維生素類藥物的分析課件

1、維生素類藥物的分析藥物分析學(xué)（第14章）維生素類藥物的分析（維生素類藥物的分析（1）本節(jié)教師：本節(jié)教師： 韓海韓海 （博士（博士/副教授副教授 )暨南大學(xué)藥學(xué)院暨南大學(xué)藥學(xué)院Tel:-mail: QQ: 560118562013.10.30維生素類藥物的分析維生素類藥物的分析維生素類藥物的分析 基本內(nèi)容基本內(nèi)容 維生素維生素A、維生素維生素B1、維生素維生素C、維生素維生素D和維生素和維生素E的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)、鑒別試驗(yàn)、含量的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)、鑒別試驗(yàn)、含量測(cè)定，以及游離生育酚的檢查。測(cè)定，以及游離生育酚的檢查。 基本要求基本要求 掌握：維生素類藥物的結(jié)構(gòu)與分析方法的掌握：維生

2、素類藥物的結(jié)構(gòu)與分析方法的關(guān)系，維生素關(guān)系，維生素A的紫外分光光度法，維生素的紫外分光光度法，維生素C的碘量法。的碘量法。 維生素類藥物的分析維生素類藥物的分析維生素類藥物的分析 熟悉：維生素熟悉：維生素A的三氯化銻反應(yīng)及比色法，的三氯化銻反應(yīng)及比色法，維生素維生素E的鑒別試驗(yàn)及氣相色譜法，維生素的鑒別試驗(yàn)及氣相色譜法，維生素B1的硫色素反應(yīng)及紫外分光光度法、非水的硫色素反應(yīng)及紫外分光光度法、非水滴定法，維生素滴定法，維生素C的的2，6二氯吲哚酚滴定二氯吲哚酚滴定法，維生素法，維生素D的鑒別試驗(yàn)。的鑒別試驗(yàn)。 了解：該類藥物的其他分析項(xiàng)目與方法，了解：該類藥物的其他分析項(xiàng)目與方法，維生素維生素

3、D含量測(cè)定的高效液相色譜法，維生含量測(cè)定的高效液相色譜法，維生素素A三點(diǎn)校正法的推導(dǎo)過程三點(diǎn)校正法的推導(dǎo)過程 。 維生素類藥物的分析 課時(shí)安排：課時(shí)安排： 總學(xué)時(shí)：總學(xué)時(shí)： （5學(xué)時(shí)）學(xué)時(shí)） 維生素維生素A、維生素維生素B1 （3學(xué)時(shí)）學(xué)時(shí)） 重點(diǎn)內(nèi)容：重點(diǎn)內(nèi)容：維生素維生素A的紫外分光光度法的紫外分光光度法 維生素維生素C、D、E； 復(fù)習(xí)及習(xí)題復(fù)習(xí)及習(xí)題（2學(xué)時(shí)）學(xué)時(shí)）維生素類藥物的分析概概 述述 特點(diǎn)：特點(diǎn)：1.非蛋白質(zhì)、非脂肪、非糖類的有機(jī)化合非蛋白質(zhì)、非脂肪、非糖類的有機(jī)化合物物.具有較強(qiáng)的生理活性，體內(nèi)不能合成。具有較強(qiáng)的生理活性，體內(nèi)不能合成。2.多為醇、酯、胺、酸、酚和醌類；各具

4、多為醇、酯、胺、酸、酚和醌類；各具不同的理化性質(zhì)和生理作用。不同的理化性質(zhì)和生理作用。 CH2OR CH 3 3 CH 3 CH CH3 CH3 維生素維生素A (retinal)維生素類藥物的分析NNNH3NS+OHCH3 H3CCl,HCl CH2CH3HHOCH3 HH CH3 CH3H 維生素維生素D3 (colecalciferol，膽骨化醇膽骨化醇)維生素維生素B1(Thiamine hydrochloride,鹽酸硫胺鹽酸硫胺)維生素類藥物的分析類別名稱每日所需(mg)Vit A1Vit D0.025Vit EVit K1Vit B11.5Vit B22Vit B63Vit B1

5、20.005Vit H 0.25Vit C60生物素酶缺乏VC缺乏、酸化尿水溶性主要作用間歇性跛行周圍神經(jīng)炎核黃素缺乏癥VB6依賴綜合癥、缺乏癥惡性貧血、神經(jīng)系統(tǒng)疾病脂溶性抗干眼病，VA缺乏癥佝僂病，骨軟化癥抗出血維生素維生素類藥物的分析3.分類分類:脂溶性和水溶性脂溶性和水溶性 脂溶性：維生素A、D、E、K等； 水溶性：維生素B組(B1、B2等)、煙酸、泛酸、葉酸及抗壞血酸。 其中脂溶性維生素在體內(nèi)可直接參與代謝的調(diào)其中脂溶性維生素在體內(nèi)可直接參與代謝的調(diào)節(jié)作用，而水溶性維生素是通過轉(zhuǎn)變成輔酶對(duì)節(jié)作用，而水溶性維生素是通過轉(zhuǎn)變成輔酶對(duì)代謝起調(diào)節(jié)作用。代謝起調(diào)節(jié)作用。4. 測(cè)定方法測(cè)定方法:生

6、物、微生物、化學(xué)和物理化學(xué)的方法.維生素類藥物的分析第一節(jié)第一節(jié) 維生素維生素A的分析的分析維生素維生素A A主要存于動(dòng)物性食物中，但有色植物中的主要存于動(dòng)物性食物中，但有色植物中的 - -胡蘿卜素即胡蘿卜素即VAVA原含量豐富。原含量豐富。維生素類藥物的分析第一節(jié)第一節(jié) 維生素維生素A的分析的分析 維生素A 維生素A1（視黃醇） 維生素A2（去氫維生素） 維生素A3 （去水維生素）全反式維生素A CH2OR CH 3 3 CH 3 CH CH3 CH3 維生素類藥物的分析一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì) CH2OR CH 3 3 CH 3 CH CH3 CH3 維生素維生素A (retinal)

