waters液質(zhì)聯(lián)用

1、1. 適用范圍 本設(shè)備配備ACQUITY UPLC液相色譜儀、XeVo TQ- SnIiCro MS/MS質(zhì)譜儀，適用于食品、藥品中各種有機(jī)物的定性、定 量分析，是一種具有高靈敏度的檢測儀器，儀器由主機(jī)、計(jì)算機(jī)和數(shù) 據(jù)處理軟件等組成。2. 職責(zé)2.1操作人員按照本規(guī)程操作儀器，認(rèn)真填寫實(shí)驗(yàn)使用記錄。2.2保管人員負(fù)責(zé)對儀器進(jìn)行定期維護(hù)和保養(yǎng)。2.3科室負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)監(jiān)督檢查規(guī)程的執(zhí)行。3. 操作程序日常操作步驟：準(zhǔn)備UPLC -設(shè)置樣品表一-運(yùn)行樣品一-定量 打印報(bào)告。注：如果一個(gè)星期內(nèi)不運(yùn)行樣品請不要關(guān)質(zhì)譜儀，使其保持真空。 建立新方法和ProjeCt的操作步驟：準(zhǔn)備UPLC -建立新的 PrO

2、jeCt -用標(biāo)準(zhǔn)品調(diào)諧一-編輯質(zhì)譜方法一-編輯UPLC方法一 一設(shè)置樣品表一-運(yùn)行樣品一-定量一- 打印報(bào)告。3. 1開機(jī)：3.1. 1徹底開機(jī)順序（儀器己關(guān)閉）確定MS及其它儀器電源電纜己 連接,開氮?dú)獍l(fā)生器、開氮?dú)?，小?. ImPaO打開計(jì)算機(jī)電源 等待WindoWS正常啟動(dòng) 電腦界面右下角網(wǎng)絡(luò)圖標(biāo)紅叉。打開UPLC 自動(dòng)進(jìn)樣器電源，等到電腦界面右下角網(wǎng)絡(luò)圖標(biāo)出現(xiàn)感嘆號！。打開 UPLC泵電源，等約30s或者是有響聲。打開質(zhì)譜電源,等待5min, 離子源透視鏡里面亮。打開MaSSIynX軟件，masslynx主界面左側(cè) instrumeIltMaSS tune界面菜單欄 VaCUUm

3、PUmP 同樣界 面左側(cè) 偏上 diagnosticsVaCUUm analyser MSI turbospeed：%要在5分鐘內(nèi)升到80。至少抽真空4個(gè)小時(shí) 查看真空狀 態(tài)主界面mass COnSOIe 界面左側(cè)XeVO tq ms detector加號展開- -ms display > 碰撞室真空度 >達(dá)到 1. 32E5 mBaro3.1.2日常開機(jī)順序（儀器未關(guān)閉） 開氮?dú)獍l(fā)生器、開氮?dú)?，?表0. Impa,打開MaSSIynX軟件，進(jìn)入工作站。3. 2建立項(xiàng)目 點(diǎn)擊file下的PrOjeCt WiZard ,出現(xiàn)對話框，單擊 yes出現(xiàn)對話框,輸入PrOjeCt , I

4、OCatiOn為C: MS DATA ,單擊 next ,選擇 Create existing PrOjeCt as template,并以 C: masslynxdefault. PrO 為模板，單擊 finish .點(diǎn)擊 OKo3.3準(zhǔn)備UPLC系統(tǒng) 準(zhǔn)備液相的一般流程：準(zhǔn)備流動(dòng)相 > 準(zhǔn)備樣 品 > 灌注二元泵 > 灌注自動(dòng)進(jìn)樣器 > 建立液相方法 > 平衡液相 3. 3.1.準(zhǔn)備流動(dòng)相 用0.22UnI的膜過濾緩沖液，所有的緩沖液和 超純水都要新配制，超純水和緩沖液使用不得超過二天，緩沖鹽一定 要是可揮發(fā)的，而且濃度不要大于IOnlMO3. 3. 2.樣品

5、要求所有樣品盡量用流動(dòng)相初始梯度比例的溶劑來溶解，并用0. 22UnI的膜過濾。3. 3. 3灌注二元泵 在MaSSIynX主界面，單擊MS Console,進(jìn)入 UPLC 交互顯示界面，點(diǎn)擊左欄 ACqUity UPLC SySten> COntroI > Start UP SyStem ,單擊QSM,選擇需要用到的流動(dòng)相位置，如A和 B,選擇SeaI wash,時(shí)間設(shè)為3分鐘。單擊SM,選擇StrOng WaSh 5 CyCIeS , SamPle Syringe 20 單擊 EqUiIibrate to Method,才各流 速設(shè)為0 ,單擊Start開始灌注.時(shí)間大約為9

