實驗五衛(wèi)生細(xì)菌的檢驗細(xì)菌總數(shù)的測定

1、實驗五：衛(wèi)生細(xì)菌的檢驗細(xì)菌總數(shù)的測定實驗?zāi)康呐c要求：（1） 學(xué)習(xí)并掌握水體中細(xì)菌總數(shù)的檢驗方法、檢驗的原理、檢驗的依據(jù)、數(shù)據(jù)處理和報告方法。（2） 強化水體細(xì)菌總數(shù)檢驗的衛(wèi)生意義知識。二、基本原理本實驗應(yīng)用平板計數(shù)技術(shù)測定水中細(xì)菌總數(shù)。由于水中細(xì)菌種類繁多，它們對營養(yǎng)和其他生長條件的要求差別很大，不可能找到一種培養(yǎng)基在一種條件下，使水中所有的細(xì)菌均能生長繁殖，因此，以一定的培養(yǎng)基平板上生長出來的菌落，計算出來的水中細(xì)菌總數(shù)僅是一種近似值。目前一般是采用普通牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基。三、器材牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，滅菌水；滅菌三角燒瓶，滅菌的帶玻璃塞瓶，滅菌培養(yǎng)皿，滅菌吸管，滅菌試管，培養(yǎng)箱等。四

2、、操作步驟1水樣的采取（1）自來水先將自來水龍頭用火焰燒灼3分鐘滅菌，再開放水龍頭使水流5分鐘后，以滅菌三角燒瓶接取水樣，以待分析。（2）池水、河水或湖水應(yīng)取距水面1015cm的深層水樣，先將滅菌的帶玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻轉(zhuǎn)過來，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛滿后，將瓶塞蓋好，再從水中取出，最好立即檢查，否則需放入冰箱中保存。2細(xì)菌總數(shù)測定（1）自來水（a）用滅菌吸管吸取1ml水樣，注入滅菌培養(yǎng)皿中。共做兩個平皿。（b）分別傾注約15ml已溶化并冷卻到45左右的肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，并立即在桌上作平面旋搖，使水樣與培養(yǎng)基充分混勻。（c）另取一空的滅菌培養(yǎng)皿，傾注肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基1

3、5ml，作空白對照。（d）培養(yǎng)基凝固后，倒置于37溫箱中，培養(yǎng)24小時，進(jìn)行菌落計數(shù)。 兩個平板的平均菌落數(shù)即為1ml水樣的細(xì)菌總數(shù)。（2）池水、河水或湖水等（a）稀釋水樣取3個滅菌空試管，分別加入9ml滅菌水。取1ml水樣注入第一管9ml滅菌水內(nèi)，搖勻，再自第一管取1ml至下一管滅菌水內(nèi)，如此稀釋到第三管，稀釋度分別為10-1、10-2與10-3。稀釋倍數(shù)看水樣污濁程度而定，以培養(yǎng)后平板的菌落數(shù)在30300個之間的稀釋度最為合適，若三個稀釋度的菌數(shù)均多到無法計數(shù)或少到無法計數(shù)，則需繼續(xù)稀釋或減小稀釋倍數(shù)。一般中等污穢水樣，取10-1、10-2、10-3三個連續(xù)稀釋度，污穢嚴(yán)重的取10-2、1

4、0-3、10-4三個連續(xù)稀釋度。（b）自最后三個稀釋度的試管中各取1ml稀釋水加入空的滅菌培養(yǎng)皿中，每一稀釋度做兩個培養(yǎng)皿。（c）各傾注15ml已溶化并冷卻至45左右的肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，立即放在桌上搖勻。（d）凝固后倒置于37培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。3菌落計數(shù)方法（1）先計算相同稀釋度的平均菌落數(shù)。若其中一個培養(yǎng)皿有較大片狀菌苔生長時，則不應(yīng)采用，而應(yīng)以無片狀菌苔生長的培養(yǎng)皿作為該稀釋度的平均菌落數(shù)。若片狀菌苔的大小不到培養(yǎng)皿的一半，而其余的一半菌落分布又很均勻時，則可將此一半的菌落數(shù)乘2以代表全培養(yǎng)皿的菌落數(shù)，然后再計算該稀釋度的平均菌落數(shù)。（2）首先選擇平均菌落數(shù)在30300之間的，當(dāng)只有一個稀釋度的平均菌落數(shù)符合此范圍時，則以該平均菌落數(shù)乘其稀釋倍數(shù)即為該水樣的細(xì)菌總數(shù) 。（3）若有兩個稀釋度的平均菌落數(shù)均在30300之間，則按兩者菌落總數(shù)之比值來決定。若其比值小于2，應(yīng)采取兩者的平均數(shù)；若大于2，則取其中較小的菌落總數(shù)。（4）若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300，則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)。（5）若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于3