎn)變成蛋白質(zhì),而蛋白質(zhì)可轉(zhuǎn)變成糖。糖代謝產(chǎn)生的-酮酸(丙酮酸、-酮戊二酸、草酰乙酸)氨基化和轉(zhuǎn)氨生成相應(yīng)的非必需氨基酸。蛋白質(zhì)分解的20種氨基酸(亮氨酸、賴(lài)氨酸除外),均可生成-酮酸轉(zhuǎn)變?yōu)樘恰?. 脂肪代謝和蛋白質(zhì)代謝的關(guān)系脂不能轉(zhuǎn)變?yōu)榈鞍踪|(zhì),而蛋白質(zhì)可轉(zhuǎn)變?yōu)橹?lèi)。因?yàn)橹舅徂D(zhuǎn)變成氨基酸僅限于谷氨酸,且需草酰乙酸存在(來(lái)源糖)。氨基酸代謝可生成乙酰CoA及合成磷脂的原料。4. 核酸和其他物質(zhì)代謝的關(guān)系核酸和其他物質(zhì)代謝的關(guān)系密切。核酸通過(guò)
20、控制蛋白質(zhì)的合成影響細(xì)胞的組成成分和代謝類(lèi)型,核酸代謝離不開(kāi)酶及調(diào)節(jié)蛋白。許多核苷酸在物質(zhì)代謝中起重要作用,UTP參與糖的合成,CTP參與磷脂的合成,CTP為蛋白質(zhì)合成所必需。許多輔酶為核苷酸衍生物。氨基酸及其代謝產(chǎn)生的一碳單位,糖代謝磷酸戊糖途徑產(chǎn)生的磷酸核糖是合成核苷酸的原料。20.為什么哺乳動(dòng)物攝入大量糖類(lèi)容易長(zhǎng)胖?21,試述如何決定DNA復(fù)制的準(zhǔn)確性?決定 DNA 復(fù)制準(zhǔn)確的因素有:(1)DNA 聚合酶具有模板依賴(lài)性,復(fù)制時(shí) dNTP 按 A-T 或 T-A、G-C 或 C-G 堿基配對(duì)規(guī)律對(duì)號(hào)入座,使子代 DNA 與親代 DNA 核苷酸順序相同,但大約有 10-4 的錯(cuò)配;(2)DN
21、A 聚合酶,DNA 聚合酶均具有 3Æ5外切酶活性,有糾正錯(cuò)配的校正作用,使錯(cuò)配減至 10-6;(3)再經(jīng)錯(cuò)配修復(fù)機(jī)制時(shí),使錯(cuò)配減至 10-9 以下。通過(guò)上述三種機(jī)制保證了復(fù)制的準(zhǔn)確性。 22.為什么脂肪酸合成中的縮合反應(yīng)是丙二酸單酰輔酶A,而不是兩個(gè)乙酰輔酶A?23.請(qǐng)你敘述糖代謝、脂肪酸代謝和蛋白質(zhì)代謝三者之間的關(guān)系?1. 糖代謝與脂肪代謝的關(guān)系糖可以轉(zhuǎn)變成脂肪、磷脂和膽固醇。二羥丙酮磷酸經(jīng)甘油磷酸脫氫酶催化變成甘油-磷酸;丙酮酸氧化脫羧變成乙酰輔酶A,再合成雙數(shù)碳原子的脂肪酸。在動(dòng)物和人,脂肪轉(zhuǎn)變成糖惟量很少。甘油可經(jīng)糖異生變成糖原,但脂肪酸代謝的乙酰輔酶A不能轉(zhuǎn)變成丙酮酸,不
22、能異生成糖。雖然甘油、丙酮和丙酰CoA可以轉(zhuǎn)變成糖,其量微不足道。植物體內(nèi)有乙醛酸循環(huán)途徑,所以,脂肪轉(zhuǎn)變成糖惟量大。 2. 糖代謝與蛋白質(zhì)代謝的關(guān)系糖不能轉(zhuǎn)變成蛋白質(zhì),而蛋白質(zhì)可轉(zhuǎn)變成糖。糖代謝產(chǎn)生的-酮酸(丙酮酸、-酮戊二酸、草酰乙酸)氨基化和轉(zhuǎn)氨生成相應(yīng)的非必需氨基酸。