恩諾沙星肺靶向明膠微球的制備及質(zhì)量評價_圖文

1、，（）：李軍，等中國獸藥雜志恩諾沙星肺靶向明膠微球的制備及質(zhì)量評價李軍：，鄧艷蕓，黃庭龍，任芬（教育部熱帶生物資源重點實驗室（海南大學(xué)），?？冢缓Ｄ洗髮W(xué)制藥工程系。?？冢臼崭迦掌凇恳灰弧疚墨I(xiàn)標(biāo)識碼】【文章編號】一（）一一【中圖分類號】【摘要】研制恩諾沙星肺靶向明膠微球（）并對其進(jìn)行質(zhì)量評價。采用乳化一化學(xué)交聯(lián)法制備恩諾沙星肺靶向明膠微球，油鏡下觀察微球粒徑大小及形態(tài)，并用顯微照相機(jī)（）拍照做記錄。通過紫外分光光度法檢測微球中恩諾沙星（）的含量，進(jìn)而計算得出其載藥量和包封率，并通過溶出度測定法探討其體外釋放規(guī)律。制成的恩諾沙星肺靶向明膠微球為淡黃色粉末，油鏡下大小較均勻，形態(tài)圓整、分散性較好，

2、其內(nèi)可見被包裹的黃色粉末，平均直徑約斗。就粒徑分布而言，一爐的微球占，載藥量為，包封率為，在的緩沖液中的釋藥符合緩釋特征，。約為，比單純的延長個多小時。體外釋放實驗顯示前時釋藥量約，至第之間釋藥量達(dá)，之后逐步釋放，至?xí)r藥物釋放累積量占總藥量的。結(jié)果表明，制備出的恩諾沙星明膠微球符合肺靶向給藥系統(tǒng)的要求，具有較好的緩釋性和肺靶向性。關(guān)鍵詞】恩諾沙星；明膠微球；肺靶向給藥系統(tǒng)鋤嘣伽吼恤恤?！?，舳一”，孑，（匆面伽礦卻玉口弒礎(chǔ)耐忍鯽（島西坊渤毋），咖礦叫加，覷溉；叼柳咖洲礦雕冊跏叫幻以如跏嘶，妙，眈洳“；踟）：試鋤啪嘴唱啪（）舢，唧，鋤）鷦螄鷦眥鋤鷦“一鋤“陽鋤鵲鵝犯珀衍出缸印璐鋤幽¨肌弛

3、瑚西¨酗粕鵲譏扼（婦）鶴鵝瑪鵝鵲塔，硪出，岫一基金項目：海南省自然基金項目（項目號）作者簡介：李軍（年一），藥學(xué)博士，副教授，主要從事藥物新劑型新技術(shù)的研究工作。一毗：衄中國獸藥雜志，（）：李軍，等譏穢如：；作為一種新型、安全、高效的藥物制劑轉(zhuǎn)運系統(tǒng)，靶向給藥系統(tǒng)（或稱靶向制劑，）誕生于世紀(jì)年代，它是藥物傳輸系統(tǒng)（簡稱）理念的具體體現(xiàn)。該制劑能將藥物定向運送到靶器官、靶組織或靶細(xì)胞，而其他正常部位則幾乎不受影響。無論是通過局部定向傳遞還是利用體循環(huán)運送至全身各處，臨床用藥均需達(dá)到四個條件：（）沒有明顯毒副作用；（）在最小劑量范圍發(fā)揮藥效；（）易被患者接受；（）安全、廉價、有效。肺靶向

4、明膠微球是骨架基質(zhì)型的一種被動靶向制劑。明膠是從動物膠中提煉的一種膠原蛋白，不僅生物相容性好，而且方便易得、價格低廉，在體內(nèi)又相對易降解，沒有明顯毒副作用，所以很適合用作藥物治療的靶向載體。同時，明膠骨架的溶蝕作用又可以起到一定的緩釋作用，具有給藥次數(shù)少，峰谷血藥濃度波動小，刺激反應(yīng)輕，療效持久安全等特點。藥物制成微球后，由于微球具有易被肺毛細(xì)血管床機(jī)械濾阻的性能，因而將肺靶向給藥系統(tǒng)與微球技術(shù)結(jié)合制成的新型藥物制劑進(jìn)入機(jī)體后，藥物從微球中釋放后濃集于靶區(qū)啼部，達(dá)到提高療效、降低不良反應(yīng)的目的。明膠微球具有無免疫原性、可生物降解、靶向性、緩釋性等特點，近年來得到廣泛關(guān)注。將三種技術(shù)加以結(jié)合，一