7、1共軛多烯結(jié)構(gòu)：共軛多烯結(jié)構(gòu)：具有強(qiáng)紫外吸收具有強(qiáng)紫外吸收（在（在325328nm有最大吸收），有最大吸收），可采用紫外吸收光譜法進(jìn)行鑒別，采用紫外分光可采用紫外吸收光譜法進(jìn)行鑒別，采用紫外分光光度法進(jìn)行含量測(cè)定。光度法進(jìn)行含量測(cè)定。存在多種立體異構(gòu)化合物存在多種立體異構(gòu)化合物天然維生素天然維生素A是全反式維生素是全反式維生素A。其它異構(gòu)體具有其它異構(gòu)體具有相似的化學(xué)性質(zhì)，但生物效價(jià)不同。相似的化學(xué)性質(zhì)，但生物效價(jià)不同。 （表9-2）維生素類藥物的分析max 相對(duì)生物效價(jià)相對(duì)生物效價(jià)維生素維生素A （全反）全反） 325.5 100% 新維生素新維生素Aa （2-順）順） 328 75%新維生

8、素新維生素Ab （4-順）順） 320. 5 24%新維生素新維生素Ac （2、4-順）順） 310.5 15%異維生素異維生素Aa （6-順）順） 323 21%異維生素異維生素Ab （2、6-順）順） 324 24%維生素類藥物的分析一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì) 2.結(jié)構(gòu)式中結(jié)構(gòu)式中R的不同，可以形成維生素的不同，可以形成維生素A醇或其酯。醇或其酯。臨床上多用其醋酸酯和棕櫚酸酯。臨床上多用其醋酸酯和棕櫚酸酯。（表14-1） 3.易氧化變質(zhì)：有多個(gè)不飽和鍵，性質(zhì)不穩(wěn)定，易氧化變質(zhì)：有多個(gè)不飽和鍵，性質(zhì)不穩(wěn)定，易被空氣中氧或氧化劑氧化，生成無活性物質(zhì)。易被空氣中氧或氧化劑氧化，生成無活性物質(zhì)。

9、 CH2OR CH 3 3 CH 3 CH CH3 CH3 -H 維生素維生素A醇醇-COCH3 維生素維生素A醋酸酯醋酸酯-COC15H31 維生素維生素A棕櫚酸酯棕櫚酸酯R :CH2OHCH2去氫維生素A（A2 dehydroretinol)去水維生素A（A3 anhydroretinol)維生素類藥物的分析一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì) 4.溶解性：（脂溶性）能與氯仿、乙醚、環(huán)己烷溶解性：（脂溶性）能與氯仿、乙醚、環(huán)己烷或石油醚任意混合，在乙醇中微溶，在水中不溶。或石油醚任意混合，在乙醇中微溶，在水中不溶。 5.能與三氯化銻呈色能與三氯化銻呈色 ：在氯仿中能與三氯化：在氯仿中能與三氯化銻試

10、劑作用，產(chǎn)生不穩(wěn)定的藍(lán)色。銻試劑作用，產(chǎn)生不穩(wěn)定的藍(lán)色。維生素類藥物的分析二、鑒別試驗(yàn) （一）三氯化銻反應(yīng)（一）三氯化銻反應(yīng)（Carr-Price反應(yīng)）反應(yīng)） 維生素維生素A在飽和無水三氯化銻的無醇氯仿溶液在飽和無水三氯化銻的無醇氯仿溶液中，即顯藍(lán)色，漸變成紫紅色。中，即顯藍(lán)色，漸變成紫紅色。 +CH2-RCOOSbCl5-RCOOSbCl5+CH2藍(lán)色藍(lán)色紫紅紫紅CH3CH3CH2COORCH3CH3SbCl5維生素類藥物的分析二、鑒別試驗(yàn)討論討論：1.實(shí)際起作用的是三氯化銻實(shí)際起作用的是三氯化銻()中存在的中存在的Lewis酸氯化高銻酸氯化高銻(V) 2.反應(yīng)要用反應(yīng)要用無醇氯仿無醇氯仿，

11、因?yàn)榇嫉拇嬖谝鳎驗(yàn)榇嫉拇嬖谝鳛橛H核反應(yīng)物與正碳離子反應(yīng)而使其正為親核反應(yīng)物與正碳離子反應(yīng)而使其正電荷消失。電荷消失。 3.反應(yīng)要反應(yīng)要無水無水，水可使三氯化銻水解為氧，水可使三氯化銻水解為氧氯化銻。氯化銻。維生素類藥物的分析 （二）紫外吸收（二）紫外吸收特征：特征：1. 直接測(cè)定直接測(cè)定維生素維生素A1 在在326326nmnm處有最大吸收。處有最大吸收。 2.酸消去后測(cè)定酸消去后測(cè)定維生素維生素A3（去水維生素去水維生素A）在在332332nmnm附近有曲折，附近有曲折，在在348348、367367、389nm389nm附近有吸收峰。附近有吸收峰。 1、為什么吸收帶紅移？、為什么吸收

12、帶紅移？ 2、為什么吸收峰變多？、為什么吸收峰變多？CH3CH3CH2ORCH3CH3CH3CH2二、鑒別試驗(yàn)Vit AVit A3維生素類藥物的分析 維生素維生素A(醇醇)在鹽酸存在下解離，隨即正電荷轉(zhuǎn)移至在鹽酸存在下解離，隨即正電荷轉(zhuǎn)移至紫蘿酮環(huán)上的碳上，然后失去一個(gè)質(zhì)子而生成去水紫蘿酮環(huán)上的碳上，然后失去一個(gè)質(zhì)子而生成去水維生素維生素A：維生素類藥物的分析 1、為什么吸收帶紅移？、為什么吸收帶紅移？ 去水維生素去水維生素A比維生素比維生素A多一個(gè)共軛雙鍵，因而多一個(gè)共軛雙鍵，因而紅移。紅移。 Konjugierte吸收吸收 Fieser規(guī)則、規(guī)則、 Scoot規(guī)則規(guī)則 2、為什么吸收峰變

