藥物分析第3章藥物的鑒別

1、第三章第三章 藥物的鑒別藥物的鑒別 光譜鑒別法光譜鑒別法2色譜鑒別法色譜鑒別法3其它鑒別法其它鑒別法4化學(xué)鑒別法化學(xué)鑒別法1 概概 述述目的：鑒別藥物真?zhèn)巍Ｄ康模鸿b別藥物真?zhèn)??；瘜W(xué)反應(yīng)化學(xué)反應(yīng)儀器分析儀器分析測(cè)定物理測(cè)定物理常數(shù)常數(shù)綜合分析綜合分析藥物鑒別特點(diǎn)藥物鑒別特點(diǎn)已知物確證已知物確證試驗(yàn)試驗(yàn)1鑒別試驗(yàn)為鑒別試驗(yàn)為個(gè)別分析，個(gè)別分析，非系統(tǒng)分析非系統(tǒng)分析2通常采用不通常采用不同方法鑒別，同方法鑒別，綜合分析綜合分析3原料藥鑒別項(xiàng)下原料藥鑒別項(xiàng)下試驗(yàn)項(xiàng)目為試驗(yàn)項(xiàng)目為3 34 4有的僅有的僅1 12 2個(gè)，個(gè)，制劑鑒別項(xiàng)目一制劑鑒別項(xiàng)目一般比原料藥少般比原料藥少4藥物鑒別方法藥物鑒別方法化學(xué)

2、鑒別法化學(xué)鑒別法光譜鑒別法光譜鑒別法色譜鑒別法色譜鑒別法其它鑒別法其它鑒別法第一節(jié)第一節(jié) 化學(xué)鑒別法化學(xué)鑒別法Ch.P、USP一般鑒別試驗(yàn)一般鑒別試驗(yàn)不同的稱號(hào)不同的稱號(hào)JP、BP定性反應(yīng)定性反應(yīng)一、一般鑒別試驗(yàn)（一、一般鑒別試驗(yàn)（general identification test） （一）概念、特點(diǎn)及試驗(yàn)項(xiàng)目（一）概念、特點(diǎn)及試驗(yàn)項(xiàng)目l以藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)及其物理化學(xué)性質(zhì)為依據(jù)，以藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)及其物理化學(xué)性質(zhì)為依據(jù)，通過化學(xué)反應(yīng)來鑒別藥物真?zhèn)蔚摹Ｍㄟ^化學(xué)反應(yīng)來鑒別藥物真?zhèn)蔚摹?l無機(jī)藥物：根據(jù)其組成的陰離子和陽離子的特?zé)o機(jī)藥物：根據(jù)其組成的陰離子和陽離子的特殊反應(yīng)，并以藥典附錄殊反應(yīng)，并以

3、藥典附錄III項(xiàng)下的一般鑒別試驗(yàn)項(xiàng)下的一般鑒別試驗(yàn)為依據(jù)。為依據(jù)。l有機(jī)藥物：采用典型的官能團(tuán)反應(yīng)。有機(jī)藥物：采用典型的官能團(tuán)反應(yīng)。l一般鑒別試驗(yàn)的項(xiàng)目（一般鑒別試驗(yàn)的項(xiàng)目（2015版藥典有版藥典有35項(xiàng)）。項(xiàng)）。l一般鑒別試驗(yàn)僅供確認(rèn)單一的化學(xué)藥物。一般鑒別試驗(yàn)僅供確認(rèn)單一的化學(xué)藥物。l一般鑒別試驗(yàn)僅供確認(rèn)單一的化學(xué)藥物，如為一般鑒別試驗(yàn)僅供確認(rèn)單一的化學(xué)藥物，如為數(shù)種化學(xué)藥物的混合物或有干擾物質(zhì)存在時(shí)，數(shù)種化學(xué)藥物的混合物或有干擾物質(zhì)存在時(shí)，除另有規(guī)定外，均不適用。除另有規(guī)定外，均不適用。 l通過一般鑒別試驗(yàn)只能證實(shí)是某一類藥物，而通過一般鑒別試驗(yàn)只能證實(shí)是某一類藥物，而不能證實(shí)是哪一種藥

