馬松三色染色原理masson

1、Masson染色(2010-09-02 14:43:20轉(zhuǎn)載標(biāo)簽:雜談分類:實(shí)驗(yàn)日志masson 染色原理Masson三色法(根據(jù)Masson,1929試劑配制(一 Weigert氏鐵蘇木素液(見苦味酸酸性品紅法(二 麗春紅酸性品紅液麗春紅(Ponceau 2R 0.7g酸性品紅(acid fuchsin 0.3g蒸餾水 99ml冰醋酸(glacial acetic acid 1ml(三 1%磷鉬酸水溶液磷鉬酸(phosphomolybdic acid 1g蒸餾水加至 100ml(四 2%苯胺藍(lán)液苯胺藍(lán)(aniline blue 2g冰醋酸(glacial acetic acid 2ml蒸餾水

2、加至 100ml(五 亮綠液亮綠(light green 1g蒸餾水 99ml冰醋酸(glacial acetic acid 1ml操作方法1. 組織固定于Bouin氏液或Zenker氏液,流水沖洗一晚,常規(guī)脫水包埋。2. 切片脫蠟至水。如用Zenker氏液固定者,應(yīng)進(jìn)行除汞處理,其步驟如下:(1 切片脫蠟后于0.5%碘酒精作用10分鐘。(2 稍水洗(3 5%硫代硫酸鈉作用5分鐘。(4 流水沖洗10分鐘3. Weiger氏鐵蘇木素染5-10分鐘。4. 流水稍洗。5. 1%鹽酸酒精分化。6. 流水沖洗數(shù)分鐘。7. 麗春紅酸性品紅液染5-10分鐘。8. 蒸餾水稍沖洗。9. 1%磷鉬酸水溶液處理約5

3、分鐘。10.不用水洗,直接用苯胺藍(lán)液或綠液復(fù)染5分鐘。11.1%冰醋酸處理1分鐘。12.95%酒精脫水多次。13.無水酒精脫水,二甲苯透明,中性樹膠封固結(jié)果:膠原纖維雖藍(lán)色(用苯膠藍(lán)液復(fù)染或綠色(用亮綠復(fù)染。胞質(zhì)、肌纖維和紅細(xì)胞紅色。胞核藍(lán)褐色。注意事項(xiàng):1.組織用Bouin氏液或Zenker氏液固定為佳。如已用10%甲酸液固定,切片可在脫蠟至水后.再放入Bouin氏液作用一晚或置37。C溫箱內(nèi)1-2小時(shí),然后流水沖洗切片至黃色消失再進(jìn)行染色。2.鐵蘇木素染核(見苦味酸一酸性品紅法。3.如沒有麗春紅染料,可把酸性品紅加至1克來配制。4.用1%磷鉬酸處理時(shí)可在鏡下控制.見肌纖維呈紅色,膠原纖維呈

4、淡紅色即可。染色原理:上面介紹的膠原纖維染色如苦味酸-酸性品紅法和三色染色法,都是利用兩種或三種陰離子染料混合一起或先后作用而完成鑒別染色的。Van Gieson氏染色中,為什么膠原纖維呈紅色(被酸性品紅所染,肌纖維呈黃色(被苦味酸所染.而Masson氏染色時(shí)膠原纖維呈藍(lán)色(被苯胺藍(lán)所染,肌纖維呈紅色(被酸性品紅和麗春紅所染,這與陰離子染料分子的大小和組織的滲透性有關(guān)。 組織的滲透性(Permeability,取決于組織的結(jié)構(gòu)密度。如果細(xì)致地觀察,會(huì)發(fā)現(xiàn)組織和細(xì)胞成分都是多孔的構(gòu)造。不同的組織和細(xì)胞成分,它們的孔隙大小是不同的。孔隙的大小,決定了組織的滲透性。如孔隙小,組織結(jié)構(gòu)致密,滲透性低;