13、多？、為什么吸收峰變多？ （思考題，請(qǐng)查詢紫外光譜原理的相關(guān)資料）（思考題，請(qǐng)查詢紫外光譜原理的相關(guān)資料） 維生素類藥物的分析 （三）薄層層析（三）薄層層析條件條件1：（：（BP2000）硅膠板硅膠板溶劑：環(huán)己烷溶劑：環(huán)己烷展開劑：環(huán)己烷展開劑：環(huán)己烷乙醚（乙醚（80:20）三氯化銻試劑顯色，以標(biāo)準(zhǔn)品同時(shí)進(jìn)行對(duì)照三氯化銻試劑顯色，以標(biāo)準(zhǔn)品同時(shí)進(jìn)行對(duì)照條件條件2：硅膠板硅膠板溶劑：氯仿溶劑：氯仿展開劑：環(huán)己烷展開劑：環(huán)己烷乙醚（乙醚（80:20）磷鉬酸磷鉬酸顯色，以標(biāo)準(zhǔn)品同時(shí)進(jìn)行對(duì)照顯色，以標(biāo)準(zhǔn)品同時(shí)進(jìn)行對(duì)照維生素類藥物的分析三、含量測(cè)定三、含量測(cè)定維生素維生素A的測(cè)定的測(cè)定CHP收載三種收載三

14、種HPLC法法UV三氯化銻法三氯化銻法維生素類藥物的分析三、含量測(cè)定三、含量測(cè)定 紫外分光光度法紫外分光光度法 三氯化銻比色法三氯化銻比色法 （專屬性差，顯色不穩(wěn)定）（專屬性差，顯色不穩(wěn)定） 前者是法定方法，后者多用于食品或飼料中的維生素前者是法定方法，后者多用于食品或飼料中的維生素A的測(cè)定（行業(yè)方法）。的測(cè)定（行業(yè)方法）。 HPLC法法 具有強(qiáng)紫外吸收（在具有強(qiáng)紫外吸收（在325328nm有最大吸收），可采有最大吸收），可采用紫外分光光度法進(jìn)行含量測(cè)定。用紫外分光光度法進(jìn)行含量測(cè)定。 CH2OR CH 3 3 CH 3 CH CH3 CH3 維生素類藥物的分析 紫外分光光度法 目前各國藥典均

15、采用紫外分光光度法測(cè)定維生素目前各國藥典均采用紫外分光光度法測(cè)定維生素A的的含量。本法含量。本法快速、準(zhǔn)確、經(jīng)濟(jì)快速、準(zhǔn)確、經(jīng)濟(jì)，測(cè)定結(jié)果能比較正確，測(cè)定結(jié)果能比較正確地反映維生素地反映維生素A的效價(jià)。的效價(jià)。 如何測(cè)定？如何測(cè)定？ 1.根據(jù)紫外光譜數(shù)據(jù)根據(jù)紫外光譜數(shù)據(jù): 定量定量 維生素維生素A在不同溶劑中的紫外吸收數(shù)據(jù)在不同溶劑中的紫外吸收數(shù)據(jù)max(nm)換算因子 max(nm)換算因子環(huán)己烷327.515301900326.517551900異丙醇3251600183032518201830溶劑Vit A acetateVit A alcohol%cm1%cm1其最大吸收峰的位置隨溶劑

16、的不同而異其最大吸收峰的位置隨溶劑的不同而異維生素類藥物的分析 2.能否直接測(cè)定能否直接測(cè)定 ？能直接測(cè)定能直接測(cè)定 的條件：的條件： 1.儀器儀器符合符合藥典藥典的要求的要求 2.溶劑及樣品中的基質(zhì)等其他組分在測(cè)定波長溶劑及樣品中的基質(zhì)等其他組分在測(cè)定波長處處無干擾無干擾 （1）而維生素而維生素A原料藥中?；煊须s質(zhì)，如維生素原料藥中?；煊须s質(zhì)，如維生素A2、維生素維生素A3。維生素類藥物的分析（2 2）維生素）維生素A A的氧化的氧化產(chǎn)物：產(chǎn)物：（3 3）維生素）維生素A A在光照下產(chǎn)生的在光照下產(chǎn)生的無生物活性的聚合物鯨醇：無生物活性的聚合物鯨醇：維生素類藥物的分析 （4 4）維生素）維生

17、素A A的順反異構(gòu)體；的順反異構(gòu)體； （5 5）合成時(shí)產(chǎn)生的中間體）合成時(shí)產(chǎn)生的中間體 這些雜質(zhì)在維生素這些雜質(zhì)在維生素A的最大吸收波長（的最大吸收波長（310340nm）波長范圍內(nèi)有吸收，干擾維生素波長范圍內(nèi)有吸收，干擾維生素A的的測(cè)定，測(cè)定，所測(cè)得的吸收度不是維生素所測(cè)得的吸收度不是維生素A所獨(dú)有。所獨(dú)有。 所以不能直接測(cè)定維生素所以不能直接測(cè)定維生素A的的 用于定量用于定量 要消除雜質(zhì)的干擾要消除雜質(zhì)的干擾三點(diǎn)校正法三點(diǎn)校正法維生素類藥物的分析 三點(diǎn)校正法測(cè)定維生素三點(diǎn)校正法測(cè)定維生素A的含量的含量 本法是用在本法是用在三個(gè)波長處測(cè)得三個(gè)波長處測(cè)得吸收度吸收度，根據(jù)，根據(jù)校正公式計(jì)算校正

18、公式計(jì)算吸收度吸收度A校正值后，再計(jì)算含校正值后，再計(jì)算含量。量。 原理原理 ： 雜質(zhì)的吸收在雜質(zhì)的吸收在310340nm波波長范圍內(nèi)呈一條直線，且隨波長長范圍內(nèi)呈一條直線，且隨波長的增大，吸收度變小。的增大，吸收度變小。 物質(zhì)對(duì)光的物質(zhì)對(duì)光的吸收度吸收度具有加和性，具有加和性，因而吸收曲線也是他們吸收曲線因而吸收曲線也是他們吸收曲線的疊加的疊加。AnmVit A samplepure VA acetateimpurities維生素類藥物的分析 原則原則 ：最大吸收波長處一點(diǎn)，最大吸收波長的最大吸收波長處一點(diǎn)，最大吸收波長的兩側(cè)各選一點(diǎn)。兩側(cè)各選一點(diǎn)。 1.中國藥典測(cè)定中國藥典測(cè)定維生素維生素

