高效液相色譜法測定不同大小柚果中柚皮苷的含量

1、中南藥學(xué)2010年11月第8卷第11期 CentralSouthPharmacy.November2010,Vol 8No 112004,517(2):53 63.78朱志宏,梁勝華.高效液相色譜法測定地紅霉素腸溶片中地紅霉素的含量J.中南藥學(xué),2007,5(2):89 90.Mar aJos Gonz lezdelaHuebra,UrsulaVincent,GuyBor din,eta1.Characterisationofdirithromycinandspiramycinu singhighperformanceliquidchromatographyanddirectinfusionm

2、assspectrometryJ.AnalyticaChimicaActa,2004,503(2):247 256.9關(guān)榮才,周志凌.反相高效液相色譜法測定地紅霉素的含量121110J.安徽醫(yī)藥,2001,12(3):54 56.(收稿日期:2010 10 08;修回日期:2010 10 23)高效液相色譜法測定不同大小柚果中柚皮苷的含量張婷,毛新亮1*,郭曉蕾,溫玉婷,余巧,羅愛勤1222(1.無限極(中國)有限公司,廣州 510665;2.中山大學(xué)藥學(xué)院,廣州 510080)摘要:目的 測定不同大小柚果中柚皮苷的含量。方法 采用HPLC法,以甲醇 醋酸 水(35 4 61)為流動相,流速為

3、1 5mL min-1,檢測波長為283nm。結(jié)果 柚皮苷的線性范圍為2 020 0 g(r=0 9990),柚果中柚皮苷平均含量為169 8mg g-1,RSD1 6%,加樣回收率為97 4%,RSD為2 0%,柚皮苷含量隨柚果果徑增大而下降。結(jié)論 柚果果徑大小可作為控制藥材質(zhì)量的標準之一。關(guān)鍵詞:柚果;柚皮苷;高效液相色譜中圖分類號:R927 2,R284 1 文獻標識碼:A 文章編號:1672 2981(2010)11 0839 03doi:10 3969/j issn 1672 2981 2010 11 013Determinationofnaringinfromdifferentsi

4、zesofCitrusgrandis(L )OsbeckbyHPLCZHANGTing1,MAOXin liang1*,GUOXiao lei1,WENYu ting2,YUQiao2,LUOAi qin2(1.Inifinitus(Chi na)CompanyLtd,Guangzhou510665;2.SchoolofPharmaceuticalSciences,SunYat senUniversity,Guangzhou510080)Abstract:ObjectiveTodeterminethenaringinfromdifferentsizestheCitrusgrandis(L )O

5、sbeck.MethodsHPLCmethodwasused.Methanol aceticacid water(35 4 61)wasusedasthemobilephase.Theflowratewas1 5mL min-1,andthedeterminationwavelengthwas283nm.Results Thelinearrangeofnaringinwas2 0-20 0 g(r=0 9990).TheaveragecontentofnaringininCitrusgrandis(L )Osbeckwas169 8mg g-1withRSDof1 6%.Therecovery

6、was97 4%withRSDof2 0%.ThenaringincontentdeclinedwiththeincreaseofthediameterofCitrusgrandis(L )Osbeck.Conclusion ThesizeofCitrusgrandis(L )Osbeckcanbeusedasaqualitycontrolcriterionformedicinalherbs.Keywords:Citrusgrandis;naringin;HPLC中國藥典2010版一部化橘紅為蕓香科化州柚Citrusgrandis!Tomentosa或柚Citrusgrandis(L )Osb

7、eck的未成熟的或近成熟的干燥外層果皮。蕓香科植物柚作為化橘紅藥材正宗來源的一種,與化州柚相比,具有分布廣泛,產(chǎn)量大等優(yōu)點。而柚變種甚多,其著名品種有文旦柚、沙田柚、坪山柚、四季拋、大紅拋等。本研究柚果是廣東梅州金柚的幼果,即蕓香科植物柚Citrusgrandis(L )Osbeck的幼果為原料切片干燥而成。性味辛苦溫,歸肺、脾經(jīng),具有理氣作者簡介:張婷,女,碩士,主要從事產(chǎn)品質(zhì)量控制及中藥保健品開發(fā),Tel:(020)38167249,E mail:tinca_zhanginfintus com cn *通訊作者:毛新亮,男,碩士,主要從事保健食品開發(fā)及質(zhì)量監(jiān)控等研究工作,Tel:(020)

