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1、紅細胞膜蛋白結構測定(紅細胞抗體)方法流式細胞儀 (BeckmanCoulter,貝克曼庫爾特 )原理:直接免疫熒光法。 FITC 標記的各型多克隆抗體,加到全血中,與紅細胞膜上的相應的 IgG-Fc 片段結合,經(jīng)過洗滌 ( 和固定 ) 等步驟后,在流式細胞儀上進行分析。標本采集與處理受檢者的準備檢查對象生活飲食處于日常狀態(tài),空腹采血。采集部位靜脈采血抗凝劑EDTA或肝素抗凝血要求1樣本量至少 1ml。2 樣本應在采集后 6 小時內(nèi)處理,冷凍的標本不能用。3 溶血樣本不能用。試劑品牌劑型規(guī)格貯存聯(lián)科成分1 :單克隆抗體液體1ML282:全血溶血試劑液體A:甲酸液體70ML室溫B:碳酸鈉等液體3
2、2ML室溫C:多聚甲醛液體14ML室溫3:鞘液液體20L室溫4:清洗液液體5L室溫5:熒光微球液體10ML2-8質(zhì)控品BEKAMANCOULTER產(chǎn)品,未開瓶的試劑于 2-8 保存,可在有效期內(nèi)保持穩(wěn)定,稀釋的試劑于 2-8 可穩(wěn)定 2 周;每天校準一次:遇特殊情況隨時進行校準。儀器BeckmanCoulter EPICS XL/FC500/Altra操作:1) 按照要求,分別向已編好號的試管中加入10 ul單克隆抗體和同型對照(IgG-FITC)2) 分別向試管中加入混勻的 100u1 抗凝血( 1: 200 稀釋后)。3) 混勻,避光,室溫孵育 20-30 分鐘4) 上機測樣報告結果報告百分數(shù)操作性能精密度批內(nèi)五次重復 CV<2靈敏度500 1000 個熒光素分子參考值IgA<2.78%IgG<2.98%IgM<2.52%IgD<
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