5、種經(jīng)濟(jì)、安全、有效、方便的藥物制劑就會產(chǎn)生。近年來的各項研究已經(jīng)表明，這種技術(shù)將對我國畜禽疫病的控制起到巨大的推動作用，也正是基于以上技術(shù)的價值和社會的需要，本試驗嘗試研究恩諾沙星的一種新型制劑恩諾沙星肺靶向明膠微球，以確定最佳工藝，為社會創(chuàng)造價值。材料與儀器主要試劑型明膠（湖南湘中化學(xué)試劑開發(fā)中心）；鹽酸（，廣州市東紅化工廠）；司班（一，天津市福晨化學(xué)試劑廠）；恩諾沙星（純度，東北獸藥廠）；液體石蠟（，天津市福晨化學(xué)試劑廠）；異丙醇（，天津市大茂化學(xué)試劑廠）；酸性明膠（等電點為，北京化學(xué)試劑公司）；甲醛溶液（，汕頭市西隴化工廠有限公司）。主要儀器電子天平（一型，日本島津）；計（雷磁一，上海精

6、密科學(xué)儀器有限公司）；電熱恒溫水溫水浴鍋（一一型，天津泰斯特有限公司）；顯微鏡（一型，南京江南光電集團(tuán)股份有限公司）；恒溫加熱磁力攪拌器（一型，鞏義市予華儀器有限公司）；勻漿機(jī)（一型可調(diào)高速勻漿機(jī)，常州澳華儀器有限公司）；激光微粒分析儀（，天津天河醫(yī)療儀器有限公司）；紫外可見光分光光度計（一型，尤尼柯上海儀器有限公司）；離心機(jī)（，德國）；制冰機(jī)（，）；超純水儀（一，吐）；顯微鏡（）；顯微照相機(jī)（）。方法與結(jié)果空白明膠微球（，）制備工藝篩選本研究采用乳化一化學(xué)交聯(lián)法制備空白明膠微球。由于微球粒徑需控制在一定的范圍內(nèi)，故需通過正交試驗對各項實驗參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化篩選，以得到更加符合要求的微粒。參照相關(guān)文

7、獻(xiàn)【并根據(jù)單因素考察結(jié)果，選定對制備明膠微球影響較大的個因素：明膠濃度、攪拌速度、乳化劑用量及油水相比例，每個因素選定個水平，按（）正交設(shè)計表（表）設(shè)置正交試驗步驟，篩選出最佳制備工藝條件?，F(xiàn)將正交試驗設(shè)計如下。：明膠濃度設(shè)定為（，）；：勻漿攪拌速度（）；：乳化劑用量（）；：油水相比例（：）。表正交試驗設(shè)計方案通過型激光微粒分析儀對微球粒徑進(jìn)行測定后，比較、改進(jìn)最終確定最佳工藝處方。按最終處方制得的粒徑分布如圖所示。恩諾沙星含量測定標(biāo)準(zhǔn)曲線和回歸方程精，（）：李軍，等中國獸藥雜志密稱定恩諾沙星原料藥藥粉，溶解于稀溶液中，繼續(xù)稀釋并定容于容量瓶中，用超純水稀釋一系列倍數(shù)，得到系列梯度濃度的恩諾沙

8、星標(biāo)準(zhǔn)溶液，再用紫外可見光分光光度儀在波長下測其吸光度值。根據(jù)測定結(jié)果，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并擬合回歸方程，結(jié)果如圖所示。一圳。；唔沖蝴唿霉徽球粒徑范圍岬、圖空白明膠微粒（）粒徑分布圖司圖恩諾沙星含量測定標(biāo)準(zhǔn)曲線與回歸方程最后制備恩諾沙星飽和溶液，稀釋一定倍數(shù)后，測定其攏。，通過計算可以求得恩諾沙星飽和溶液的濃度。恩諾沙星明膠微球（，）的制備工藝仍然采用 乳化一化學(xué)交聯(lián)法制備恩諾沙星明膠微球，與的區(qū)別主要是在明膠的水溶液中加入一定的混勻制成飽和溶液作為分散相。具體步驟為：用電子天平稱取適量型明膠于小燒杯中，在一水浴條件下加人超純水，玻璃棒攪拌下溶解，制得一定濃度的明膠溶液，再加入恩諾沙星藥粉，并用溶液