8、38167252,E mail:en ginemaoyahoo com cn839CentralSouthPharmacy.November2010,Vol 8No 11 中南藥學(xué)2010年11月第8卷第11期寬中、燥濕化痰功能1。對柚果的化學(xué)成分及其藥理作用已有系統(tǒng)的研究,其主要有效成分有揮發(fā)油類2 4得。2 5 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各3 L,注入高效液相色譜儀,測定,即得,見圖1。、黃酮類5、多糖類、香豆素類6 9、檸檬苦素及其他三萜類成分10,尤其以黃酮類和揮發(fā)油成分研究較多。柚果主要有升壓、抗凝血、保肝、抗腫瘤、抑菌等作用11?，F(xiàn)代藥理、臨床研究以及成分研究表明,柚

9、祛痰止咳的主要有效成分是黃酮類物質(zhì),而柚植物以幼果中黃酮類物質(zhì)的含量為最高。柚果所含黃酮類,主要有效成分為二氫黃酮類,且主成分為柚皮苷(naringin)5。現(xiàn)代藥理研究表明柚皮苷具有多種生物活性,如抗氧化、抗突變、鎮(zhèn)咳、祛痰等,在醫(yī)藥、食品和化妝品等領(lǐng)域均有廣泛應(yīng)用。#MerchIndex(12版)報道,在植物柚的花、葉、果實中均含有豐富的柚皮苷,并且在未成熟的果實中含量最高。為了有效控制柚果中柚皮苷的含量,本實驗在前面研究工作的基礎(chǔ)上12,通過摸索并優(yōu)化條件及反復(fù)測定,建立了HPLC法測定不同大小的柚果中柚皮苷的含量,現(xiàn)報道如下。1 材料與儀器1 1 材料金柚幼果3批采自廣東省梅縣,經(jīng)中國

10、科學(xué)研究院華南植物研究所標本館葉華谷研究員鑒定為原植物系蕓香科柚屬柚Citrusgrandis(L )Osbeck;柚皮苷對照品(純度:98%,供含量測定用,中國藥品生物制品檢定所,批號:110722 200610);甲醇(色譜純);水為蒸餾水;其他試劑均為分析純。1 2 儀器SPD-20A高效液相色譜儀(PDA檢測器、LC-solu tion工作站,日本島津);Sartorius電子天平ME215S(德國);超聲波清洗器(上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司)。2 方法2 1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗色譜柱:AlltimaC18(150mm%4 6mm,5 m);流動相:甲醇 醋酸 水(35 4 61)

11、;流速1 5mL min-1;柱溫:25&檢測波長:283nm;進樣量:3 L;理論塔板數(shù)按柚皮苷計算3000。2 2 對照品溶液的制備稱取五氧化二磷減壓干燥24h的柚皮苷對照品20mg,精密稱定,置10mL量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,即得(含柚皮苷2mg mL-1)。2 3 標準曲線的制備精密吸取對照品溶液1、2 5、5、7 5、10 L,依次進樣測定。以質(zhì)量Y( g)為縱坐標,峰面積X為橫坐標,繪制標準曲線,并進行線性回歸。其回歸方程和相關(guān)系數(shù)為:Y=1121 4X+235 3,r=0 9990,柚皮苷在2 020 0 g與峰面積線性關(guān)系良好。2 4 供試品溶液的制備稱取適量柚果細

12、粉(約0 05g),精密稱定,置10mL量瓶中,加甲醇7mL,超聲處理(功率240W,頻率45kHz)10min,取出,冷卻至室溫,加甲醇至刻度,搖勻,置具塞試管中于3000r min離心10min,取上清液,即-1圖1 柚果對照品(A)及供試品(B)高效液相色譜圖Fig1 HPLCchromatogramofreferencesubstance(A)andsample(B)2 6 精密度試驗精密吸取同一份樣品溶液3 L,重復(fù)測定6次,柚皮苷的峰面積RSD為3 6%。2 7 重復(fù)性試驗取同一批樣品(批號:20090612)6份,分別按(2 4)項下方法制備,精密吸取3 L進樣,測得柚果中柚皮苷

