中藥五倍子、蜂房提取物對早期釉質(zhì)齲再礦化作用的實驗研究

1、         08-05-15 15:35:00     作者：楚金普 李繼遙    編輯：studa20【摘要】  目的通過pH循環(huán)實驗研究中藥五倍子、蜂房提取物對人工早期釉質(zhì)齲的再礦化作用。方法應(yīng)用離體牛切牙制備人工釉質(zhì)齲標(biāo)本40 例,隨機(jī)分為4組：(a) 去離子水組 (陰性對照)、 (b) 五倍子組、 (c) 蜂房組、(d) NaF組(陽性對照)，進(jìn)行體外pH循環(huán)實驗后，采用顯微硬度計測定標(biāo)本脫礦前后和pH循環(huán)后的硬

2、度值,觀察釉質(zhì)表面顯微硬度的變化。通過偏光顯微鏡觀察早期釉質(zhì)齲損再礦化后的病理學(xué)改變。結(jié)果NaF組(陽性對照)和五倍子組能明顯的提高早期釉質(zhì)齲的表面顯微硬度（P<0.05），蜂房組雖然也能提高釉質(zhì)齲的表面顯微硬度，但與去離子水組(陰性對照)比較無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。偏光顯微鏡下，pH循環(huán)后NaF組(陽性對照)和五倍子組表層明顯增厚,密度增加，病損體部出現(xiàn)呈負(fù)性雙折射的再礦化條帶，病損深度也明顯變淺。結(jié)論五倍子能有效促進(jìn)早期釉質(zhì)齲再礦化,因而具有防齲功效。 【關(guān)鍵詞】  五倍子 蜂房 早期齲 再礦化Abstract:ObjectiveTo evaluate the

3、effect of extracts of Galla chinensis and Nidus Vespae on the remineralization of initial enamel carious lesions in vitro. MethodsForty bovine enamel blocks with early lesions were prepared and randomly divided into four treatment groups.The lesions were subjected to a pH-cycling regime for 12 days.

4、 Surface enamel microhardness was measured on the enamel blocks before and after demineralization  by polarized light microscopy. ResultsAll samples rehardened significantly. Fluoride had a significantly greater effect than all other treatments. In the Galla chinensis group, %SMHR was significa

5、ntly greater than DDW. There was no significant difference between the Nidus Vespae group and DDW. Polarized light microscopy showed that the thickness of the surface layer increased obviously in all specimens including NaF group and Galla chinensis group.Negative birefringent band appeared in the l

6、esions body and the depth of the lesions was obviously reduced .ConclusionThese results showed that extracts of Galla chinensis can obviously promote the remineralization of the early enamel carious lesions, so it appears to be a promising source of new agents that may prevent dental caries.Key word

7、s:Galla chinensis;   Nidus Vespae;   Initial enamel lesions ;  Remineralization    齲病是發(fā)生在牙齒硬組織的一種慢性細(xì)菌性疾病，發(fā)病率高，分布廣，嚴(yán)重影響人類口腔及全身健康。含氟制劑的使用是目前齲病預(yù)防最常用的方法，但氟制劑的使用具有明顯的局限性，如氟斑牙、氟骨癥等。因此，尋找新的安全、有效的防齲藥物越來越受到齲病防治領(lǐng)域?qū)W者們的重視。    近年來中藥在齲病防治方面的研究倍受關(guān)注，中藥具有清熱解毒、調(diào)節(jié)

8、平衡等作用。五倍子, 別名文蛤、百蟲倉、木附子等，具有斂肺降火、澀腸止瀉、斂汗止血、收濕斂瘡等功效。蜂房又稱露蜂房、野蜂房、馬蜂窩，為胡蜂科昆蟲大黃蜂或同屬近緣昆蟲的巢，具有消腫散結(jié)，攻毒殺蟲，祛風(fēng)熄風(fēng)的功效。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，中藥五倍子、蜂房對口腔中與齲病發(fā)生關(guān)系密切的細(xì)菌有明顯的抑制作用，五倍子還能抑制釉質(zhì)脫礦，且與氟具有協(xié)同作用16。但五倍子、蜂房對早期釉質(zhì)齲的再礦化作用如何，目前尚未見報道。本研究通過體外實驗對五倍子、蜂房提取物對人工早期釉質(zhì)齲的再礦化作用進(jìn)行研究，進(jìn)一步明確五倍子、蜂房的防齲功效，為五倍子、蜂房防齲的推廣應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。1  材料與方法1.1 &