9、調(diào)節(jié)至一定，繼續(xù)加入恩諾沙星原料藥藥粉，直到制成恩諾沙星飽和溶液。再取處方量的恩諾沙星飽和溶液和一，在玻璃棒的攪拌下，加到盛有處方量的液體石蠟的小燒杯中，置水浴恒溫至，并繼續(xù)攪拌制成初乳。在恒溫條件下，用高速勻漿機(jī)以一定的轉(zhuǎn)速進(jìn)行高速間歇攪拌，并根據(jù)表象適時取樣，用光學(xué)顯微鏡高倍鏡進(jìn)行鏡檢。待鏡檢粒徑合格后，停止勻漿攪拌，在磁力攪拌下于冰浴中降溫至后，在其他條件不變的情況下繼續(xù)加入處方量的化學(xué)交聯(lián)劑交聯(lián)一定時問。將交聯(lián)后的載藥樣品用離心機(jī)在一定條件下以一定的離心率高速離心左右，棄去上清液，即得恩諾沙星明膠微球樣品。再將其在異丙醇的淋洗下進(jìn)行抽濾，烘干即得恩諾沙星明膠微球。恩諾沙星明膠微球的質(zhì)量

10、評價恩諾沙星明膠微球的粒徑分布取的液體樣品用型激光微粒分析儀分析，結(jié)果如圖所示。昌，卻髯咚一臥惦徽球粒徑岬圖恩諾沙星明膠微球（）粒徑分布圖通過計算可以得出，的粒徑分布在斗范圍內(nèi)的占，平均粒徑（）為斗。，。恩諾沙星明膠微球的外觀性狀總體來看，大小比較均勻，形態(tài)圓整、分散性較好，用顯微鏡油鏡（×）照相的結(jié)果如圖所示。圖顯微鏡油鏡（×）下的照片恩諾沙星明膠微球載藥量與包封率的測定根據(jù)的標(biāo)準(zhǔn)曲線、回歸方程并結(jié)合以下公式計算，可以得到的載藥量為，包封率為（）。囂怒黧裟徽。每液中徽球個敷中國獸藥雜志，（）：李軍，等載藥量塑鬻×包封率塑塹紫×恩諾沙星明膠微球體外釋藥試

11、驗精密稱定微球樣品，裝入透析袋中，置入盛有（為的磷酸鹽緩沖液）的玻璃燒杯中，接著在（±）的溫度下，以（±）的速度進(jìn)行磁力攪拌，分別于、取樣備用，同時補(bǔ)入。之后用紫外可見光分光光度儀對各不同時段所取的樣品測定撒。，根據(jù)的含量測定回歸方程（圖），可以計算出濃度、累積釋藥量和累積釋藥百分率。為了比較，更明顯地突出的緩釋效果，同時另取的原料藥（作參比試驗）于另一透析袋中，同樣置于盛有的玻璃燒杯中，同樣在（±）、以（±）進(jìn)行磁力攪拌，分別于、各取樣品待用，同時補(bǔ)入。同樣用紫外可見光分光光度儀對各不同時段所取的樣品測定。，計算出濃度、累積釋藥量和累積釋藥百分率。恩諾