13、平均含量169 8mg g-1,RSD為1 6%。2 8 穩(wěn)定性試驗精密吸取同一份樣品溶液3 L,0、2、4、6、8、10h測定,RSD為1 2%,說明被測溶液在10h內(nèi)基本穩(wěn)定。2 9 加樣回收試驗精密稱取已知柚皮苷含量的柚果粉末適量,精密加入柚皮苷對照品一定量,按(2 4)項下方法制備供試液,依法測定,計算加樣回收率,結(jié)果見表1。表1 柚皮苷加樣回收試驗結(jié)果Tab1 RecoveryofnaringinofCitrusgrandis取樣量(sampleweight)/g0 04510 04530 04520 04530 04580 0451樣品含量(samplecontent)/mg8 6

14、28 848 798 819 158 53加入量(addedcontent)/mg7 387 407 377 417 397 41實測量(detectedcontent)/mg15 8315 9515 8616 0216 6215 69回收率/%97 796 195 997 3101 196 697 42 0平均回收率(meanrecovery)/%RSD/%(recovery)2 10 藥材樣品柚皮苷測定按(2 4)項下方法制備不同直徑規(guī)格的柚果的供試品溶液,每批3份樣品,按(2 1)項下色譜條件測定,結(jié)果見表2。840中南藥學(xué)2010年11月第8卷第11期 CentralSouthPhar

15、macy.November2010,Vol 8No 11表2 柚果的柚皮苷含量測定結(jié)果Tab2 ContentofnaringinfromCitrusgrandis直徑規(guī)格(diameter)/cm12含量(content)219 20223 71222 4523196 84195 24201 6834190 65182 64178 3045168 21178 84169 4156163 21162 84159 5467132 54141 68133 847896 1294 5492 278985 4188 7484 3291082 4184 6978 25>1074 1379 6975

16、 2976 373 981 784 0686 162 7594 312 14136 023 7161 861 3172 153 4參考文獻-1此富含柚皮苷的金柚幼果作為化橘紅藥材來源,具有良好的品質(zhì),本文研究為金柚的質(zhì)量控制提供了一個參考依據(jù)。本RSD/%平均含量(meancontent)-1研究曾比較了索氏提取和超聲提取法制備柚果的供試品,結(jié)果2種提取方法提出的柚皮苷量相差較小。因為索氏提取比超聲提取的溫度高,時間長,且重復(fù)性較差,所以本文選擇超聲提取。本文所報道的高效液相色譜條件其分離效果好,理論塔板數(shù)高,重復(fù)性好,能有效控制柚果藥材質(zhì)量。由于柚果中柚皮苷的含量因柚的變種、產(chǎn)地差異、柚果大

17、小等因221 791 1197 921 7素而異。本文從金柚幼果的直徑大小入手進行質(zhì)量控制研究,按照GAP研究標準還存在一定的局限性。下一步研究將從產(chǎn)地環(huán)境、栽培技術(shù)、采收加工等影響因素著手,對金柚的系統(tǒng)質(zhì)量控制開展更深的研究工作。183 863 5123中國藥典2010年版.一部S.2010:69 70.林正奎,華映芳.中國特有沙田柚果皮精油化學(xué)成分研究J.植物學(xué)報,1989,31(1):73 76.SawamuraM,KurigawaT.Quantitivelydeterminationofvola tileconstituentsinthepummelo(CitrusgrandisOsb

18、eckformaTosa butan)J.JAgricFoodChem,1988,36(3):567 569.SawamuraM,ShichiriK,OotaniY,etal.Volatileconstitu entsofseveralvarietiesofPummelosandcharacteristicsamongCitrusspeciesJ.AgricBiolChem,1991,55(10):257l 2578.江蘇新醫(yī)學(xué)院.#中藥大詞典(下冊).1版.上海:上?？萍汲霭嫔?1977:1504 1506.WuTS,HuangSC,JongTT,etal.Coumarins,acridoneal kaloidsandajlavonefromCitrusgrandisJ.Phytochemistry,1988,27(2):585 587.78WuTS.A1kaloidsandCoumarinsofCitrusgrandisJ.Phy tochemistry,1988,27(11):3717 3718.HuangSC,ChenWT,WuTS.AlkaloidsandcoumarinsfromstembarkofCitrusgrandisJ.Phytoc