焦?fàn)t工人外周血淋巴細(xì)胞HSP72表達(dá)特征(一)

1、焦?fàn)t工人外周血淋巴細(xì)胞 HSP 72表達(dá)特征 (一)【關(guān)鍵詞】焦?fàn)t逸散物；多環(huán)芳烴；苯并 (a)芘；熱休克蛋白72;影響因素， 摘要：目的研究焦?fàn)t工人外周血淋巴細(xì)胞熱休克蛋白72(HSP72)表達(dá)特征及其影響因素。方法選取某焦化廠焦?fàn)t工人267人和對照30人，蛋白印跡(Westernblot)法檢測外周血淋巴細(xì)胞HSP72的表達(dá)，高效液相色譜法測定作業(yè)環(huán)境空氣中苯并(a)芘B(a)P濃度。收集研究對象個人信息。結(jié)果爐頂工、爐側(cè)工外周血淋巴細(xì)胞HSP72 表達(dá)水平 (G±SG)(120±04，7130±037顯)著高于對照組 (085±034，)爐側(cè)工顯著

2、高于爐底工(101±03，5)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P005)。不同作業(yè)環(huán)境B(a)P濃度與相應(yīng)作業(yè)區(qū)工人外周血淋巴細(xì)胞HSP72表達(dá)水平呈二項式分布 (R2=09999)。 Logistic 分析顯示， 與對照組相比， 焦?fàn)t逸散物暴露引起淋巴細(xì)胞 HSP72 表達(dá)陽性的調(diào)整 OR為131，其中爐頂工、爐側(cè)工調(diào)整 OR分別為149和269。多元線性回歸 分析顯示，在低暴露水平下(爐底工、對照組)，吸煙指數(shù)和飲酒是HSP72表達(dá)水平升高的抑制因素(B分別為-00001和-005, P005)。結(jié)論焦?fàn)t逸散物可誘導(dǎo)外周血淋巴細(xì)胞HSP72表達(dá)升高，但高暴露劑量為焦?fàn)t逸散物對 HSP72 表達(dá)

3、有抑制作用。低暴露水平下吸煙和飲酒對 HSP72表達(dá)有抑制作用。關(guān)鍵詞：焦?fàn)t逸散物；多環(huán)芳烴；苯并(a)芘；熱休克蛋白72 ;影響因素ExpressivecharactersofHSP72inperipheralbloodlymphocyteofcokeovenworkers Abstract：ObjectiveToinvestigateheatshockprotein72(HSP72)levelsinperipheralbloodlymphocytesofcokeove nworkersandinfluencefactors.MethodsTwohundredsixtysevencokeov

4、enworkersandthirtycontrols withoutoccupationalPAHsexposurewereinvestigated.Benzo(a)pyrene B(a)p concentrationsintheambientairwereassayedbyhighperformanceliquidchromatography(HPLC).HSP 72levelsinperipheralbloodlymphocytesweremeasuredbyWestemBlot.Personalinformationwascoll ectedbyquestionnaire.Results

5、HSP72levelsinoven-top，oven-sideworkers(120±，047130± 037)weresignificantlyhigherthanthatincontrol(085± 034，P0.05)，andHSP72levelsinoven-sideworkersweresignificantlyhigherthanthoseinoven-bottomworkers(101，P005)±. 035B(a)p concentrationsandHSP72levelsindifferentexposedgroupsshowedbin

6、omialdistribution(R2=09999). ThelogisticregressionanalysisshowedthatthecokeovenworkershadsignificantlyhigherriskinHSP72ri sing(adjustOR=131)thancontrol，andtheadjustORofoven-top，oven-sideworkerswererespectively149and269.Multiplelinearregressionresultpresentedthatinthel owerexposuregroup(oven-bottomwo

7、rkersandcontrol)，smokinganddrinkingwereinhibitingfactorst oHSP72expression(theregressioncoefficientwererespectively-00001and-005，P005).ConclusionThe cokeovenemissionscaninducetherisingofHSP72expression.Butthehighdosecokeovenemissionssho wedinhibitiontoHSP72.Smokinganddrinkingplayedaninhibitionalrole