19、A醋酸酯醋酸酯等波長差法等波長差法在在 1的左右各選一點(diǎn)為的左右各選一點(diǎn)為 2和和 3；使使 3 11 2。 規(guī)定規(guī)定 1328nm， 2316nm， 3340nm合成 Vit A天然魚肝油維生素類藥物的分析 2.中國藥典測(cè)定中國藥典測(cè)定維生素維生素A醇醇等吸收比法等吸收比法在在 1的左右各選一點(diǎn)為的左右各選一點(diǎn)為 2和和 3；使使A 2A3=6/7A 1。 規(guī)定規(guī)定 1325nm， 2310nm， 3334nm維生素類藥物的分析 第一法：第一法：測(cè)定測(cè)定維生素維生素A醋酸酯醋酸酯的方法的方法等波等波長差法長差法 基本思想基本思想：先判斷雜質(zhì)的干擾：先判斷雜質(zhì)的干擾是否影響測(cè)定是否影響測(cè)定及及

20、影響程度影響程度（五點(diǎn)波長法），再?zèng)Q定用哪個(gè)吸收（五點(diǎn)波長法），再?zèng)Q定用哪個(gè)吸收度進(jìn)行含量計(jì)算。度進(jìn)行含量計(jì)算。 1.取維生素取維生素A醋酸酯，精密稱定，加環(huán)己烷制醋酸酯，精密稱定，加環(huán)己烷制成每成每1m1中含中含915單位的溶液。然后在單位的溶液。然后在300、316、328、340、360nm五個(gè)波長處分別測(cè)定五個(gè)波長處分別測(cè)定吸收值。吸收值。合成 Vit A天然魚肝油測(cè)定方法測(cè)定方法中國藥典中國藥典維生素類藥物的分析 2. A值的選擇法值的選擇法: 按中國藥典附錄按中國藥典附錄 J維生素維生素A測(cè)定法的規(guī)定。測(cè)定法的規(guī)定。 計(jì)算各波長下的吸收度與計(jì)算各波長下的吸收度與328nm波長下的吸

21、收度的波長下的吸收度的比值。并確定最大吸收波長比值。并確定最大吸收波長(應(yīng)為應(yīng)為328nm)。五個(gè)吸收度比值分別與規(guī)五個(gè)吸收度比值分別與規(guī)定的吸收度比值相減，即得定的吸收度比值相減，即得到五個(gè)差值。判斷每個(gè)差值到五個(gè)差值。判斷每個(gè)差值是否超過規(guī)定的是否超過規(guī)定的0.02。維生素類藥物的分析 1.理想狀況理想狀況:雜質(zhì)幾乎沒有形成干擾。雜質(zhì)幾乎沒有形成干擾。 判斷標(biāo)準(zhǔn)：最大吸收波長在判斷標(biāo)準(zhǔn)：最大吸收波長在326329nm之間，之間，計(jì)算吸收度比值計(jì)算吸收度比值A(chǔ)i /A328，并與規(guī)定值相減，差并與規(guī)定值相減，差值不超過值不超過0.02 A值選擇：選擇值選擇：選擇A328計(jì)算含量計(jì)算含量 2.

22、 非理想狀況非理想狀況:雜質(zhì)有干擾。雜質(zhì)有干擾。 判斷標(biāo)準(zhǔn)判斷標(biāo)準(zhǔn)（符合以下兩點(diǎn)之一）符合以下兩點(diǎn)之一） (1) 最大吸收波長在最大吸收波長在326329nm之間，之間，5個(gè)波長個(gè)波長下的下的Ai /A328與規(guī)定值之差有一個(gè)或幾個(gè)超過與規(guī)定值之差有一個(gè)或幾個(gè)超過0.02 ； (2)最大吸收波長不在最大吸收波長不在326329nm之間之間 。維生素類藥物的分析 A值選擇：值選擇： 先計(jì)算出：先計(jì)算出： 再計(jì)算出再計(jì)算出 再根據(jù)以下再根據(jù)以下三種三種不同情況選擇不同情況選擇 （1）若所得的數(shù)值在）若所得的數(shù)值在3%，表明雜質(zhì)干擾很，表明雜質(zhì)干擾很小，則仍用小，則仍用A328計(jì)算含量；計(jì)算含量；

23、（2）若所得的數(shù)值在）若所得的數(shù)值在-15%-3%之間，表明之間，表明雜質(zhì)有一定的干擾，則需用雜質(zhì)有一定的干擾，則需用A328（校正）計(jì)算校正）計(jì)算含量；含量； 3403163283282523AAA.A 校正校正%100AAAf328328)(328 校正校正維生素類藥物的分析 如何計(jì)算如何計(jì)算標(biāo)示量的百分含量標(biāo)示量的百分含量？ 第二步：第二步：求求 第三步：第三步：求效價(jià)（求效價(jià)（IU/g）：）：效價(jià)系指每克供試效價(jià)系指每克供試品中所含維生素品中所含維生素A的國際單位數(shù)。的國際單位數(shù)。 如何換算成效價(jià)（如何換算成效價(jià)（IU/g）？）？ 換算因子：定義為每換算因子：定義為每1個(gè)個(gè) 數(shù)值所相當(dāng)

24、的數(shù)值所相當(dāng)?shù)男r(jià)。效價(jià)。)(%cm1樣樣 l(%)CA%)(cm1 樣樣（C單位為單位為g/100ml）)(%cm1樣樣 )(%cm1樣樣 %1/cmEgIU）效價(jià)（效價(jià)（換算因數(shù)換算因數(shù)VitA的標(biāo)示的標(biāo)示量為量為效價(jià)！效價(jià)！維生素類藥物的分析醋醋酸酸酯酯維維生生素素Ag344. 0IU1 2907000g344. 0g101g/IU6 ）效價(jià)（效價(jià)（1g維生素維生素A醋酸酯相當(dāng)?shù)膰H單位數(shù)為：醋酸酯相當(dāng)?shù)膰H單位數(shù)為g/IU%)(cm1 純純）效價(jià)（效價(jià)（換算因數(shù)換算因數(shù)1900 效價(jià)效價(jià)IU/g = E 1cm1% 1900(溶劑溶劑:環(huán)己烷環(huán)己烷)維生素類藥