蛋白質(zhì)分解的20種氨基酸(亮氨酸、賴(lài)氨酸除外),均可生成-酮酸轉(zhuǎn)變?yōu)樘恰?. 脂肪代謝和蛋白質(zhì)代謝的關(guān)系脂不能轉(zhuǎn)變?yōu)榈鞍踪|(zhì),而蛋白質(zhì)可轉(zhuǎn)變?yōu)橹?lèi)。因?yàn)橹舅徂D(zhuǎn)變成氨基酸僅限于谷氨酸,且需草酰乙酸存在(來(lái)源糖)。氨基酸代謝可生成乙酰CoA及合成磷脂的原料。24.乙酰輔酶A可進(jìn)入哪些代謝途徑?請(qǐng)列出?25.簡(jiǎn)述原核生物DNA聚
23、合酶的種類(lèi)和功能?1956年Kornberg等首先從大腸桿菌中發(fā)現(xiàn)DNA-pol,能催化脫氧核苷酸加到引物鏈的3-OH末端,引物延伸方向53。該酶需要的條件:4種dNTP、Mg2+、DNA模板(template)、引物(primer),此酶有三種活性:53聚合酶,53外切酶(切除引物和突變片段),35外切酶(校正活性)。70年代初又從大腸桿菌分離出DNA-pol和pol。pol無(wú)5 3 外切酶活性。pol是大腸桿菌主要的DNA聚合酶,其全酶由10種亞基組成,、組成核心酶,亞基具有5 3方向合成DNA的催化活性,亞基具有3 5核酸外切酶的活性,起校對(duì)作用。DNA pol為異二聚體,使DNA解開(kāi)的
24、雙鏈可同時(shí)進(jìn)行復(fù)制。這種復(fù)雜的亞基結(jié)構(gòu)使其具有更高的忠實(shí)性、協(xié)同性和持續(xù)性。26.嘌呤核苷酸和嘧啶核苷酸是如何合成的?嘌呤核苷酸合成反應(yīng)過(guò)程 :嘌呤核苷酸合成的起始物是核糖-5-磷酸(來(lái)自戊糖磷酸途徑),PRPP合成酶催化ATP的焦磷酸基團(tuán)轉(zhuǎn)移到核糖-5-磷酸的C-1,形成PRPP。從頭合成的最初產(chǎn)物是次黃嘌呤核苷酸(IMP),其他各種嘌呤核苷酸都是IMP衍生而來(lái)。(1)次黃嘌呤核苷酸的合成由PRPP到IMP的合成過(guò)程有十步反應(yīng),全過(guò)程含酰胺鍵合成、脫水環(huán)化、?;?、氨基化和裂解幾個(gè)類(lèi)型的反應(yīng):第一階段第5步反應(yīng)形成咪唑五元環(huán)。先是PRPP轉(zhuǎn)酰胺酶(關(guān)鍵酶)催化PRPP脫去焦磷酸并結(jié)合來(lái)自谷氨
25、酰胺的氨基,生成5-磷酸核糖胺(PRA)。然后由甘氨酰胺核苷酸合成酶、甘氨酰胺核苷酸轉(zhuǎn)甲?;浮⒓柞8拾彪吆塑账岷铣擅?、氨基脒唑核苷酸合成酶依次將甘氨酸、一碳單位等基團(tuán)連接上去形成5-氨基咪唑核苷酸(AIR)。第二階段的第10步反應(yīng)形成嘧啶六元環(huán)。涉及的酶有氨基脒唑核苷酸羧化酶、氨基脒唑琥珀基氨甲酰核苷酸合成酶、腺苷酸基琥珀酸裂解酶、氨基脒唑氨甲酰核苷酸轉(zhuǎn)甲酰基酶、IMP環(huán)化水解酶。(2)AMP和GMP是IMP的衍生物 由IMP合成AMP的兩步反應(yīng)類(lèi)似于IMP合成中的第(7)、(8)步反應(yīng)。腺苷酸基琥珀酸合成酶與腺苷酸基琥珀酸裂解酶催化,消耗GTP,反應(yīng)是可逆的。 IMP轉(zhuǎn)換成GMP在IMP脫
