腦脈通有效部位中總蒽醌的含量測定

1、腦脈通有效部位中總蒽醌的含量測定作者：王淑美，馮素香，李淑芳，高淑娟，張丹，李建生【摘要】目的 建立腦脈通中大黃總蒽醌含量測定 方法 。方法 利用大黃蒽醌類化合物能與質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5%醋酸鎂反應(yīng)顯色,在波長512 nm處產(chǎn)生吸收，采用可見分光光度法測定腦脈通復(fù)方中的以游離型蒽醌計(jì)的總蒽醌的含量。結(jié)果 以1,8二羥基蒽醌為對照品，測得腦脈通有效部位中總蒽醌的含量在10%以上，平均回收率為102.91，RSD=0.97。結(jié)論 本方法簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可作為腦脈通有效部位中大黃總蒽醌的含量測定方法。 【關(guān)鍵詞】比色法；腦脈通；總蒽醌腦脈通由大黃川芎葛根等組成，具有解毒降濁益氣活血滌痰開竅瀉下之功。

2、該方 治療 腦梗死效果明顯，可明顯改善生活質(zhì)量，對腦缺血再灌注損傷有明顯的保護(hù)作用1，2。我們采用大孔吸附樹脂純化工藝并結(jié)合藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)純化腦脈通，并得到有效成分含量高，雜質(zhì)含量少的有效部位3，4。根據(jù)復(fù)方有效部位及其主要化學(xué)成分的 研究分析 ,確定腦脈通有效部位中的蒽醌類成分為其有效成分之一。 目前 總蒽醌的含量測定方法主要是比色法。本研究建立一個簡便可靠的腦脈通總蒽醌的含量測定方法，可有效控制腦脈通有效部位的質(zhì)量。1 儀器與試藥 儀器：METTLERAE240型1/100000 電子 分析天平（瑞士梅特勒公司），RE52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠），KQ100型超聲波清洗器(昆山市超

3、聲儀器有限公司)，UV2201SHIMADZU型分光光度計(jì)（日本島津）。材料：大黃、人參、葛根、川芎藥材均購自河南鄭州藥材批發(fā)市場，經(jīng)河南中醫(yī)學(xué)院生藥學(xué)科的陳隨清教授鑒定分別為蓼科植物掌葉大黃Rheum palamatum L.的干燥根及根莖，五加科植物人參Radix ginseng C.A.Mey.的干燥根及根莖，豆科植物野葛Pueraria lobata(Wild.)Ohwi的干燥根，傘形科植物川芎Ligustic um chuanxiong Hort.干燥根莖。1，8二羥基蒽醌對照品購自 中國 藥品生物制品檢定所。醋酸鎂、甲醇等均為分析純。2 方法與結(jié)果 2.1 溶液的制備2.1.1 對

4、照品溶液的制備 精密稱取1，8二羥基蒽醌0.01009 g，置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻即得。2.1.2 供試品溶液的制備 精密稱取有效部位樣品10 mg至圓底燒瓶中，加冰醋酸25%鹽酸（體積比182）20 mL3,溫水浴水解45 min，冷卻，移入分液漏斗中，三氯甲烷萃取至三氯甲烷層近無色，棄去水層。合并三氯甲烷液，用蒸餾水洗至水層近無色，三氯甲烷層移入蒸發(fā)皿中水浴蒸干，甲醇定容至10 mL容量瓶中，即得。2.1.3 陰性樣品溶液的制備 按全方比例分別稱取除大黃外其他藥材適量,按有效部位制備工藝制得缺大黃的陰性樣品,按“2.2”項(xiàng)方法制得陰性樣品溶液。2.2 檢測波長

5、的選擇精密吸取對照品溶液2 mL，置25 mL容量瓶中，加質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5%醋酸鎂甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。供試品溶液1 mL置10 mL的容量瓶中，加質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5%醋酸鎂甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。按供試品顯色方法制得陰性對照溶液。將上述溶液置于紫外分光光度計(jì)中，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5%醋酸鎂甲醇溶液為空白參比溶液，400800 nm范圍內(nèi)掃描測定吸收光譜。1，8二羥基蒽醌對照品溶液加質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5%醋酸鎂甲醇顯色后的最大吸收波長為512 nm，供試品溶液在相同波長處有最大吸收，陰性供試品無干擾。見圖1。2.3 顯色穩(wěn)定性的考察取顯色后的對照品溶液和供試品溶液，分別放置0、0.5、1、2