8、inHSP72expressioninlowerex posuregroup.Keywords：cokeovenemission;polycyclicaromatichydrocarbons;benzo(a)pyrene;heatshockprotein72;influenc efactor熱休克蛋白是生物體細(xì)胞在一系列應(yīng)激因素作用下產(chǎn)生的具有高度保守性的一組細(xì)胞保護(hù) 性蛋白質(zhì)， 在生理狀態(tài)下， 它們主要發(fā)揮細(xì)胞內(nèi)功能1， 其中熱休克蛋白 70(heatshockprotein70，HSP70) 家族與細(xì)胞保護(hù)之間的關(guān)系最密切，它在機(jī)體細(xì)胞耐受形成、 機(jī)體免疫調(diào)節(jié)、 遺傳物質(zhì)保護(hù)、 基因調(diào)控、

9、細(xì)胞增殖分化、腫瘤發(fā)生開展等過程中起重要作 用2, 3。HSP70家族主要有誘導(dǎo)型的 HSP72和結(jié)構(gòu)型的 HSP73兩個亞型4, 5，在應(yīng) 激過程中特別是染毒過程中，主要為 HSP72 表達(dá)變化 6。本研究旨在通過分析焦?fàn)t工人 外周血淋巴細(xì)胞 HSP72表達(dá)特征，探討焦?fàn)t逸散物對HSP72表達(dá)的影響，為焦?fàn)t工人的健康監(jiān)護(hù)和預(yù)防保護(hù)提供理論依據(jù)。1 對象與方法11 對象選取某焦化廠 267 名工人為研究對象，均為男性。根據(jù)作業(yè)環(huán)境和工作地點(diǎn)分為爐 頂工 80 人，爐側(cè)工 64 人，爐底工 123 人(含電工、瓦工、鉗工、帶運(yùn)工、儀表工等)。30 名對照選自 2km 外的某醫(yī)院醫(yī)護(hù)人員和管理人員

10、，均為男性，無有毒作業(yè)接觸史。12 方法121 調(diào)查方法由調(diào)查員采用面對面詢問的方式采集研究對象根本信息，填寫調(diào)查表。內(nèi)容包 括性別、年齡、工齡、吸煙、飲酒、職業(yè)史、既往病史、生活環(huán)境、生活習(xí)慣、身體狀況等 信息。吸煙指數(shù)=吸煙支數(shù)/d X煙年限，吸煙指數(shù)100為吸煙。122作業(yè)環(huán)境苯并但)芘B(a)b測定采用個體采樣方法進(jìn)行采樣。分別選取爐頂、爐側(cè)、爐 底、輔助作業(yè)區(qū) (行政辦公樓、回收車間、機(jī)電作業(yè)區(qū))和對照區(qū)工人各 2 名，隨身攜帶個體采樣器(德國HSF513型)，流量2L/min連續(xù)采樣6h,每個工作區(qū)重復(fù)測定 2次。采用高效液 相色譜法(Varian-Prostar高效液相色譜儀，美

11、國Varian公司)檢測B(a)P芘濃度。123淋巴細(xì)胞別離及處理肘靜脈采血5ml，肝素抗凝，加淋巴細(xì)胞別離液(上海試劑二廠)，2000r/min離心20min，吸取淋巴細(xì)胞層，生理鹽水清洗，07%氯化氨裂解紅細(xì)胞，離心分離淋巴細(xì)胞。加冰冷的細(xì)胞裂解液，4C裂解 1h,1000r/min離心5min，取上清，按DCproteinassay試劑盒(美國BIO-RAD公司)方法進(jìn)行總蛋白定量。調(diào)節(jié)蛋白濃度為1mg/ml,取1001加等體積2X十二烷基磺酸鈉(SDS)100y,l 94C變性10min，用于HSP72的測定。124HSP72測定蛋白印跡(Westernblot)法7測定HSP72取1