26、氫酶和GMP合成酶催化下完成,先氧化成XMP,再以谷氨酰胺上的酰胺基取代XMP中C-2上的氧,消耗ATP,反應(yīng)是不可逆的。嘌呤核苷酸補(bǔ)救合成外源的或降解產(chǎn)生的堿基和核苷,可被生物體重新利用。在哺乳動(dòng)物的某些組織及微生物中廣泛存在多種磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶,催化嘌呤堿和PRPP合成嘌呤核苷酸。腺嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶催化腺嘌呤與PRPP形成AMP和PPi(PPi水解,使得反應(yīng)不可逆)。次黃嘌呤-鳥(niǎo)嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(HGPRT)催化次黃嘌呤轉(zhuǎn)變?yōu)镮MP或鳥(niǎo)嘌呤轉(zhuǎn)變?yōu)镚MP,同時(shí)生成PPi(此酶的特性使低濃度的PRPP條件下,補(bǔ)救合成比從頭合成優(yōu)先發(fā)生)。嘧啶核苷酸的合成(一)從頭合成1 原料和部位 嘧啶環(huán)的
27、原料來(lái)自谷氨酰胺、天冬氨酸及CO2。主要在肝臟胞液中進(jìn)行。2. 合成過(guò)程與嘌呤核苷酸從頭合成不同的是先合成嘧啶環(huán),再與PRPP反應(yīng)形成最初產(chǎn)物尿嘧啶核苷酸(UMP),涉及6步反應(yīng)。(1)UMP的合成 氨甲酰磷酸合成酶(CPS-)催化谷氨酰胺、HCO3-和ATP生成氨甲酰磷酸(在真核生物中,有兩種氨甲酰磷酸合成酶,線粒體中的是CPS-I,是首先發(fā)現(xiàn)的,生成的氨甲酰磷酸用于合成尿素;胞液中的CPS-,催化嘧啶合成的第一步關(guān)鍵反應(yīng))。天冬氨酸轉(zhuǎn)氨甲酰酶催化氨甲酰磷酸結(jié)合天冬氨酸生成氨甲酰天冬氨酸;二氫乳清酸酶將其環(huán)化;二氫乳清酸脫氫酶進(jìn)一步氧化生成乳清酸;然后由乳清酸磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶催化乳清酸與PRP
28、P反應(yīng)生成乳清苷酸(OMP),乳清苷酸脫羧酶催化脫羧生成UMP。(2)CTP是由UMP合成的 UMP轉(zhuǎn)換成CTP涉及三步反應(yīng)。尿苷酸激酶催化ATP的-磷酸轉(zhuǎn)移給UMP形成UDP,核苷二磷酸激酶催化第二個(gè)ATP的-磷酸轉(zhuǎn)移給UDP生成UTP,最后 CTP合成酶催化來(lái)自谷氨酰胺的酰胺氮轉(zhuǎn)移至UTP的C-4,形成CTP。(3)脫氧核苷酸的合成在大多數(shù)生物中,ADP、GDP、CDP和UDP四種核苷二磷酸可在核苷二磷酸還原酶的催化下生成相應(yīng)的脫氧核苷二磷酸dNDP。NADPH為合成的還原力,電子從NADPH向還原酶轉(zhuǎn)移需要經(jīng)過(guò)黃素蛋白和硫氧還蛋白的轉(zhuǎn)遞。DNA合成需要的dTMP是由dUMP甲基化形成的。
