抗壞血酸對(duì)細(xì)菌脂多糖引起發(fā)育毒性保護(hù)作用

1、抗壞血酸對(duì)細(xì)菌脂多糖引起發(fā)育毒性保護(hù)作用         07-08-10 11:37:00     作者：陳遠(yuǎn)華，徐德祥，趙磊    編輯：studa20【摘要】  目的 研究抗壞血酸(AA)對(duì)細(xì)菌脂多糖(LPS)引起宮內(nèi)胎兒死亡(IUFD)、生長(zhǎng)發(fā)育遲緩(IUGR)和骨骼發(fā)育遲緩的保護(hù)作用。方法 實(shí)驗(yàn)1：LPS組小鼠于妊娠第1517d經(jīng)腹腔注射LPS,LPS+AA組在LPS處理前和/或處理后經(jīng)腹腔注射給予AA，對(duì)照組給予等

2、容量的生理鹽水或AA。所有孕鼠于妊娠第18d處死。實(shí)驗(yàn)2：LPS組小鼠于妊娠第16d注射LPS，LPS+AA組在LPS處理前和/或處理后經(jīng)腹腔注射給予AA，對(duì)照組給予等容量的生理鹽水或AA。LPS處理后6h處死孕鼠。結(jié)果 LPS+AA預(yù)處理組平均每窩死胎數(shù)明顯低于單純LPS處理組，LPS+AA后和預(yù)+后處理組平均每窩死胎數(shù)與單純LPS組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；AA預(yù)、后和預(yù)+后處理均顯著抑制LPS引起IUGR和枕骨骨化不全。AA預(yù)和后處理均顯著抑制LPS引起母肝、胎肝和胎盤(pán)組織脂質(zhì)過(guò)氧化，但AA預(yù)處理的作用強(qiáng)于后處理。結(jié)論 AA預(yù)處理通過(guò)抑制LPS引起的氧化應(yīng)激，預(yù)防LPS引起IUFD、IUGR

3、和骨骼發(fā)育遲緩；AA后處理和預(yù)+后處理對(duì)抗LPS引起IUGR和骨骼發(fā)育遲緩，但對(duì)LPS引起的IUFD無(wú)明顯保護(hù)作用。 【關(guān)鍵詞】  細(xì)菌脂多糖      細(xì)菌脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)是革蘭陰性細(xì)菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)中的類脂多糖，廣泛存在于人和動(dòng)物的消化道內(nèi)1。LPS引起的胚胎吸收、宮內(nèi)胎兒死亡(intrauterine fetal death,IUFD)和早產(chǎn)已經(jīng)得到證實(shí)2。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，母鼠妊娠晚期接觸LPS引起胎兒宮內(nèi)生長(zhǎng)發(fā)育遲緩(intrauterine growth retardation，IUG

4、R)和骨骼發(fā)育遲緩，活性氧(ROS)可能參與了LPS引起的胚胎發(fā)育毒性3,4?？箟难?AA)是重要的水溶性抗氧化劑，本文重點(diǎn)探討AA對(duì)LPS引起小鼠IUFD、IUGR和骨骼發(fā)育遲緩的保護(hù)作用。1   材料與方法11   試劑   細(xì)菌脂多糖(EschericlSia coli LPS,serotyoe 0127：B8)和抗壞血酸(ascorbic acid，AA)(美國(guó)Sigma公司)。12   動(dòng)物及實(shí)驗(yàn)方法   清潔級(jí)ICR小鼠(78周，雄性3032g，雌性2628g)(北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)

5、物公司)。實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性喂養(yǎng)1周(自由飲食，晝夜均衡，溫度2025，濕度(50±5)%。交配時(shí)，按24(雄雌)于21：00合籠，次日7：00檢查雌鼠陰栓，查到陰栓者定為妊娠第0d。分2個(gè)實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)1：孕鼠隨機(jī)分為單純LPS處理組，LPS+AA預(yù)、后和預(yù)+后處理組及對(duì)照組，所有孕鼠均于妊娠第1517d給藥。單純LPS處理組僅注射LPS(75g/kg，ip)；LPS+AA預(yù)處理組孕鼠注射LPS前05h給予AA(500mg/kg，ip)；LPS+AA后處理組孕鼠注射LPS后3h給予AA(500mg/kg,ip)；LPS+AA預(yù)+后處理組孕鼠注射LPS前05h和后3h各給予500mg/kg的A