25、物的分析醇醇維維生生素素Ag300. 0IU1 1g維生素維生素A醇相當(dāng)?shù)膰H單位數(shù)為：醇相當(dāng)?shù)膰H單位數(shù)為：3330000g300. 0g101g/IU6 ）效價(jià)（效價(jià)g/IU%)(cm1 純純）效價(jià)（效價(jià)（換算因數(shù)換算因數(shù)1830 效價(jià)效價(jià)IU/g = E 1cm1% 1830(溶劑溶劑:環(huán)己烷環(huán)己烷)維生素類藥物的分析 第四步：求標(biāo)示量第四步：求標(biāo)示量 標(biāo)示量標(biāo)示量樣品標(biāo)簽上注明的每膠丸含有的維樣品標(biāo)簽上注明的每膠丸含有的維生素生素A醋酸酯的國際單位數(shù)醋酸酯的國際單位數(shù)(效價(jià)，非含量！效價(jià)，非含量！) 1.求維生素求維生素A醋酸酯膠丸為標(biāo)示量的百分含量醋酸酯膠丸

26、為標(biāo)示量的百分含量: IU/丸丸 標(biāo)示量標(biāo)示量% =- 100% 標(biāo)示量標(biāo)示量 IU/丸丸 = IU/g g/丸丸 = IU/g W IU/g W 標(biāo)示量標(biāo)示量% = - 100% 標(biāo)示量標(biāo)示量維生素類藥物的分析%100100%11%11WWEDLEAcmcm標(biāo)示量換算因子標(biāo)示量換算因子）效價(jià)（樣樣%)(1)(/cmEgIU測(cè)定含量測(cè)定含量單位質(zhì)量單位質(zhì)量1g對(duì)應(yīng)對(duì)應(yīng)的效價(jià)的效價(jià)效價(jià)占單位樣品質(zhì)效價(jià)占單位樣品質(zhì)量的百分比量的百分比效價(jià)（標(biāo)示）占單效價(jià)（標(biāo)示）占單位質(zhì)量的百分比位質(zhì)量的百分比維生素類藥物的分析 或者：或者： A A直接測(cè)得的直接測(cè)得的A A328328或校正后的或校正后的A A3

27、28328 ( (校正校正) )； D D供試品的稀釋倍數(shù)；供試品的稀釋倍數(shù)； 19001900換算因數(shù)；換算因數(shù)； W W膠丸的平均內(nèi)容物重量，膠丸的平均內(nèi)容物重量，g g； W W稱取供試品取量，稱取供試品取量，g g； l比色池厚度，比色池厚度，cmcm； 標(biāo)示量標(biāo)示量樣品標(biāo)簽上注明的每膠九含有的維生素樣品標(biāo)簽上注明的每膠九含有的維生素A A醋醋酸酯的國際單位數(shù)。酸酯的國際單位數(shù)。標(biāo)示量標(biāo)示量1001001900LWWDA維生素類藥物的分析 （3 3）若）若所得的數(shù)值所得的數(shù)值小于小于-15%-15%或大于或大于+3%+3%，或最，或最大吸收波長不在大吸收波長不在326326329329

28、nmnm之間，表明雜質(zhì)干之間，表明雜質(zhì)干擾很大，已經(jīng)不適宜再用本法測(cè)定。則應(yīng)采用擾很大，已經(jīng)不適宜再用本法測(cè)定。則應(yīng)采用第二法（皂化法）第二法（皂化法）測(cè)定。測(cè)定。 圖示：圖示： 用第二法測(cè)定 用 A328（校正）計(jì)算 用 A328 計(jì)算 用第二法測(cè)定 -15% -3% 0 +3% 維生素類藥物的分析 第二法：中國藥典第二法：中國藥典適用于維生素適用于維生素A醇（含雜質(zhì)醇（含雜質(zhì)較多的維生素較多的維生素A ）的方法）的方法 等吸收比法、等吸收比法、6/7A法法 第一法無法消除雜質(zhì)干擾時(shí)用此法第一法無法消除雜質(zhì)干擾時(shí)用此法iKOHAnmmlIUVitAVitAS處測(cè)處測(cè)、于于稀釋至稀釋至溶解溶解

29、異丙醇異丙醇除去植物油的干擾除去植物油的干擾甘油和脂肪酸鹽甘油和脂肪酸鹽植物油植物油醇醇醋酸酯醋酸酯皂化液皂化液揮干乙醚揮干乙醚乙醚提取乙醚提取乙醇乙醇334325310300/159/維生素類藥物的分析 2. A值的選擇法值的選擇法: 按中國藥典附錄按中國藥典附錄 J維生素維生素A測(cè)定法測(cè)定法的規(guī)定。的規(guī)定。 判斷判斷 max是否在是否在323327nm之間之間 計(jì)算計(jì)算325300AA是是否否取未皂化樣品采用取未皂化樣品采用色色譜法純化譜法純化后再測(cè)定后再測(cè)定維生素類藥物的分析 判斷判斷 A300 /A325 是否大于是否大于0.73是是否否取未皂化樣品取未皂化樣品采用采用色譜法純色譜法純

30、化化后再測(cè)定后再測(cè)定 計(jì)算計(jì)算A325(校正校正)維生素類藥物的分析 334310325325260455528156A.A.A.A 校正校正%100325325)(325AAAf校正校正03%3%校校正正325A325A校校正正325Af維生素類藥物的分析 如何計(jì)算含量如何計(jì)算含量？ 1.求求E 1cm1% E 1cm1% =A/CL（C單位為單位為g/100ml） 2.求效價(jià)（求效價(jià)（IU/g）：）： IU/g= E 1cm1% 1830 3.求維生素求維生素A醇為標(biāo)示量的百分含量醇為標(biāo)示量的百分含量: IU/丸丸 標(biāo)示量標(biāo)示量% = - 100% 標(biāo)示量標(biāo)示量 IU/丸丸 = IU/g

31、g/丸丸 = IU/g W IU/g W 標(biāo)示量標(biāo)示量% = - 100% 標(biāo)示量標(biāo)示量維生素類藥物的分析A A直接測(cè)得的直接測(cè)得的A A328328或校正后的或校正后的A A328328 ( (校正校正) )；18301830換算因子；換算因子；D D供試品的稀釋倍數(shù)；供試品的稀釋倍數(shù)；W W膠丸的平均內(nèi)容物重量，膠丸的平均內(nèi)容物重量，g g；W W稱取供試品取量，稱取供試品取量，g g；l比色池厚度，比色池厚度，cmcm；標(biāo)示量標(biāo)示量樣品標(biāo)簽上注明的每膠九含有的維生素樣品標(biāo)簽上注明的每膠九含有的維生素A A醋醋酸酯的國際單位數(shù)。酸酯的國際單位數(shù)。維生素類藥物的分析 關(guān)于三點(diǎn)校正法測(cè)定維生素