6、、4 h后，于512 nm處測定其吸光度。結(jié)果吸光度的RSD值分別為0.75%和0.47%，表明對照品和供試品溶液顯色后4 h內(nèi)基本穩(wěn)定。2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備精密吸取對照品溶液(0.100 9 mgmL-1) 0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mL置25 mL容量瓶中，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5%醋酸鎂甲醇稀釋至刻度，分別于512 nm處測定吸光度。以1，8二羥基蒽醌對照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程：=0.176+18.992A（r=0.999 2）。結(jié)果表明，1，8二羥基蒽醌在2.01816.144 gmL-1范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系。

7、A.1,8二羥基蒽醌；B.供試品溶液; C.陰性樣品圖1 紫外吸收光譜圖（略）Fig.1 UV spectrogram2.5 精密度試驗(yàn)精密吸取對照品溶液(0.100 9 mgmL-1)2 mL置25 mL容量瓶中，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5%醋酸鎂甲醇稀釋至刻度，于512 nm處連續(xù)測定6次，記錄其吸光度，結(jié)果表明，該 方法 的精密度良好。2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)取有效部位樣品10 mg，精密稱定，按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別于配制溶液后0、1、2、3、4、6 h顯色測定其吸光度， 計(jì)算 含量的RSD值為1.01%，表明樣品溶液在6 h內(nèi)穩(wěn)定。2.7 回收率試驗(yàn)取同一批有效部位樣品5份，每份約5

8、 mg，精密稱定，分別精密加入質(zhì)量濃度為0.55 mgmL-1的對照品溶液1 mL，蒸干后按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，最后定容至10 mL的容量瓶中。精密吸取供試品溶液1 mL置10 mL的容量瓶中，搖勻，即得。5份樣品分別顯色后于512 nm處測定吸光度，計(jì)算含量，總蒽醌的平均回收率為102.91%，RSD=0.97%。2.8 重復(fù)性試驗(yàn)取同一批有效部位樣品5份，每份約10 mg，按“2.2”項(xiàng)下方法制備，分別顯色后于512 nm處測定吸光度，計(jì)算含量，結(jié)果表明,該方法的重復(fù)性良好。2.9 樣品含量測定取3批有效部位樣品各5份，每份約10 mg，精密稱定，按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試

9、品溶液，最后定容至10 mL的容量瓶中。精密吸取供試品溶液1 mL置10 mL的容量瓶中，加質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5%醋酸鎂甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。分別于512 nm處測定其吸光度，計(jì)算樣品的含量。結(jié)果見表1。3 討論 3.1 中國 藥典2005年版一部中，大黃樣品的制備采用的是8%的鹽酸水解5，而在實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)采用此方法測定含量有些偏低，因此我們對酸水解條件進(jìn)行了篩選，選擇了鹽酸、硫酸、鹽酸與冰醋酸的混合酸進(jìn)行對比 研究 ，由測定結(jié)果可知，采用鹽酸與硫酸水解方法所測定的含量偏低，故選擇鹽酸與冰醋酸混合酸作為水解的方法。表1 樣品含量測定結(jié)果（略）Tab.1 Results of sample

10、s determination(n=5)3.2 本文建立了腦脈通有效部位中總蒽醌的含量測定方法，并進(jìn)行了方法學(xué)考察試驗(yàn)研究，結(jié)果表明符合定量 分析 要求。該方法重復(fù)性、精密度、穩(wěn)定性良好，而且操作簡便，分析快速，可作為腦脈通有效部位質(zhì)量控制方法之一。3批樣品含量測定結(jié)果，固化物中總蒽醌的含量均高于10%?！?參考文獻(xiàn) 】 1 任小巧,李建生,封銀曼,等.腦脈通對老齡大鼠腦缺血/再灌注損傷腦保護(hù)作用的研究J.中國中藥雜志,2004，29(1):66-68.2 李建生,鄧西方,任小巧.腦脈通對老齡大鼠腦缺血再灌注細(xì)胞因子的 影響 J.中國醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2004,19(8)：471.3 王淑美，馮素香，梁生