12、0卩樣品和高分子量蛋白 maker 進(jìn)行電泳和轉(zhuǎn)膜 (Mini-PROTEAN3 型垂直電泳槽、 PowerPAC3000 型電泳儀、小型 Trans-Blot 轉(zhuǎn)印槽，(美國BIO-RAD公司)5%脫脂奶粉封閉，37C振蕩1h;兔抗人HSP72單克隆抗體(1: 40000,美國stressgen公司)4 C孵育過夜，磷酸鹽緩沖液 (PBS清洗15min , 3次；辣根過氧 化物酶標(biāo)記的羊抗免 1gG(1: 10000 ,美國KPL公司)，37C孵育1h, PBS洗清15min , 3次； 電化學(xué)發(fā)光劑(英國Amersham公司)顯色，KodakX-OMAT2000自動沖片機(jī)洗片，掃描，gel

13、pro32 分析軟件進(jìn)行定量分析。HSP72表達(dá)水平用HSP72灰度值與對照樣品灰度值的比值表示。13統(tǒng)計分析應(yīng)用SPSS100軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。 單因素方差分析比擬年齡、 工齡組間差異，x2 檢驗(yàn)比擬吸煙、飲酒組間差異。 HSP72 對數(shù)轉(zhuǎn)換后呈正態(tài)分布，用幾何均數(shù) ±標(biāo)準(zhǔn)差 (G±SG) 表示，多元協(xié)方差分析控制年齡、性別、工齡、吸煙、飲酒等因素的影響，比擬組間差異。Logistic回歸分析不同暴露等級引起HSP72升高陽性的危險度。2 結(jié)果21 一般情況267名焦?fàn)t作業(yè)工人年齡為 21354854歲，平均(3734 ± 58歲；工齡為117 2910歲，平均

14、(1602 ± 71年；現(xiàn)暴露水平接觸時間129年，平均(1182 ± 76年，吸煙人數(shù)182人，占6816%，飲酒人數(shù) 132人，占4943%。30名對照年齡為 25614336歲，平均(3603±557) 歲；工齡為 1422510 年，平均 (1512±697年) ，現(xiàn)暴露水平接觸時間為125 年，平均(1097 ± 87年0)；吸煙人數(shù) 17人，占 5667%；飲酒 10人，占 3333%。爐頂、爐側(cè)、爐底工人 及對照各組年齡、現(xiàn)暴露水平接觸時間、吸煙率、飲酒率比擬差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P005)。爐底和爐頂工人工齡差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P00

15、5)。22作業(yè)環(huán)境苯并(a)芘檢測結(jié)果爐頂、爐側(cè)、爐底工作區(qū)B(a)P濃度分別為(035 ± 002)010 ± 000) 和(0045 ± 0007)卩g/m3分別是對照(002 ± 000)卩g/m3勺175, 5, 225倍，呈現(xiàn)爐頂 爐側(cè) 爐 底對照區(qū)的趨勢。23焦?fàn)t工人外周血淋巴細(xì)胞HSP72表達(dá)水平231淋巴細(xì)胞HSP72表達(dá)水平(表 1)由表1可見，爐頂工、爐側(cè)工淋巴細(xì)胞HSP72表達(dá)水平顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P005)，爐側(cè)工顯著高于爐底工，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P005)，爐頂工與爐側(cè)工比擬，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P005)。以各不同作業(yè)場所 B(a)P濃度均值與該作業(yè)區(qū)工人 HSP72表達(dá)幾何均數(shù)進(jìn)行曲線擬合，呈二項式分布，R2為09999，顯示HSP72表達(dá)呈現(xiàn)隨著BaP濃度的升高而先升高后下降的趨勢。表1焦?fàn)t工人外周血淋巴細(xì)胞HSP72表達(dá)水平略注：a與對照組比擬，P005； b與爐底工比擬，P005232暴露組別對HSP72表達(dá)水平的