4、物。不能證實(shí)是哪一種藥物。 合合適適試試劑劑氣體產(chǎn)生氣體產(chǎn)生熒光出現(xiàn)熒光出現(xiàn)沉淀生成沉淀生成顏色改變顏色改變真?zhèn)握鎮(zhèn)嗡幬镉行С煞值挠袩o判斷藥物有效成分的有無判斷衍生物熔點(diǎn)衍生物熔點(diǎn)1、干法、干法 l 將供試品加適當(dāng)試劑在規(guī)定的溫度條件下（一般將供試品加適當(dāng)試劑在規(guī)定的溫度條件下（一般是高溫）進(jìn)行試驗(yàn)，觀測(cè)此時(shí)所發(fā)生的特異現(xiàn)象。是高溫）進(jìn)行試驗(yàn)，觀測(cè)此時(shí)所發(fā)生的特異現(xiàn)象。 l （1）焰色試驗(yàn)：常用干法。利用某些元素所具有）焰色試驗(yàn)：常用干法。利用某些元素所具有的特異焰色，可鑒別它們?yōu)槟囊活慃}類藥物。的特異焰色，可鑒別它們?yōu)槟囊活慃}類藥物。 l 方法：取鉑絲，用鹽酸濕潤后，蘸取供試品，在方法：取鉑

5、絲，用鹽酸濕潤后，蘸取供試品，在無色火焰中燃燒，使火焰顯出特殊的顏色。無色火焰中燃燒，使火焰顯出特殊的顏色。l （2）加熱分解：在適當(dāng)?shù)臏囟葪l件下，加熱使供）加熱分解：在適當(dāng)?shù)臏囟葪l件下，加熱使供試品分解，生成有特殊氣味的氣體。試品分解，生成有特殊氣味的氣體。2、濕法、濕法 l 系指將供試品和試劑在適當(dāng)?shù)娜軇┲?，于一定條系指將供試品和試劑在適當(dāng)?shù)娜軇┲?，于一定條件下進(jìn)行反應(yīng)，發(fā)生易于觀測(cè)的化學(xué)變化，如顏件下進(jìn)行反應(yīng)，發(fā)生易于觀測(cè)的化學(xué)變化，如顏色、沉淀、氣體、熒光等。色、沉淀、氣體、熒光等。（1）顯色反應(yīng)鑒別法）顯色反應(yīng)鑒別法l 系指供試品溶液中加入適當(dāng)?shù)脑噭┤芤海谝欢ㄏ抵腹┰嚻啡芤褐屑尤脒m

6、當(dāng)?shù)脑噭┤芤?，在一定條件下進(jìn)行反應(yīng)，生成易于觀測(cè)的有色產(chǎn)物。在條件下進(jìn)行反應(yīng)，生成易于觀測(cè)的有色產(chǎn)物。在鑒別試驗(yàn)中最為常用的反應(yīng)類型有：鑒別試驗(yàn)中最為常用的反應(yīng)類型有：l 1）三氯化鐵呈色反應(yīng)）三氯化鐵呈色反應(yīng)酚羥基或水解后產(chǎn)生酚酚羥基或水解后產(chǎn)生酚羥基；羥基； l 2）異羥肟酸鐵反應(yīng)）異羥肟酸鐵反應(yīng)多為芳酸及其酯類、酰胺多為芳酸及其酯類、酰胺類；類； l 3）茚三酮呈色反應(yīng)）茚三酮呈色反應(yīng)脂肪氨基；脂肪氨基；l 4）重氮化）重氮化-偶合顯色反應(yīng)偶合顯色反應(yīng)芳伯氨基或能產(chǎn)生芳伯氨基或能產(chǎn)生芳伯氨基；芳伯氨基；l 5）氧化還原顯色反應(yīng)及其它顏色反應(yīng)。）氧化還原顯色反應(yīng)及其它顏色反應(yīng)。（2）沉淀生

7、成反應(yīng)鑒別法）沉淀生成反應(yīng)鑒別法 常用的這類反應(yīng)有：常用的這類反應(yīng)有：l 1）與重金屬離子的沉淀反應(yīng)）與重金屬離子的沉淀反應(yīng)在一定條件下，在一定條件下，藥物和重金屬離子反應(yīng)，生成不同形式的沉淀；藥物和重金屬離子反應(yīng)，生成不同形式的沉淀；l 2）與硫氰化鉻銨（雷氏鹽）的沉淀反應(yīng)）與硫氰化鉻銨（雷氏鹽）的沉淀反應(yīng)多為多為生物堿及其鹽，具有芳香環(huán)的有機(jī)堿及其鹽；生物堿及其鹽，具有芳香環(huán)的有機(jī)堿及其鹽； l 3）其它沉淀反應(yīng)。）其它沉淀反應(yīng)。（3）熒光反應(yīng)鑒別法）熒光反應(yīng)鑒別法 常用的熒光發(fā)射形式有以下類型：常用的熒光發(fā)射形式有以下類型：l 1）藥物本身可在可見光下發(fā)射熒光；）藥物本身可在可見光下發(fā)射