29、首先dUDP轉(zhuǎn)換為dUMP(有多條途徑,一條是核苷單磷酸激酶催化dUDP與ADP反應(yīng)生成dUMP和ATP;另一條是dUDP先形成dUP,然后水解生成dUMP和PPi。dCMP經(jīng)脫氨也可形成dUMP)。dUMP轉(zhuǎn)換成dTMP的反應(yīng)是由胸苷酸合成酶催化的, N5,N10CH2-FH4提供一碳單位后,形成二氫葉酸,經(jīng)二氫葉酸還原酶催化又成為FH4,再在絲氨酸羥甲基轉(zhuǎn)移酶催化下,結(jié)合絲氨酸生成N5,N10 CH2-FH4。(二)補(bǔ)救合成催化UMP補(bǔ)救合成的酶類(lèi)有尿嘧啶磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶,尿苷磷酸化酶,尿苷激酶。催化的反應(yīng)如下:尿嘧啶 + PRPP UMP + PPi尿嘧啶 + R-1-P 尿苷+ Pi尿苷
30、 + ATP UMP + ADP27.比較DNA復(fù)制和RNA 轉(zhuǎn)錄的主要區(qū)別?28.說(shuō)明鳥(niǎo)氨酸循環(huán)的主要過(guò)程及生理意義?1)部位:肝臟線粒體和胞液。(2)機(jī)理:1932年,德國(guó)學(xué)者Krebs和Hensleit根據(jù)實(shí)驗(yàn)研究,提出了鳥(niǎo)氨酸循環(huán)(ornithine cycle)合成尿素的學(xué)說(shuō),這比三羧酸循環(huán)發(fā)現(xiàn)早5年。實(shí)驗(yàn)的根據(jù)是:將鼠肝切片置于胺鹽和重碳酸鹽介質(zhì)中,有氧條件下保溫?cái)?shù)小時(shí),發(fā)現(xiàn)胺鹽含量減少,而尿素增多。當(dāng)加入少量鳥(niǎo)氨酸、瓜氨酸或精氨酸能大大加速尿素的合成。肝臟又含有精氨酸酶,可催化精氨酸水解生成鳥(niǎo)氨酸和尿素。于是一個(gè)循環(huán)機(jī)制就出現(xiàn)。(3)反應(yīng)過(guò)程:有5步反應(yīng),前2步在肝細(xì)胞線粒體,其
31、他3步在胞質(zhì)溶液中進(jìn)行。尿素循環(huán)本身是四步酶促反應(yīng)組成。氨甲酰磷酸合成酶(CPS-)激活氨結(jié)合CO2形成氨甲酰磷酸。鳥(niǎo)氨酸轉(zhuǎn)氨甲酰酶催化氨甲酰磷酸轉(zhuǎn)移到鳥(niǎo)氨酸上生成瓜氨酸。精氨琥珀酸合成酶催化瓜氨酸與天冬氨酸縮合生成精氨琥珀酸。這是尿素中第2個(gè)氮原子的來(lái)源。精氨琥珀酸酶催化精氨琥珀酸裂解為精氨酸和延胡索酸(后者可進(jìn)入三羧酸循環(huán),并轉(zhuǎn)變?yōu)椴蒗R宜幔D(zhuǎn)氨后又形成天冬氨酸)。精氨酸酶水解精氨酸生成尿素,并重新產(chǎn)生鳥(niǎo)氨酸,進(jìn)入第二輪循環(huán)??偡磻?yīng)式:NH3 + HCO3- +天冬氨酸 +3ATP CO( N H 2)2 + 延胡索酸 + 2ADP+2Pi+AMP+PPi尿素的合成是一個(gè)耗能的過(guò)程,循環(huán)中
32、使用了4個(gè)高能磷酸鍵(3分子ATP水解為2ADP及Pi、一個(gè)AMP和PPi,后者隨之水解為Pi)。尿素循環(huán)產(chǎn)生的延胡索酸可進(jìn)入TCA,精氨酸與甘氨酸縮合形成瓜基乙酸,進(jìn)而合成肌酸磷酸(肌肉中的一種高能倉(cāng)庫(kù))。(4)調(diào)節(jié):氨甲酰磷酸合成酶是變構(gòu)酶,乙酰谷氨酸(AGA)是該酶的激活劑,而精氨酸又是AGA合成酶的激活劑,因此,精氨酸濃度增高時(shí),尿素生成加速。精氨琥珀酸合成酶活性最低,是限速酶29.不飽和脂肪酸是如何進(jìn)行分解代謝的?30.請(qǐng)解釋不飽和脂肪酸和飽和脂肪酸的分解代謝途徑有什么差異?31.脂肪酸分解和合成的過(guò)程和作用部位有何不同?氧化分解:(一)脂肪酸的活化 在胞液中FFA通過(guò)與CoA酯化被