9、#160; 五倍子、蜂房提取物的提取五倍子為四川產(chǎn)五倍子Rhus chinesis Mill，購于成都中藥材市場，提取物由四川省天然藥物研究重點實驗室提供。提取方法為：1 000 g五倍子粉碎，以3 000 ml去離子水于6070水浴10 h，振搖，過濾，濾渣，重復(fù)上次操作，合并濾液，加活性炭脫色，過濾，濾液濃縮至稠膏狀，得五倍子粗提物；蜂房為四川產(chǎn)露蜂房Polistes mandarinus Sauss，購于成都中藥材市場，提取物由四川省天然藥物研究重點實驗室提供，提取方法為：1 000 g蜂房粉碎，先后以95%乙醇，50%乙醇浸漬后滲漉, 將滲漉液濃縮至稠膏,為蜂房粗提物。1.2 

10、; 釉質(zhì)的預(yù)備選擇新鮮拔除的牛切牙,除去表面有機(jī)污染物，分離冠根, 冠部超聲清洗，干燥，顯微鏡下觀察無齲損、氟斑、裂痕。用硬組織切割機(jī)將牙冠成5 mm×5 mm×2 mm大小的釉質(zhì)塊，唇面釉質(zhì)用拋光機(jī)及碳化硅砂紙（800#，1 200#，2 400#）在流水下依次磨平、拋光。然后由顯微硬度計(Knoop壓頭，50-g，15 s)測量基線表面顯微硬度（surface microhardness, SMH）,于每個標(biāo)本釉質(zhì)表面中央垂直測5個點，選擇硬度值范圍為298.30 313.80 KHN(Knoop hardness number, KHN)釉質(zhì)塊65個，超聲清洗，自然干

11、燥，釉質(zhì)塊表面開窗4 mm×4 mm大小，其余部位涂布兩層抗酸指甲油。1.3  人工齲實驗將預(yù)備好的釉質(zhì)標(biāo)本用嵌體蠟固定在自制的環(huán)形玻棒上，放入盛有脫礦溶液（2.2 mmol/L Ca(NO3)2，2.2 mmol/L KH2PO4，50 mmol/L醋酸，1.0 mmol/L NaN3，0.1 ppmNaF，pH用5 mol/L的KOH調(diào)至4.5）的玻璃器皿中，釉質(zhì)表面與溶液的比率為20 mm2/10 ml，磁攪拌儀攪拌（100 r/min），37脫礦3 d。脫礦后再次測量其表面顯微硬度（在基線測量點一側(cè)平行測5個點），選擇硬度值范圍為166.80176.50 KHN釉質(zhì)

12、塊40個用于再礦化實驗。每個樣本所開窗口的一半用抗酸指甲油覆蓋作為再礦化實驗前后形態(tài)學(xué)對照。1.4  再礦化實驗40個人工釉質(zhì)齲樣本隨即分為4組（10個/組），即：(a) 去離子水組(陰性對照)， (b) 五倍子組， (c) 蜂房組，(d) NaF組(陽性對照)。各實驗組藥物濃度都為4 g/L，pH值用2M NaOH調(diào)至7.0。然后各組分別進(jìn)行pH循環(huán)實驗，共循環(huán)12 d，其每天的具體方案7見表1。表1  再礦化pH循環(huán)實驗方案（略）1.5  顯微硬度測量pH循環(huán)結(jié)束后，用顯微硬度儀(Duramin -2, Struers公司，丹麥，Knoop壓頭，50-g,15 s)于各標(biāo)本暴露窗口再次測量表面顯微硬度（在基線測量點的另一側(cè)平行測5個點），然后對3次不同時間（脫礦前、脫礦后、pH循環(huán)后）側(cè)得的所有5個硬度值的平均值進(jìn)行比較并計算出表面顯微硬度恢復(fù)的百分比（%SMHR），計算公式8如下：    %SMHR=（pH循環(huán)后的硬度值-脫礦后的硬度值）（基線硬度值-脫礦后的硬度值）×1001.6  偏光顯微鏡觀察表面顯微硬度測試后，用自凝塑膠將牙齒包埋，硬組織切割