32、關(guān)于三點(diǎn)校正法測(cè)定維生素A 含量方法的討論含量方法的討論 1）維生素）維生素A醋酸酯的吸收度校正公式是用直線醋酸酯的吸收度校正公式是用直線方程式法（即代數(shù)法）推導(dǎo)而來：方程式法（即代數(shù)法）推導(dǎo)而來： 維生素維生素A醇的吸收度校正公式是用相似三角醇的吸收度校正公式是用相似三角形法（幾何法或形法（幾何法或6/7定位法）推導(dǎo)而來。（了解）定位法）推導(dǎo)而來。（了解） 維生素類藥物的分析 關(guān)于三點(diǎn)校正法測(cè)定維生素關(guān)于三點(diǎn)校正法測(cè)定維生素A 含量方法的討論含量方法的討論 2）在應(yīng)用三點(diǎn)校正法時(shí)，除其中一點(diǎn)在最大吸收波）在應(yīng)用三點(diǎn)校正法時(shí)，除其中一點(diǎn)在最大吸收波長處測(cè)定外，其余兩點(diǎn)均在最大長處測(cè)定外，其余兩

33、點(diǎn)均在最大吸收峰的兩側(cè)吸收峰的兩側(cè)進(jìn)行測(cè)定。進(jìn)行測(cè)定。如果儀器波長精度不準(zhǔn)確時(shí)，會(huì)產(chǎn)生較大誤差。因此：如果儀器波長精度不準(zhǔn)確時(shí)，會(huì)產(chǎn)生較大誤差。因此： 在測(cè)定前務(wù)必要在測(cè)定前務(wù)必要校正波長校正波長，（ChP，Appendix IV A） 可用全反式維生素可用全反式維生素A進(jìn)行測(cè)定，進(jìn)行測(cè)定，比較測(cè)定結(jié)果和比值是否與對(duì)照品比較測(cè)定結(jié)果和比值是否與對(duì)照品相符合，以進(jìn)一步核對(duì)儀器波長是相符合，以進(jìn)一步核對(duì)儀器波長是否準(zhǔn)確。否準(zhǔn)確。 測(cè)定的樣品應(yīng)不得少于測(cè)定的樣品應(yīng)不得少于兩份兩份。維生素類藥物的分析 關(guān)于三點(diǎn)校正法測(cè)定維生素關(guān)于三點(diǎn)校正法測(cè)定維生素A 含量方法的討論含量方法的討論 3）皂化后提取應(yīng)避

34、免強(qiáng)烈振動(dòng)以免引起乳化。皂化的）皂化后提取應(yīng)避免強(qiáng)烈振動(dòng)以免引起乳化。皂化的全部過程應(yīng)連氮并應(yīng)在最短時(shí)間內(nèi)完成。標(biāo)準(zhǔn)品及樣品全部過程應(yīng)連氮并應(yīng)在最短時(shí)間內(nèi)完成。標(biāo)準(zhǔn)品及樣品的處理，的處理，應(yīng)避免接觸金屬器皿應(yīng)避免接觸金屬器皿。 4）不適宜用第一法測(cè)定的維生素）不適宜用第一法測(cè)定的維生素A醋酸酯。醋酸酯。改用第改用第二法（皂化法）測(cè)定后二法（皂化法）測(cè)定后。其換算因子也相應(yīng)改為維生素。其換算因子也相應(yīng)改為維生素A醇的換算因子醇的換算因子1830，計(jì)算時(shí)必需注意！計(jì)算時(shí)必需注意！ 5）中國藥典收載的中國藥典收載的維生素維生素A膠丸、維生素膠丸、維生素AD滴劑、滴劑、維生素維生素AD膠丸膠丸等均采用

35、三點(diǎn)校正法測(cè)定。等均采用三點(diǎn)校正法測(cè)定。 維生素類藥物的分析應(yīng)用示例一VitAD膠丸中VitA的含量測(cè)定精密稱取本品精密稱取本品( (規(guī)格規(guī)格10,000VitAIU/10,000VitAIU/丸丸) )裝量差異項(xiàng)下（平均裝量裝量差異項(xiàng)下（平均裝量0.07985g/0.07985g/丸）的內(nèi)容物丸）的內(nèi)容物 0.1287g 0.1287g 至至50ml50ml量瓶中，用環(huán)己烷稀量瓶中，用環(huán)己烷稀釋至刻度，搖勻；精密量取釋至刻度，搖勻；精密量取2.0ml2.0ml，置另一，置另一50 ml50 ml量瓶中，用環(huán)量瓶中，用環(huán)己烷稀釋至刻度，搖勻。以環(huán)己烷為空白，測(cè)定最大吸收波長己烷稀釋至刻度，搖勻

36、。以環(huán)己烷為空白，測(cè)定最大吸收波長為為328nm328nm，并在下列波長處測(cè)得吸收度如下，計(jì)算，并在下列波長處測(cè)得吸收度如下，計(jì)算Vit AVit A的標(biāo)示的標(biāo)示量百分含量。量百分含量。(nm)300316328340360A0.3740.5920.6630.5530.228維生素類藥物的分析(nm)300316328340360Ai0.3740.5920.6630.5530.228Ai/A3280.5640.8931.0000.8340.344A規(guī)定規(guī)定0.5550.90710.8110.299A0.009-0.0140.0000.0230.045637. 0553. 0592. 0663.