33、激活,催化該反應(yīng)的酶是脂酰CoA合成酶,需ATP、Mg2+參與。反應(yīng)產(chǎn)生的PPi立即被焦磷酸酶水解,阻止了逆反應(yīng),所以1分子FFA的活化實(shí)際上消耗2個(gè)高能磷酸鍵。 RCOOH+ATP+CoASHRCOSCoA+AMP+PPi(二)脂酰CoA進(jìn)入線粒體脂肪酸的氧化是在線粒體內(nèi)進(jìn)行的, 而脂酰CoA不能自由通過(guò)線粒體內(nèi)膜進(jìn)入基質(zhì), 需耍通過(guò)線粒體內(nèi)膜上肉毒堿轉(zhuǎn)運(yùn)才能將脂?;鶐刖€粒體。內(nèi)膜兩側(cè)的脂酰CoA肉毒堿酰基轉(zhuǎn)移酶、(同工酶)催化完成脂?;霓D(zhuǎn)運(yùn)和肉毒堿的釋放。酶是FFA氧化分解的主要限速酶。(三)脂酰CoA的-氧化脂酰CoA氧化生成乙酰CoA涉及四個(gè)基本反應(yīng):第一次氧化反應(yīng)、水化反應(yīng)、第二
34、次氧化反應(yīng)和硫解反應(yīng)。第一步由脂酰CoA脫氫酶催化脫氫生成反-2-烯脂酰CoA和 FADH2。第二步由反-2-烯脂酰CoA水化酶催化加水生成L-(+)-羥脂酰CoA。第三步由L-(+)-羥脂酰CoA脫氫酶催化生成-酮脂酰CoA和NADH+H+。第四步由硫解酶作用底物的-與-C間斷裂,CoASH參與,生成1分子乙酰CoA和比原來(lái)少2個(gè)C的脂酰CoA。然后再一輪-氧化,如此循環(huán)反應(yīng)。(四)脂肪酸氧化的能量計(jì)算1分子軟脂酸(16C)經(jīng)7次-氧化可生成8個(gè)乙酰CoA、7個(gè)NADH+H+、7個(gè)FADH2。每個(gè)乙酰CoA進(jìn)入TCA循環(huán)生成3個(gè)NADH+H+、1個(gè)FADH2、1個(gè)GTP,并釋放2分子CO2。
35、總反應(yīng)方程式是:軟脂酰CoA+23 O2+131Pi+131ADPCoASH+16 CO2+123H2O+131ATP凈生成的ATP數(shù):12×83×72×72 =129。 (脂肪酸活化消耗2個(gè)高能磷酸鍵,相當(dāng)消耗2個(gè)ATP)當(dāng)以脂肪為能源時(shí),生物體還獲得大量的水。駱駝的駝峰是儲(chǔ)存脂的“倉(cāng)庫(kù)”,既提供能量,又提供所需的水。(五)脂肪酸氧化的其他途徑1. 奇數(shù)碳原子脂酸的氧化 人體含極少量奇數(shù)碳脂肪酸,而許多植物、海洋生物、石油酵母等含一定量的奇數(shù)碳脂肪酸。其-氧化除生成乙酰CoA外,還生成1分子丙酰CoA,后者可通過(guò)-羧化酶及異構(gòu)酶的作用生成琥珀酰CoA,經(jīng)TCA途