8、熒光；l 2）藥物溶液加硫酸使呈酸性后，在可見光下發(fā)）藥物溶液加硫酸使呈酸性后，在可見光下發(fā)射熒光；射熒光；l 3）藥物和溴反應(yīng)后，于可見光下發(fā)射出熒光；）藥物和溴反應(yīng)后，于可見光下發(fā)射出熒光；l 4）藥物和間苯二酚反應(yīng)后，發(fā)射出熒光及藥物）藥物和間苯二酚反應(yīng)后，發(fā)射出熒光及藥物經(jīng)其它反應(yīng)后，發(fā)射熒光。經(jīng)其它反應(yīng)后，發(fā)射熒光。 （4）氣體生成反應(yīng)鑒別法）氣體生成反應(yīng)鑒別法l 1）大多數(shù)的胺（銨）類藥物、酰脲類藥物以及某）大多數(shù)的胺（銨）類藥物、酰脲類藥物以及某些酰胺類藥物，可經(jīng)強(qiáng)堿處理后，加熱，產(chǎn)生氨些酰胺類藥物，可經(jīng)強(qiáng)堿處理后，加熱，產(chǎn)生氨（胺）氣；（胺）氣；l 2）化學(xué)結(jié)構(gòu)中含硫的藥物，可

9、經(jīng)強(qiáng)酸處理后，加）化學(xué)結(jié)構(gòu)中含硫的藥物，可經(jīng)強(qiáng)酸處理后，加熱，發(fā)生硫化氫氣體；熱，發(fā)生硫化氫氣體；l 3）含碘有機(jī)藥物經(jīng)直火加熱，可生成紫色碘蒸氣；）含碘有機(jī)藥物經(jīng)直火加熱，可生成紫色碘蒸氣；含醋酸酯和乙酰胺類藥物，經(jīng)硫酸水解后，加乙含醋酸酯和乙酰胺類藥物，經(jīng)硫酸水解后，加乙醇可產(chǎn)生乙酸乙酯的香味。醇可產(chǎn)生乙酸乙酯的香味。 橙黃到猩橙黃到猩紅色沉淀紅色沉淀供試品供試品稀鹽酸稀鹽酸1ml0.1mol/L亞硝酸鈉亞硝酸鈉堿性堿性-萘酚試液萘酚試液NH2R+HNO2H+RN+N+OHNNROHNaOH加三氯化鐵加三氯化鐵試液試液1 1滴滴即顯紫色即顯紫色供試品供試品加稀鹽酸加稀鹽酸即析出白色即析出白

10、色水楊酸沉淀水楊酸沉淀分離沉淀分離沉淀在醋酸銨試液中溶解在醋酸銨試液中溶解l 取供試品的中性溶液，加三氯化鐵取供試品的中性溶液，加三氯化鐵試液，即生成赭色沉淀；加稀鹽酸，變?cè)囈?，即生成赭色沉淀；加稀鹽酸，變?yōu)榘咨恋?。為白色沉淀?l 取供試品，置干燥試管中，加硫酸取供試品，置干燥試管中，加硫酸后，加熱，不炭化，但析出苯甲酸，在后，加熱，不炭化，但析出苯甲酸，在試管內(nèi)壁凝結(jié)成白色升華物。試管內(nèi)壁凝結(jié)成白色升華物。 鉑絲鉑絲鹽酸鹽酸無色火焰中燃燒無色火焰中燃燒供試品供試品中性溶液中性溶液醋酸氧鈾鋅試液醋酸氧鈾鋅試液火焰即顯鮮黃色火焰即顯鮮黃色發(fā)生黃色沉淀發(fā)生黃色沉淀白色沉淀白色沉淀分離分離沉淀不