37、 0252. 3AAA252. 3A340316328328校正%)3%15(%92. 3%100328328)(328AAA校正A=A328校正維生素類藥物的分析%9 .931001000007985. 01005015021287. 01900637. 0100)ml100/g(C1900A%328標(biāo)示量平均丸重標(biāo)示量校正維生素類藥物的分析維生素維生素A的的HPLC法（請(qǐng)自學(xué)）法（請(qǐng)自學(xué)）色譜條件色譜條件正相色譜法！正相色譜法！色譜柱：硅膠柱色譜柱：硅膠柱流動(dòng)相：正己烷流動(dòng)相：正己烷- -異丙醇（異丙醇（997:3)997:3)檢測(cè)波長檢測(cè)波長 325 nm325 nm外標(biāo)法：外標(biāo)法：Vi

38、t A Vit A 酯酯維生素類藥物的分析維生素維生素A的三氯化銻比色法的三氯化銻比色法 原理原理：維生素：維生素A與三氯化銻的無水氯仿溶與三氯化銻的無水氯仿溶液作用，產(chǎn)生不穩(wěn)定的藍(lán)色，液作用，產(chǎn)生不穩(wěn)定的藍(lán)色， max 618nm620nm ，符合，符合Beer定律。定律。 方法方法：標(biāo)準(zhǔn)曲線法。：標(biāo)準(zhǔn)曲線法。 特點(diǎn)特點(diǎn)： 1.需在需在510秒鐘內(nèi)測(cè)定。呈色不穩(wěn)定秒鐘內(nèi)測(cè)定。呈色不穩(wěn)定 2.受溫度影響很大受溫度影響很大 3.需要無水條件需要無水條件 4、三氯化銻有腐蝕性、三氯化銻有腐蝕性維生素類藥物的分析 5.5.非專屬反應(yīng)；非專屬反應(yīng)；如新維生素如新維生素A A 、去水維生素、去水維生素A

39、 A及及胡蘿卜素等物質(zhì)，均與三氯化銻均顯藍(lán)色，故胡蘿卜素等物質(zhì)，均與三氯化銻均顯藍(lán)色，故在測(cè)定天然維生素在測(cè)定天然維生素A A時(shí)，測(cè)定值往往偏高時(shí)，測(cè)定值往往偏高. . 6.6.簡易，操作迅速。目前仍為食品或飼料中維簡易，操作迅速。目前仍為食品或飼料中維生素生素A A測(cè)定常用的方法。測(cè)定常用的方法。維生素類藥物的分析第二節(jié)第二節(jié) 水溶性維生素水溶性維生素維生素維生素B1的分析的分析 VB1又稱鹽酸硫胺素，是是由一個(gè)噻唑環(huán)和氨基嘧啶環(huán)通過亞甲基連接而成的季銨化合物。 在生物體內(nèi)主要以焦磷酸硫胺素（TPP）形式存在。 VB1和糖代謝關(guān)系密切，當(dāng)缺乏時(shí)造成丙酮酸積累易引起神經(jīng)炎和腳氣病。維生素類藥物

40、的分析氨基嘧啶環(huán)氨基嘧啶環(huán)噻唑環(huán)噻唑環(huán)NNNH2CH2NSCH3OHH3C12345123456Cl , HCl亞甲基亞甲基季銨季銨亦稱鹽酸硫胺亦稱鹽酸硫胺,具有維持糖代謝及神經(jīng)傳導(dǎo)與消具有維持糖代謝及神經(jīng)傳導(dǎo)與消化的正常功能，主要用于治療腳氣病、多發(fā)性化的正常功能，主要用于治療腳氣病、多發(fā)性神經(jīng)炎和胃腸道疾病神經(jīng)炎和胃腸道疾病維生素類藥物的分析一、結(jié)構(gòu)及性質(zhì) 結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：1氨基嘧啶環(huán)和噻唑環(huán)：氨基嘧啶環(huán)和噻唑環(huán)：具有硫色素反應(yīng)，此反應(yīng)專屬具有硫色素反應(yīng)，此反應(yīng)專屬性強(qiáng)，用于鑒別和含量測(cè)定。性強(qiáng)，用于鑒別和含量測(cè)定。2. 母核具母核具N雜環(huán)，有弱堿性，雜環(huán)，有弱堿性，1）可以與生物堿沉

41、淀劑反應(yīng)，產(chǎn)生沉淀，用于鑒別與含）可以與生物堿沉淀劑反應(yīng)，產(chǎn)生沉淀，用于鑒別與含量測(cè)定。量測(cè)定。2）可以在冰醋酸中與高氯酸定量反應(yīng)，用于含量測(cè)定。）可以在冰醋酸中與高氯酸定量反應(yīng)，用于含量測(cè)定。3共軛體系共軛體系：具紫外吸收，用于含量測(cè)定。：具紫外吸收，用于含量測(cè)定。4鹽酸根：鹽酸根：呈氯化物的反應(yīng)，用于鑒別。呈氯化物的反應(yīng)，用于鑒別。 維生素類藥物的分析一、結(jié)構(gòu)及性質(zhì)一、結(jié)構(gòu)及性質(zhì) 理化性質(zhì)理化性質(zhì) (1)溶解性溶解性 本品在水中易溶，水溶液顯本品在水中易溶，水溶液顯酸性酸性反反應(yīng)。在乙醇中微溶，在乙醚中不溶應(yīng)。在乙醇中微溶，在乙醚中不溶。 (2)具有紫外吸收具有紫外吸收 本品約本品約12.

42、5 gm1鹽酸溶液鹽酸溶液(91000)，max = 246nm，百分吸收系數(shù)為，百分吸收系數(shù)為406436。 (3)在堿性中遇氧化劑，如鐵氰化鉀，可被氧化在堿性中遇氧化劑，如鐵氰化鉀，可被氧化為具有熒光的為具有熒光的硫色素硫色素，后者溶于正丁醇中呈，后者溶于正丁醇中呈藍(lán)藍(lán)色熒光色熒光。 NNNH2CH2NSCH3OHH3C12345123456Cl , HCl維生素類藥物的分析 (4)分子中含有兩個(gè)雜環(huán)分子中含有兩個(gè)雜環(huán)(嘧啶環(huán)和噻唑環(huán)嘧啶環(huán)和噻唑環(huán))，故，故可與某些生物堿沉淀試劑可與某些生物堿沉淀試劑(如碘化汞鉀、三硝基如碘化汞鉀、三硝基酚、碘溶液、硅鎢酸等酚、碘溶液、硅鎢酸等)反應(yīng)生成組