36、徑徹底氧化。2. 不飽和脂肪酸的氧化機(jī)體中脂酸約一半以上是不飽和脂肪酸,其中的雙鍵均為順式(cis)構(gòu)型,不能被烯脂酰CoA水化酶作用(該酶催化的是反式構(gòu)型雙鍵的加水),所以需要異構(gòu)酶和還原酶才能使一般不飽和脂肪酸的氧化進(jìn)行下去。如油酸是十八碳一烯酸(cis-9),細(xì)胞質(zhì)中的油酸同樣先活化生成油酰CoA,經(jīng)轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)換成線粒體基質(zhì)中的油酰CoA,經(jīng)三輪-氧化生成3分子乙酰CoA和cis-3-十二碳烯脂酰CoA,后者經(jīng)異構(gòu)酶催化為trans-2-十二碳烯脂酰CoA,就可由烯脂酰CoA水化酶作用生成L-羥脂酰CoA,再經(jīng)五輪-氧化生成6分子乙酰CoA,總計(jì)9分子乙酰CoA。多不飽和脂肪酸的氧化還需一
37、個(gè)特殊的還原酶。脂肪酸的生物合成合成脂肪酸的酶系主要在胞漿,而糖代謝提供的乙酰CoA原料又在線粒體生成,所以乙酰CoA需通過(guò)轉(zhuǎn)運(yùn)。合成脂肪酸的過(guò)程不同于-氧化的逆過(guò)程,是由7種酶蛋白和?;d體蛋白(ACP)組成的多酶復(fù)合體完成,合成的產(chǎn)物是軟脂酸。碳鏈延長(zhǎng)是在線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的2個(gè)不同的酶系催化下進(jìn)行的。(一)軟脂酸的生物合成1. 乙酰CoA轉(zhuǎn)運(yùn)至胞漿(檸檬酸-丙酮酸循環(huán))。 乙酰CoA與草酰乙酸在線粒體先縮合生成檸檬酸,經(jīng)內(nèi)膜上的載體轉(zhuǎn)運(yùn)入胞漿,在ATP-檸檬酸裂解酶作用下生成乙酰CoA與草酰乙酸,前者參與脂肪酸的合成,后者可經(jīng)蘋(píng)果酸脫氫酶和蘋(píng)果酸酶催化轉(zhuǎn)變?yōu)楸嵩龠M(jìn)入線粒體,也可在載體作
38、用下,經(jīng)蘋(píng)果酸直接進(jìn)入線粒體,繼而轉(zhuǎn)變?yōu)椴蒗R宜帷?. 乙酰CoA羧化生成丙二酸單酰CoA乙酰CoA羧化酶催化,ATP、生物素、Mg2+參與,總反應(yīng):乙酰CoA+ATP+HCO3 丙二酸單酰CoA+ADP+PiATP提供能量,生物素起轉(zhuǎn)移羧基的作用,乙酰CoA羧化酶是FA合成的限速酶(變構(gòu)酶),變構(gòu)劑檸檬酸與其變構(gòu)部位結(jié)合可激活此酶的活性。3. 乙?;捅釂熙;霓D(zhuǎn)移(負(fù)載)脂肪酸合成的酰基載體不是CoA,而是?;d體蛋白。在乙酰CoA-ACP轉(zhuǎn)?;负捅釂熙oA-ACP轉(zhuǎn)?;傅拇呋?,乙?;捅釂熙;晦D(zhuǎn)移至ACP上,生成乙酰-ACP和丙二酸單酰-ACP。4. 脂肪酸合成酶系
39、催化進(jìn)行縮合、還原、脫水、還原反應(yīng)。(1)酮?;?ACP合成酶接受乙酰-ACP的乙?;尫臜S-ACP,并催化乙?;D(zhuǎn)移到丙二酸單酰-ACP上生成乙酰乙酰-ACP。(2)乙酰乙酰-ACP中的-酮基轉(zhuǎn)換為醇,生成-羥丁酰-ACP。反應(yīng)由酮酰基-ACP還原酶催化,NADPH為酶的輔酶。(3)-羥丁酰-ACP經(jīng)脫水酶催化生成帶雙鍵的反式丁烯酰-ACP。(4)反式丁烯酰-ACP還原為四碳的丁酰-ACP。反應(yīng)是由烯脂酰-ACP還原酶催化, NADPH為酶的輔酶。如此每循環(huán)一次,有一個(gè)新的丙二酸單酰CoA參與合成(貢獻(xiàn)二碳單位),7次循環(huán),生成16C的軟脂酰-ACP,經(jīng)硫解酶水解生成軟脂酸和HS-ACP