11、溶解沉淀不溶解供試品溶液供試品溶液白色沉淀白色沉淀分離分離沉淀溶解沉淀溶解加入氯化鋇試液加入氯化鋇試液加入醋酸鉛試液加入醋酸鉛試液二、專屬鑒別試驗(yàn)（二、專屬鑒別試驗(yàn)（specific identification test） 根據(jù)每一種藥物化學(xué)結(jié)構(gòu)的差異及其所根據(jù)每一種藥物化學(xué)結(jié)構(gòu)的差異及其所引起的物理化學(xué)特性的不同，選用某些特有引起的物理化學(xué)特性的不同，選用某些特有的靈敏定性反應(yīng)，來鑒別藥物真?zhèn)蔚摹Ｊ亲C的靈敏定性反應(yīng)，來鑒別藥物真?zhèn)蔚摹Ｊ亲C實(shí)某一種藥物的依據(jù)。實(shí)某一種藥物的依據(jù)。 第二節(jié)第二節(jié) 光譜鑒別法光譜鑒別法一、紫外光譜鑒別法一、紫外光譜鑒別法 1、原理、特點(diǎn)及適用范圍、原理、特點(diǎn)及適

12、用范圍l 原理：有機(jī)藥物具有能吸收紫外可見光的基團(tuán)，原理：有機(jī)藥物具有能吸收紫外可見光的基團(tuán)，則顯示特征的吸收光譜，不同結(jié)構(gòu)的物質(zhì)可產(chǎn)生則顯示特征的吸收光譜，不同結(jié)構(gòu)的物質(zhì)可產(chǎn)生不同的紫外可見吸收光譜不同的紫外可見吸收光譜l 特點(diǎn)：具有一定的專屬性，儀器普及率高，操作特點(diǎn)：具有一定的專屬性，儀器普及率高，操作簡單，應(yīng)用范圍廣。缺點(diǎn)是光譜較簡單，曲線性簡單，應(yīng)用范圍廣。缺點(diǎn)是光譜較簡單，曲線性狀變化不大，專屬性小于狀變化不大，專屬性小于IR。l 適用范圍：含有適用范圍：含有芳環(huán)或共軛雙鍵芳環(huán)或共軛雙鍵的藥物在紫外光區(qū)的藥物在紫外光區(qū)有特征吸收，含有生色團(tuán)和助色團(tuán)的藥物在可見光有特征吸收，含有生色

13、團(tuán)和助色團(tuán)的藥物在可見光區(qū)有吸收。區(qū)有吸收。2、常用的方法、常用的方法l 對(duì)比吸收曲線一致性對(duì)比吸收曲線一致性 l 對(duì)比最大吸收波長和相應(yīng)吸光度的一致性對(duì)比最大吸收波長和相應(yīng)吸光度的一致性l 對(duì)比吸收系數(shù)的一致性對(duì)比吸收系數(shù)的一致性l 對(duì)比最大、最小吸收波長和相應(yīng)吸光度比值的一致對(duì)比最大、最小吸收波長和相應(yīng)吸光度比值的一致性經(jīng)化學(xué)處理后，測(cè)定其反應(yīng)產(chǎn)物的吸收光譜特性。性經(jīng)化學(xué)處理后，測(cè)定其反應(yīng)產(chǎn)物的吸收光譜特性。l對(duì)比最大吸收波長和同時(shí)測(cè)定最小吸收波長對(duì)比最大吸收波長和同時(shí)測(cè)定最小吸收波長的一致性的一致性l規(guī)定一定濃度的供試品在最大吸收波長處的規(guī)定一定濃度的供試品在最大吸收波長處的吸收度吸收度

14、 l規(guī)定吸收波長和吸收系數(shù)法規(guī)定吸收波長和吸收系數(shù)法 l規(guī)定吸收波長和吸收度比值法規(guī)定吸收波長和吸收度比值法二、紅外光譜鑒別法二、紅外光譜鑒別法l特點(diǎn)：能反映出藥物分子的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，專特點(diǎn)：能反映出藥物分子的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，專屬性強(qiáng)，準(zhǔn)確率高。不單獨(dú)使用本方法進(jìn)屬性強(qiáng)，準(zhǔn)確率高。不單獨(dú)使用本方法進(jìn)行鑒別。行鑒別。l方法：標(biāo)準(zhǔn)圖譜對(duì)照法方法：標(biāo)準(zhǔn)圖譜對(duì)照法l試樣制備方法：壓片法、糊法、膜法、溶試樣制備方法：壓片法、糊法、膜法、溶液法液法 第三節(jié)第三節(jié) 色譜鑒別法色譜鑒別法進(jìn)行進(jìn)行鑒別鑒別比移值比移值Rf保留時(shí)間保留時(shí)間色譜鑒別法色譜鑒別法l原理：不同物質(zhì)在不同色譜條件下，產(chǎn)生各原理：不同物質(zhì)在不同色譜條