43、成恒定的沉反應(yīng)生成組成恒定的沉淀。淀。 (5)水溶液呈氯化物的反應(yīng)，用于鑒別。水溶液呈氯化物的反應(yīng)，用于鑒別。 (6)干燥品很穩(wěn)定，酸性水溶液穩(wěn)定，在堿性溶干燥品很穩(wěn)定，酸性水溶液穩(wěn)定，在堿性溶液中，噻唑環(huán)開環(huán)，迅速分解。液中，噻唑環(huán)開環(huán)，迅速分解。NNNH2CH2NSCH3OHH3C12345123456Cl , HCl維生素類藥物的分析二、鑒別試驗(yàn) (一一)硫色素反應(yīng)硫色素反應(yīng) 硫色素反應(yīng)為維生素硫色素反應(yīng)為維生素B1B1所特有所特有，中國藥典以此，中國藥典以此進(jìn)行鑒別。進(jìn)行鑒別。 (1)原理原理 (2)方法方法 取本品約取本品約5mg，加氫氧化鈉試液加氫氧化鈉試液2.5m1溶解后，溶解后

44、，加加鐵氰化鉀鐵氰化鉀試液試液0.5m1與與正丁醇正丁醇5m1，強(qiáng)力振搖強(qiáng)力振搖2min，放置分層，上面的醇層顯強(qiáng)烈的放置分層，上面的醇層顯強(qiáng)烈的藍(lán)色熒光藍(lán)色熒光。加酸使成。加酸使成酸性，熒光即消失。再加堿使成堿性，熒光又顯出。酸性，熒光即消失。再加堿使成堿性，熒光又顯出。 藍(lán)色熒光硫色素正丁醇 OOH維生素類藥物的分析熒光消失熒光消失藍(lán)色熒光藍(lán)色熒光硫色素硫色素正丁醇正丁醇）（環(huán)合環(huán)合 HCNFeKOHNaOHVitB6321O OH維生素類藥物的分析 (二二)沉淀反應(yīng)沉淀反應(yīng) (1) (2) (3) (4)與苦酮酸作用形成不溶于水的扇形兩頭彎成與苦酮酸作用形成不溶于水的扇形兩頭彎成螺旋狀的

45、白色結(jié)晶。螺旋狀的白色結(jié)晶。其他維生素與苦酮酸不發(fā)其他維生素與苦酮酸不發(fā)生反應(yīng)！生反應(yīng)！嘧啶環(huán)嘧啶環(huán) 伯氨伯氨噻唑環(huán)噻唑環(huán) 季銨季銨 4242HgIHBHgIK 淡黃淡黃 2KIIIHIB2 紅色紅色H+白白色色硅硅鎢鎢酸酸 H+ OH4WO12OHSiOB23222 維生素類藥物的分析 （三）加堿分解后與醋酸鉛反應(yīng)（三）加堿分解后與醋酸鉛反應(yīng) 水溶液加醋醋鉛試液和氫氧化鈉試液并加水溶液加醋醋鉛試液和氫氧化鈉試液并加熱，溶液由黃色熱，溶液由黃色棕色棕色最后生成黑色沉最后生成黑色沉淀。淀。 苛性堿分解維生素苛性堿分解維生素B1，產(chǎn)生的產(chǎn)生的硫化鈉與醋硫化鈉與醋酸鉛作用生成黑色硫化鉛沉淀。酸鉛作用

46、生成黑色硫化鉛沉淀。S元素反應(yīng)元素反應(yīng) PbSNaSVitBAcPbNaOH維生素類藥物的分析（四）水溶液顯氯化物的特殊反應(yīng)四）水溶液顯氯化物的特殊反應(yīng) OHNHAgNOAgCl白白3HNO HNO藍(lán)藍(lán)淀淀粉粉試試紙紙 KIMnOCl H Cl-反應(yīng)反應(yīng)維生素類藥物的分析三、含量測(cè)定 方法種類方法種類： 硅鎢酸重量法、硅鎢酸重量法、BP（1998） 硫色素?zé)晒夥?、硫色素?zé)晒夥āSP（24）非水溶液滴定法、非水溶液滴定法、（Chp 測(cè)定維生素測(cè)定維生素B1原料藥）原料藥）紫外分光光度法紫外分光光度法。（Chp 測(cè)定維生素測(cè)定維生素B1制劑）制劑）維生素類藥物的分析 1硅鎢酸重量法簡介硅鎢酸重量

47、法簡介BP（2000）、）、Chp（1990）方法方法維生素維生素B1在酸性溶液中與硅鎢酸作用產(chǎn)生沉淀，在酸性溶液中與硅鎢酸作用產(chǎn)生沉淀，根據(jù)沉淀的重量即可計(jì)算其含量。根據(jù)沉淀的重量即可計(jì)算其含量。特點(diǎn)特點(diǎn)：原理簡單，但操作繁瑣費(fèi)時(shí)，原理簡單，但操作繁瑣費(fèi)時(shí)，試劑易得，試劑易得，結(jié)果較為準(zhǔn)確。結(jié)果較為準(zhǔn)確。OHHClOHWOOHSiOOSClNHCOHWOSiOHClOSClNHCH2232224171223241712441226122白白）（）（MW：3479.22維生素類藥物的分析 2.硫色素?zé)晒夥蛏責(zé)晒夥?p222 USP（24）方法方法 原理原理: 鹽酸硫胺在堿性溶液中，被氧化劑

48、（如鹽酸硫胺在堿性溶液中，被氧化劑（如鐵氰化鉀）氧化生成硫色素，用異丁醇鐵氰化鉀）氧化生成硫色素，用異丁醇提取，在紫外光照射下呈現(xiàn)藍(lán)色熒光，提取，在紫外光照射下呈現(xiàn)藍(lán)色熒光，與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液所得熒光進(jìn)行與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液所得熒光進(jìn)行比較或測(cè)定熒光強(qiáng)度，可求得供試品中比較或測(cè)定熒光強(qiáng)度，可求得供試品中B1B1的含量。的含量。維生素類藥物的分析 方法方法：教材：教材P2601. 鐵氰化鉀溶液要新配鐵氰化鉀溶液要新配2.2.標(biāo)準(zhǔn)品、供試品逐步定量稀釋標(biāo)準(zhǔn)品、供試品逐步定量稀釋3.3.標(biāo)準(zhǔn)品、供試品各測(cè)定兩份以上標(biāo)準(zhǔn)品、供試品各測(cè)定兩份以上, ,取均值定量。并與空白試驗(yàn)校正。取均值定量。并與空白試驗(yàn)校正。討論討論1.1.硫色素反應(yīng)為維生素硫色素反應(yīng)為維生素B