12、沙星和恩諾沙星明膠微球體外釋放曲線如圖所示。通過在體外釋放曲線上的對比，能更好地展示出的緩釋優(yōu)勢。對比二者的體外釋藥曲線：的釋放藥量為，釋放藥量為；從體外釋放曲線（圖）計算得出的。以約為，的約為；具有明顯的緩釋效果，其在最初內(nèi)有突釋效應(yīng)，之后慢慢轉(zhuǎn)為緩釋過程。量耄枷藥量百坌三取樣時閶（）息諾沙星明膠徽球（陬贐）恩譜沙星（腿）圖和體外釋放曲線討論。動物體內(nèi)的網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)（，包括肝、脾、肺和骨髓等組織）具有大量的吞噬細(xì)胞，能夠?qū)⒁欢ù笮〉奈⒘Ｗ鳛楫愇锒鴶z取，較大的微粒則由于不能濾過毛細(xì)血管床而被機(jī)械截留于某些部位。其中斗的微粒可以被動靶向到以肝臟和脾臟為主的，“的微粒可以被動靶向到肺部組織，而小于

13、的微粒則可以靶向到骨髓。所以，微球給藥系統(tǒng)的不同靶向性可通過控制顆粒的大小來實現(xiàn)。微球的粒徑受攪拌速度、水油相體積比及各自粘度、表面張力大小等的影響。可以固定大部分條件，調(diào)節(jié)個別條件就可以快捷達(dá)到肺靶向粒徑的要求，這對微球的載藥屬性沒有影響。微球制劑的特性有靶向性（主要是被動靶向作用）和緩釋性。在該試驗中制備的恩諾沙星明膠微球的平均粒徑為斗，其中粒徑大小在斗范圍內(nèi)的占微球總數(shù)的，基本符合肺靶向給藥系統(tǒng)的要求；載藥量為，包封率為，藥物利用率基本合格；藥物的體外釋藥試驗表明有較明顯的緩釋作用。至于微球的肺靶向性及相關(guān)參數(shù)需在動物體內(nèi)做進(jìn)一步研究。近年來，獸醫(yī)藥劑學(xué)已經(jīng)由普通的注射劑、片劑、散劑、預(yù)

14、混劑等向緩釋、控釋、靶向制劑發(fā)展。肺靶向微球是藥劑學(xué)研究的一個熱點，在獸醫(yī)藥劑學(xué)亦有廣闊的應(yīng)用前景。參考文獻(xiàn)：陸彬藥物新劑型與新技術(shù)北京：人民衛(wèi)生出版社，：，“一卿蝴，叩蛐，：沃德，考茨明膠的科學(xué)與工藝學(xué)北京：輕工業(yè)出版社。崔福德藥劑學(xué)第版北京：人民衛(wèi)生出版社，： 恩諾沙星肺靶向明膠微球的制備及質(zhì)量評價作者：李軍， 鄧艷蕓， 黃庭龍， 任芬， LI Jun， DENG Yan-yun， HUANG Ting-long， REN Fen作者單位：李軍,LI Jun(教育部熱帶生物資源重點實驗室,海南大學(xué),海口570228， 鄧艷蕓,黃庭龍,任芬,DENG Yan-yun,HUANG Ting-l

15、ong,REN Fen(海南大學(xué)制藥工程系,?？?570228刊名：中國獸藥雜志英文刊名：CHINESE JOURNAL OF VETERINARY DRUG年，卷(期：2008，42(12被引用次數(shù)：1次參考文獻(xiàn)(4條1. 陸彬 藥物新劑型與新技術(shù) 19982. B LU. J Q Zhang. H Yang Lung-targeting Microspheres of Carboplatin 20033. 沃德AG. 考茨A 明膠的科學(xué)與工藝學(xué) 19824. 崔福德 藥劑學(xué) 2003相似文獻(xiàn)(5條1.期刊論文 李銳. 周友中. 肖希龍. LI Rui. ZHOU You-zhong. XI

16、AO Xi-long 恩諾沙星肺靶向微球的制備 -中國獸醫(yī)學(xué)報2008,28(1以天然可生物降解的明膠為載體材料,液體石蠟為油相,Span80為乳化劑,采用正交試驗優(yōu)化空白明膠微球的乳化法制備工藝,并在此基礎(chǔ)上制備了恩諾沙星明膠微球.結(jié)果顯示,含藥微球平均粒徑為12.35 m,粒徑730 m的微球占總數(shù)的92.3%,符合肺靶向的要求.恩諾沙星明膠微球載藥量為20.67%、包封率為43.62%,動態(tài)透析法研究體外釋放特性,符合Higuchi規(guī)律,釋藥ti/2比原藥延長了約6倍,表明有明顯的緩釋功能.在37、相對濕度值(RH75%考察3月,幾乎無變化.兔體內(nèi)分布試驗表明具有明顯的肺靶向性,肺中藥代

