α－萘異硫氰酸酯誘導(dǎo)大鼠肝損傷機(jī)理及中藥的保護(hù)作用

1、萘異硫氰酸酯誘導(dǎo)大鼠肝損傷機(jī)理及中藥的保護(hù)作用         作者;周文柱，孫立，蘇伯固，馮秉安【摘要】  目的  擬通過對(duì)萘異硫氰酸酯(ANIT)誘導(dǎo)大鼠肝損傷發(fā)病機(jī)理的探討，對(duì)引起肝損傷的因素進(jìn)行系統(tǒng)的研究。方法  選擇S-D大鼠，雄性，隨機(jī)分4組，檢測(cè)數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用方差分析，相關(guān)分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。結(jié)果  -大鼠經(jīng)ANIT染毒后，病理切片顯示肝損傷明顯，匯管區(qū)有大量中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。經(jīng)金石散及地塞米松治療后，生化指標(biāo)均有所下降，中藥金石散優(yōu)于地

2、塞米松，血生化指標(biāo)與PLA2活性相關(guān)分析顯示，呈正相關(guān)。結(jié)論   ANIT誘導(dǎo)的肝毒性損傷程度與肝組織勻漿PLA2活力呈正相關(guān)，應(yīng)用抑制劑降低PLA2活力，肝損傷程度也減輕，中藥金石散具有降低PLA2活性，減輕肝毒性損傷。        【關(guān)鍵詞】  ANIT；   肝損傷；   磷脂酶A2；  金石散        A study of ANIT-induced liver injury in

3、rats and the protective effect of herb               【Abstract】  Objective  To search the factors of liver injury via the ANIT-induced liver injury in rats.Methods  Male Sprague-Dawley rats，were divided into 4 group

4、s，data were analyzed using a completely randmized factorial ANOVA and linear correlation.Results  After ANIT intoxication，the necrosis of hepatic cell and neutrophil infiltration im periportal region of the liver were observed in liver setions.Jinshisan can reduce the ALT，the TBIL.PLA2 correlat

5、ed positively with ALT、AKP and TBIL.Conclusion  The severity of ANIT-induced liver injury correlated positively with the PLA2.Jinshisan can protect against the rat ANIT-induced liver injury.        【Key words】  ANIT；  liver injury；  PLA2；  Jin s

6、hi san         肝毒性損傷在臨床工作中經(jīng)常會(huì)遇到，是肝硬化、門脈高壓等嚴(yán)重危害人民健康疾病的基礎(chǔ)性病變。本實(shí)驗(yàn)以大鼠為研究對(duì)象，探討萘異硫氰酸酯(ANIT)誘導(dǎo)肝毒性損傷的機(jī)理，觀察大鼠血清ALP、AKP、TBIL的變化，以及肝組織勻漿PLA2活性與上述生化指標(biāo)之間的關(guān)系。同時(shí)研究中藥金石散在ANIT誘導(dǎo)肝毒性損傷中有何作用。        1  材料與方法         1.1 

7、 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物   采用雄性S-D大鼠，體重200250g（大連醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供）。        1.2  主要試劑和儀器   ANIT(北京通縣育才精細(xì)化工廠)；    卵磷脂（上海滬通研究所）；    地塞米松（天津藥業(yè)有限公司）；    金石散（大連醫(yī)科大學(xué)附屬二院中藥制劑室）；    721分光光度計(jì)（上海第三分析儀器廠）；數(shù)字顯示酸度計(jì)（PXJ-IB型

8、）（鄭州電子儀器廠）。        1.3  實(shí)驗(yàn)方法          動(dòng)物分組  采用雄性S-D大鼠72只，體重200250g，普通飼養(yǎng)，隨機(jī)分成組，每組18只，分別為：(1)空白組，(2)模型組，(3)金石散治療組，(4)地塞米松治療組。首先，用香油配制ANIT溶液，濃度為20mg/ml，按100mg/kg體重，（2）、（3）、（4）組一次性灌胃染毒。2天后，每組斷頸處死大鼠6只，進(jìn)行各項(xiàng)檢查。余下的大鼠處理如下：（1）、（2）組予以灌注

9、生理鹽水，1.0ml/100g體重/d，分2次灌胃。（3）組予以金石散20mg/100g體重/1.0mlNS/d，分2次灌胃。（4）組予以地塞米松0.05mg/100g體重/1.0mlNS/d，分兩次灌胃。于4天后、6天后分批斷頸處死大鼠，留血清檢測(cè)肝功能生化指標(biāo)，取肝臟做組織勻漿檢測(cè)PLA2活性及光鏡檢查。          肝功能的血清生化指標(biāo)測(cè)定   血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶賴氏比色法； 血清堿性磷酸酶磷酸苯二鈉法； 血清總膽紅素-甲醇法。      &

10、#160;   PLA2的測(cè)定   采用改進(jìn)的微量測(cè)定法進(jìn)行。          肝組織的光鏡檢查  光鏡：取新鮮肝組織，切成0.5cm厚的小塊，置10%甲醛固定液中，常規(guī)石蠟包埋切片，HE染色。        1.4  統(tǒng)計(jì)學(xué)方法  每組數(shù)據(jù)均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。用方差分析和相關(guān)分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，以P<0.05為顯著性判定標(biāo)準(zhǔn)。     

11、0;  2  實(shí)驗(yàn)結(jié)果        2.1  實(shí)驗(yàn)大鼠血清生化指標(biāo)的變化          血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）  S-D大鼠經(jīng)ANIT染毒后2天，ALT迅速升高，是空白組的5.39倍(P<0.01)，天后，ALT已開始下降但仍是空白組的3.77倍(P<0.01)，而金石散、地塞米松治療組ALT下降更加迅速，與模型組比較差異有顯著性(P<0.01)，天后，模型組與地塞米松組差異已無顯著性，而模型組

12、與空白組差異有顯著性(P<0.01)，模型組與金石散組差異仍有顯著性(P<0.01)，但有所接近。見表。表1  大鼠血清ALT活性  （U/L，x±s）注：n=6，與模型組比較，*P0.05，*P0.01    血清堿性磷酸酶(AKP)    大鼠染毒2 天后，AKP增加與ALT 相似，是空白組的3.2倍(P<0.01)。天后已趨下降，但模型組與各組比較差異有顯著性(P<0.01)。天后，已恢復(fù)正常，差異無顯著性(P>0.05)。見表。表2  大鼠血清AKP  (U/L，x±s) 注：n=6，與模型組比較，*P0.01