5、孔隙寬,組織結(jié)構(gòu)疏松,滲透性高。如已固定的組織用一系列陰離子水溶性染料先后或混合染色,則可發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞被最小分子的陰離子染料著染.肌纖維與胞質(zhì)被中等大小的陰離子染料著染,而膠原纖維則被大分子的陰離子染料著染。由此說明了紅細(xì)胞對(duì)陰離子染料的滲透性最小,肌纖維與胞質(zhì)次之,而膠原纖維具有最大的滲透性。根據(jù)組織不同的滲透性能,選擇分子大小不同的陰離子染料進(jìn)行染色,便可把不同組織成分顯示出來.染料分子的大小,主要由其分子量來體現(xiàn)。小分子量者易于穿透結(jié)構(gòu)致密、滲透性低的組織,而大分子最者則只能進(jìn)入結(jié)構(gòu)疏松,滲透性高的組織。一般來說,結(jié)構(gòu)疏松,滲透性高的組織多選擇大分子染料,而結(jié)構(gòu)致密,滲透性低的組織多選擇小

6、分子染料。常用作膠原纖維染色的幾種陰離子染料的分子量由小到大分別是:苦味酸(黃色,分子量,229.11橙黃G(橙黃色,分子量452麗春紅(紅色,j女子量,480.42酸性品紅(紅色,分子量,585.53苯胺藍(lán)(藍(lán)色,分子量737.72亮綠(綠色,分子量792.72甲基藍(lán)(藍(lán)色,分子量,799因此,在Van Gieson氏法中,苦味酸染紅細(xì)胞和肌纖維,酸性品紅染膠原纖維,而在Masson氏法中,酸性品紅或麗春紅染肌纖維,而苯胺藍(lán)或亮綠染膠原纖維。染色反應(yīng)是一個(gè)很復(fù)雜的過程,膠原纖維染色除上述兩個(gè)方面外,不排除電子吸附和排斥作用。在實(shí)際染色中,兩種陰離子染料的比例也是很重要的。在Van Gieso

7、n氏染色,苦味酸與酸性品紅濃的比例若不恰當(dāng),如苦味酸的濃度太高,小分子量染料苦味酸占優(yōu)勢(shì),則結(jié)構(gòu)致密的胞漿,肌纖維和結(jié)構(gòu)疏松的膠原纖維都會(huì)被苦味酸所著染。這點(diǎn)是要注意的。應(yīng)用:膠原纖維和肌纖維的鑒別染色是病理組織制片的一個(gè)重要方法,它的染色對(duì)病理診斷很有幫助。 1.來源于間胚葉的腫瘤,如纖維瘤、平滑肌瘤、橫紋肌瘤、神經(jīng)纖維瘤甚至它們的肉瘤等都產(chǎn)生一定的纖維,這些纖維在H-E染色中都染成紅色而難以區(qū)別。通過用上述方法染色,一般可區(qū)分出該腫瘤組織是膠原纖維源性,還是肌源性,或者是神經(jīng)纖維源性。對(duì)于后者,有時(shí)還需加染磷鎢酸蘇木素來協(xié)助診斷。備注1 Bouin氏液是常用的混合固定液配方: 苦味酸飽和液

8、(1.22%75ml 福爾馬林25ml 冰醋酸5ml 此液一般在臨床用時(shí)配制,對(duì)皮膚及肌腱有軟化作用。2 苦味酸-酸性品紅法一Weigert氏鐵蘇木素液甲液 蘇木素 1g無水酒精(或 95%酒精 100ml乙液 29%三氯化鐵水溶液 4ml蒸餾水 95ml (30%三氯化鐵溶液則為100ml鹽酸 1ml臨用時(shí),取甲、乙液等量混合即可應(yīng)用?；旌蠒r(shí)應(yīng)將乙液加人甲液內(nèi),染液呈紫黑色。鐵蘇木素不能象明礬蘇木素一樣配制后可放置貯存?zhèn)溆?因鐵與染色劑的色素根會(huì)化合生成不溶性沉淀,所以鐵作媒染液時(shí),必須與染液分別配制和分別保存,染片時(shí)臨時(shí)混合應(yīng)用。由于這是一種鐵蘇木素,它將胞核染成黑色。能抵抗在對(duì)比染色液中所含分色劑的脫色作用,且不會(huì)被光線退色,因此比鉀礬蘇木素染色較為持久。二 Van Gieson氏染液A液:1%酸性品紅水溶液B液:苦味酸飽和水溶液(約1.2%A、 B兩夜分瓶盛放。臨用前取A液1份,B液9份混合后使用操作方法1 組織固定于10%甲醛液,常規(guī)脫水包埋2 切片脫蠟至水3 用Weigert氏鐵蘇木