40、。(二)脂肪酸碳鏈的延長(zhǎng)植物和動(dòng)物中脂肪酸合成酶的最常見(jiàn)的產(chǎn)物是軟脂酸。其它各種FA的合成需要肝細(xì)胞的線粒體或內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的一些酶。在線粒體,乙酰CoA提供碳源,NADPH提供還原當(dāng)量,循-氧化逆過(guò)程,前3步反應(yīng)相同,第4步反應(yīng)由烯脂酰CoA還原酶催化,輔酶是NADPH而不是FAD,通過(guò)這種方式,每一輪可延長(zhǎng)2個(gè)C,一般可延長(zhǎng)碳鏈至24或26C,以18C的硬脂酸為主。在內(nèi)質(zhì)網(wǎng),丙二酸單酰CoA提供碳源,NADPH供氫,反應(yīng)過(guò)程與軟脂酸合成相似,不同的是CoASH代替ACP作為?;d體,一般可延長(zhǎng)碳鏈至22或24C,也以18C的硬脂酸為主。(三)不飽和脂肪酸的合成動(dòng)物細(xì)胞含有催化不飽和FA雙鍵形成的
41、去飽和酶,可催化遠(yuǎn)離FA羧基端的第九個(gè)碳的去飽和。但九碳以上的去飽和則只有植物中的去飽和酶能催化。如亞油酸(18:2 9,12)、亞麻酸(18:39 ,12 ,15)、花生四烯酸(20:45 ,8 ,11,14)是動(dòng)物所需的,但動(dòng)物不能合成,是必須由食物供給的必需脂肪酸。當(dāng)人體缺乏必需脂肪酸時(shí),會(huì)出現(xiàn)生長(zhǎng)緩慢、抵抗力下降、皮膚炎和毛發(fā)稀疏等癥狀。亞麻酸和花生四烯酸只能從亞油酸轉(zhuǎn)化生成,花生四烯酸又是合成前列腺素(PG)及血栓素等重要生理活性物質(zhì)的前體。(四)脂肪酸代謝的調(diào)控動(dòng)物的FA代謝受激素的調(diào)控,主要調(diào)節(jié)物是胰島素,腎上腺素和胰高血糖素的作用與胰島素相反。 32.舉例說(shuō)明氨基酸的降解通常包
42、括哪些方式?脫氨基作用,碳骨架的代謝轉(zhuǎn)變33.什么是翻譯?密碼子有哪些特點(diǎn)?基因表達(dá)包括細(xì)胞的遺傳信息從DNA到RNA,再由RNA到蛋白質(zhì)。前者稱(chēng)為轉(zhuǎn)錄,后者稱(chēng)為翻譯。遺傳密碼特點(diǎn):連續(xù)性,指密碼子必須按53方向三個(gè)一組讀碼框往下閱讀,無(wú)標(biāo)點(diǎn)、不重疊、不跳格。正確的讀碼框的確立是由核糖體識(shí)別在編碼序列開(kāi)頭處的起始密碼AUG;簡(jiǎn)并性,是指同一種氨基酸有兩個(gè)或更多密碼子的現(xiàn)象。編碼同一氨基酸的密碼子稱(chēng)為同義密碼子,通常只在第3位堿基上不同,這樣可減少有害突變。密碼子第3位堿基與tRNA反密碼子不嚴(yán)格遵從堿基配對(duì)規(guī)律(擺動(dòng)堿基配對(duì)),如tRNA反密碼子第一位的I(由A轉(zhuǎn)變而來(lái))可與mRNA密碼子第3