17、動力學(xué)行為符合三室開放模型.2.學(xué)位論文 周友中 恩諾沙星肺靶向微球在犬體內(nèi)分布及藥物動力學(xué)的研究 2006恩諾沙星(ENR是獸醫(yī)專用的氟喹諾酮類藥物，有廣譜殺菌作用，臨床上使用廣泛。靶向微球可以提高藥物的治療效果，并能改變藥物的藥動學(xué)特征。本研究采用乳化冷凝法制備恩諾沙星明膠微球(ENR-GMS，并改進(jìn)了微球的制備工藝，提高了載藥量；并對微球的外觀、粒徑分布、含量、體外釋藥、穩(wěn)定性等進(jìn)行了研究。為了進(jìn)一步研究微球制劑的肺靶向性，建立了在犬血清和各組織中藥物濃度的檢測方法，并以健康犬為實驗動物，研究微球在其體內(nèi)的分布和藥物動力學(xué)。本試驗改進(jìn)了ENR-GMS的制備工藝，提高了載藥量，用紫外分光光

18、度法測定微球中藥物含量，ENR-GMS載藥量為38.20、包封率為42.96。ENR-GMS平均粒徑為11.71m，粒徑在730m范圍內(nèi)的微球占總數(shù)的92.8。ENR-GMS體外釋藥與原藥相比t1/2延長了約10倍，符合一級動力學(xué)規(guī)律，有明顯的緩釋功能。ENR-GMS穩(wěn)定性試驗結(jié)果表明試驗期間所有樣品的外觀色澤、粒徑及其分布、載藥量等指標(biāo)均未見明顯的變化，穩(wěn)定性較好。使用高效液相色譜熒光檢測(HPLC-FLD血清和各組織中ENR和環(huán)丙沙星(CIP的濃度，ENR和CIP的標(biāo)準(zhǔn)曲線在101000ng·mL-1濃度范圍內(nèi)均呈良好線性關(guān)系。在30500ng·mL-1的添加范圍內(nèi)，血

19、清和各組織中樣品回收率均大于70，變異系數(shù)較小，重現(xiàn)性好。在藥物動力學(xué)研究中，分別給犬靜脈注射ENR注射液和ENR-GMS混懸液后定時采樣并測定，采用3P97藥動學(xué)程序處理藥-時數(shù)據(jù)，得出藥-時曲線下面積和峰濃度。結(jié)果表明ENR-GMS在體內(nèi)有良好的肺靶向性，肺相對血和其它臟器組織的靶向效率(t。均大于1，靶向效率增強(qiáng)1.396.06倍，并且顯著地改變ENR的體內(nèi)分布，ENR注射液、ENR-GMS混懸液在犬肺部的藥動學(xué)過程分別符合二室開放模型和三室開放模型，肺內(nèi)藥物達(dá)峰時間和分布半衰期有所縮短，消除半衰期延長，肺內(nèi)藥量清除率降低了55.2。3.會議論文 周友中. 牛麗娟. 肖希龍 恩諾沙星肺靶

20、向微球在犬體內(nèi)分布與藥物動力學(xué)研究 2006使用高效液相色譜熒光檢測(HPLC-FLD血清和組織中恩諾沙星(ENR和環(huán)丙沙星(CIP的濃度,ENR的標(biāo)準(zhǔn)曲線在101000 ng·mL-1范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系(r=0.9993,n=5.在30500ng·mL-1的添加范圍內(nèi)回收率均大于70,變異系數(shù)較小,重現(xiàn)性好.在藥物動力學(xué)研究中,分別給犬靜脈注射ENR注射液和微球(ER-GMS混懸液,采用3P97藥動學(xué)程序處理藥-時數(shù)據(jù),得出藥-時曲線下面積和峰濃度,結(jié)果表明恩諾沙星微球在體內(nèi)有良好的肺靶向性,肺相對血和其它臟器組織的靶向效率(tc均大于1,靶向效率增加1.396.06倍,且微球顯著地改變了ENR的體內(nèi)分布,E