6、A；對(duì)照組給予等容量生理鹽水或AA。所有孕鼠于妊娠第18d處死，記錄活胎、死胎、吸收胎數(shù)和流產(chǎn)數(shù)，秤量活胎體重，測(cè)量身長(zhǎng)和尾長(zhǎng)，并評(píng)價(jià)活胎鼠骨骼發(fā)育情況。實(shí)驗(yàn)2：分組同實(shí)驗(yàn)1，每組11只，所有孕鼠均于妊娠第16d給藥。單純LPS組僅注射LPS(75g/kg，ip)；LPS+AA預(yù)處理組孕鼠注射LPS前05h給予AA(500mg/kg，ip)；LPS+AA后處理組孕鼠注射LPS后3h給予AA(500mg/kg，ip)；LPS+AA預(yù)+后處理組孕鼠注射LPS前05h和后3h各給予500mg/kg的AA；對(duì)照組給予等容量生理鹽水或AA。LPS處理后6h處死孕鼠，取母肝、胎肝和胎盤(pán)，檢測(cè)丙二醛(MDA

7、)和谷胱甘肽(GSH)水平。13   氧化應(yīng)激水平測(cè)定   用Griffith法5測(cè)定組織GSH含量。通過(guò)測(cè)定脂質(zhì)過(guò)氧化的羰基產(chǎn)物MDA含量反映組織的氧化應(yīng)激水平，MDA含量測(cè)定采用硫代巴比妥酸反應(yīng)底物(TBARS)比色法8。蛋白含量用Lowry法7測(cè)定。14   統(tǒng)計(jì)分析   采用SPSS 120統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析和兩樣本t檢驗(yàn)。2   結(jié)果21   AA對(duì)LPS引起IUFD的影響   單純LPS處理組平均每窩死胎數(shù)顯著高于對(duì)照組(01±11

8、)與(82±20)，P<001，LPS+AA預(yù)處理組平均每窩死胎數(shù)顯著低于單純LPS處理組(31±45)與(82±20)，P<001。LPS+AA后處理組(54±63)和預(yù)+后處理組(62±52)平均每窩死胎數(shù)與單純LPS處理組(82±20)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>005)。22   AA對(duì)LPS引起骨骼發(fā)育遲緩的影響(表1)   母鼠妊娠晚期給予LPS引起胎鼠枕骨、胸骨、尾椎骨、前指骨和后掌(趾)骨骨化不全；AA預(yù)處理、后處理和預(yù)+后處理均顯著抑制LPS引起枕骨、后掌(趾)

9、骨骨化不全。23   AA對(duì)LPS引起IUGR的影響(表2)   母鼠妊娠晚期給予LPS顯著降低活胎體重、身長(zhǎng)和尾長(zhǎng)，AA預(yù)處理、后處理和預(yù)+后處理均顯著抑制LPS引起IUGR。表1   AA對(duì)LPS引起骨骼發(fā)育遲緩的影響（略）注：e枕骨評(píng)分：1=正常，4=上枕骨未見(jiàn)骨化點(diǎn)；與對(duì)照組比較，a P<005，b P<001；與LPS組比較，c P<005，d P<001表2   LPS和AA對(duì)宮內(nèi)胎兒生長(zhǎng)發(fā)育遲緩的影響（略）注：與對(duì)照組比較，b P<001；與LPS組比較，d P<00124   AA對(duì)LPS引起組織MDA水平升高的作用(表3)   母鼠妊娠晚期給予單劑量LPS，母肝、胎肝和胎盤(pán)組織MDA水平顯著升高(P<001)。LPS+AA預(yù)處理組母肝、胎肝和胎盤(pán)組織MDA水平顯著低于單純L