43、位堿基U、C、A形成配對(duì),U可對(duì)應(yīng)A、G,因而密碼子第3個(gè)位置又稱(chēng)擺動(dòng)位置;通用性,即所有生物基本共用同一套遺傳密碼。線粒體以及少數(shù)生物基因組的密碼子有變異(如在酵母、哺乳動(dòng)物、果蠅中,AUA = Met而非Ile,UGA=Trp而非終止碼。)34.RNA轉(zhuǎn)錄過(guò)程為起始點(diǎn)的識(shí)別、起始、延伸和終止,請(qǐng)簡(jiǎn)述轉(zhuǎn)錄的識(shí)別和起始。啟動(dòng)子(promoter)是指RNA聚合酶識(shí)別、結(jié)合并開(kāi)始轉(zhuǎn)錄的一段DNA序列。原核啟動(dòng)子發(fā)現(xiàn)有兩個(gè)重要序列,一個(gè)位于轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游10個(gè)核苷酸處(習(xí)慣上被轉(zhuǎn)錄為RNA的DNA模板上的第一個(gè)核苷酸指定為+1,即轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)),另一個(gè)位于上游35個(gè)核苷酸處,它們分別稱(chēng)為10序列
44、和35序列。10序列富含TATAAT,稱(chēng)之TATA box或Pribnow box。該序列富含AT,維持雙鏈結(jié)合的氫鍵相對(duì)較弱,易發(fā)生解鏈,是RNA聚合酶的核心酶結(jié)合部位。35序列富含TTGACA,是RNA聚合酶亞基的識(shí)別部位。實(shí)驗(yàn)可知原核生物RNA聚合酶作用的區(qū)域?yàn)?0+20。在轉(zhuǎn)錄起始階段,RNA聚合酶識(shí)別將拷貝的基因的上游DNA(即啟動(dòng)子),局部解開(kāi)雙鏈(特別是TATA box處,約17個(gè)bp),當(dāng)酶移至轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)(+1處),催化按模板鏈堿基序依次排列的頭兩個(gè)三磷酸核苷聚合,生成RNA鏈的第一個(gè)3,5-磷酸二酯鍵,第一個(gè)核苷酸一定是三磷酸嘌呤核苷酸,而且pppG較pppA又占絕對(duì)優(yōu)勢(shì),5-端的pppG這一末端結(jié)構(gòu)一旦生成,一直保持到轉(zhuǎn)錄完成。35.簡(jiǎn)述原核細(xì)胞的RNA聚合酶組成?原核生物中所有的RNA都由一種RNA聚合酶合成。大腸桿菌RNA- pol分子量為460kDa,由5個(gè)亞基組成,分別為2、。2稱(chēng)為核心酶,只能使已開(kāi)始合成的RNA鏈延長(zhǎng),不具有起始合成RNA的能力,因子有識(shí)別轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)的作用。啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄只有全酶與模板DNA啟動(dòng)子結(jié)合才發(fā)揮作用。真核生物RNA- pol有多種,分子量大致都在500kDa左右。DDRP分布在核仁,合成rRNA前體DDRP分布在核質(zhì),合成mRNA,hnRNADDRP分布在核質(zhì),合成tRNA,5SrRNA,
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