15、件下，產(chǎn)生各自的特征色譜行為。與對(duì)照品在相同條件下自的特征色譜行為。與對(duì)照品在相同條件下進(jìn)行色譜分離，并比較其保留行為和檢測(cè)結(jié)進(jìn)行色譜分離，并比較其保留行為和檢測(cè)結(jié)果是否一致來驗(yàn)證真?zhèn)巍９欠褚恢聛眚?yàn)證真?zhèn)?。l方法：方法：（1）薄層色譜鑒別法）薄層色譜鑒別法l在實(shí)際工作中，一般采用對(duì)照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）在實(shí)際工作中，一般采用對(duì)照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）比較法，要求供試品斑點(diǎn)的比較法，要求供試品斑點(diǎn)的Rf值應(yīng)與對(duì)照品值應(yīng)與對(duì)照品斑點(diǎn)一致。斑點(diǎn)一致。 （2）高效液相色譜鑒別法和氣相色譜鑒別法）高效液相色譜鑒別法和氣相色譜鑒別法l一般規(guī)定按供試品含量測(cè)定項(xiàng)下的高效液一般規(guī)定按供試品含量測(cè)定項(xiàng)下的高效液相色譜條件進(jìn)

16、行試驗(yàn)。要求供試品和對(duì)照相色譜條件進(jìn)行試驗(yàn)。要求供試品和對(duì)照品色譜峰的保留時(shí)間應(yīng)一致。含量測(cè)定方品色譜峰的保留時(shí)間應(yīng)一致。含量測(cè)定方法為內(nèi)標(biāo)法時(shí)，可要求供試品溶液和對(duì)照法為內(nèi)標(biāo)法時(shí)，可要求供試品溶液和對(duì)照品溶液色譜圖中藥物峰保留時(shí)間與內(nèi)標(biāo)物品溶液色譜圖中藥物峰保留時(shí)間與內(nèi)標(biāo)物峰的保留時(shí)間比值應(yīng)相同。峰的保留時(shí)間比值應(yīng)相同。 (Rf的最佳范圍的最佳范圍0.3-0.5,可用范可用范圍圍0.2-0.8)薄層色譜法薄層色譜法比移值比移值(Rf)定性參數(shù)定性參數(shù)原點(diǎn)到斑點(diǎn)中心距離原點(diǎn)到斑點(diǎn)中心距離原點(diǎn)到溶劑前沿距離原點(diǎn)到溶劑前沿距離Rf=ll0原點(diǎn)原點(diǎn) l l0 0l l1 1l l2 2前沿前沿1、2

17、樣品樣品 3標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)品前沿前沿原點(diǎn)原點(diǎn) 1.5-2.0cm2.0cm1 2 30.5-1.0cmhW1/2 0.5h0.607hW0tt0tRl 鑒別試驗(yàn)條件鑒別試驗(yàn)條件（一）溶液的濃度（一）溶液的濃度 溶液的濃度主要指被鑒別物質(zhì)的濃度，其大小溶液的濃度主要指被鑒別物質(zhì)的濃度，其大小影響結(jié)果的判斷。如化學(xué)法中要觀察沉淀、顏色；影響結(jié)果的判斷。如化學(xué)法中要觀察沉淀、顏色；UV法中法中max, A、（二）溶液的溫度（二）溶液的溫度 溫度過高可使產(chǎn)物分解，導(dǎo)致顏色變淺，甚至溫度過高可使產(chǎn)物分解，導(dǎo)致顏色變淺，甚至觀察不到結(jié)果。觀察不到結(jié)果。%11cmE （三）溶液的酸堿度（三）溶液的酸堿度 使反應(yīng)物處于活化狀態(tài)、反應(yīng)產(chǎn)物處于穩(wěn)定可使反應(yīng)物處于活化狀態(tài)、反應(yīng)產(chǎn)物處于穩(wěn)定可以觀察狀態(tài)。以觀察狀態(tài)。 （四）試驗(yàn)時(shí)間（四）試驗(yàn)時(shí)間 有機(jī)化合物的化學(xué)反應(yīng)較慢，需要一定的反應(yīng)有機(jī)化合物的化學(xué)反應(yīng)較慢，需要一定的反應(yīng)時(shí)間和條件。時(shí)間和條件。 （五）