6、min左右。設(shè)定流 速，平衡液相在MaSSIynX主界面，單擊InIet MethOd圖標(biāo),打 開液相方法編輯窗口，單擊StatUS > ACQUlTY AdditiOnaI StatUS ,進(jìn)入液相控制臺(tái)，單擊A或B或流速的位置，出現(xiàn)流速、 比例設(shè)定對話框，設(shè)定液相流速與比例，單擊對勾，開始平衡液相， 如果后面要做調(diào)諧，可設(shè)定流速0.2 mlmin,有機(jī)相與水相的比例為 50:50o3.4準(zhǔn)備質(zhì)譜3.4. 1.計(jì)算化合物單同位素質(zhì)量數(shù) MaSSlynX主界面> 單擊 Tools> MOleCUIar Weight Calculator,輸入化合物的分子式（大寫 -注意C1、

7、Br等正確的輸入方法），注意選單同位素MOnOiSO , IOn Mode：離子化模式，+ve正離子，-Ve負(fù)離子，單擊CaICUIateo 3. 4. 2用IntelIiStart進(jìn)行自動(dòng)調(diào)諧 在MaSSIynX主界面單擊MS TUne圖標(biāo)，打開調(diào)諧窗口，單擊IOn MOde > ES+或ES-,單擊 APl GaS圖標(biāo)打開氮?dú)?，單擊打開高壓 選擇MS MOde圖標(biāo)，設(shè) 定液相流速0.2 mlmin,水：乙膳的比例為50:50。把標(biāo)準(zhǔn)品調(diào)諧液 放入質(zhì)譜儀塑料瓶位置處的A （或B）號位（注:濃度在200 PPb左右） 單擊 FIUidiCS ,選擇 ReSerVOir 為 A , FIO

8、W State 為 LC 模式，點(diǎn)擊 PUrge圖標(biāo)。PUrge結(jié)束后，將FIOW State改為COmbine模式，設(shè) 定FUnCtiOn為MSI scan, MaSS為計(jì)算出化合物的質(zhì)量數(shù)，SPan為 5,點(diǎn)擊進(jìn)樣，開始進(jìn)樣，直到離子的響應(yīng)比較穩(wěn)定。保存調(diào)諧文 件：FiIe > SaVe AS至己建的項(xiàng)目下。在MaSSIynX主界面，選擇 MS COnSOIe> XeVO TQ MS DeteCtOr 選擇 Intellistart ,選擇 SamPIe TUne and DeVeIOP MethOd , ES+ 單擊 Start 圖標(biāo)，出現(xiàn) IntelIiStart 自 動(dòng)調(diào)

9、諧 編輯窗 U ,選擇 SWitCh to AdVanCed mode , 輸 入 COmPOUnd name （化 合物 名稱），MoleCUlar Mass/FOrmUla （分子量或分子式） AddUCt A+ （ M+H +, 選擇 LOad EXiSting SamPIe TUne , 在 SamPIe TUne Name 方框后的“。”處調(diào)用開始保存的調(diào)諧文件，在DeVeIOP MRM Method前 的方框打鉤，并在方框出輸入MRM方法的文件名，路徑為己建的項(xiàng) 目下。在 Print RePOrt 前方框打鉤，COne VOItage , COlIiSiOn Energy 處為默認(rèn)

10、值，F(xiàn)IUidiCS 下的 FIOW Path 選擇 COmbined 模 式，SamPIe ReSerVOir 和 SamPIe FlOW Rate 參數(shù)與 FUldiCS 下 COmbined模式下的進(jìn)樣參數(shù)保持一致。單擊右邊的Start開始自動(dòng) 調(diào)諧。調(diào)諧成功，會(huì)有綠勾出現(xiàn)，查看intellistart報(bào)告。3. 4. 3查看intellistart中自動(dòng)生成的質(zhì)譜方法：從MaSSLynX主窗口，單擊MS MethOd,出現(xiàn)MS Method編輯對話框，選擇 FiIe > open,選擇IntelIiStart中保存的質(zhì)譜方法的文件，雙擊方 法，如發(fā)現(xiàn)自動(dòng)調(diào)諧生產(chǎn)的質(zhì)譜方法中部分參

11、數(shù)有誤，則可以在 ChanneIS窗口手動(dòng)修改參數(shù)，填寫relentinon WindOW中的end時(shí) 間，此時(shí)間必須與液相色譜方法運(yùn)行時(shí)間保持一致，選擇AUtO Dwell,單擊OK,點(diǎn)擊File> SaVe As,保存質(zhì)譜方法文件。3. 5建立液相方法3.5. 1編輯液相方法 在液相方法編輯窗口，單擊Inlet,輸入溶劑 名稱，run time及梯度洗脫程序，梯度洗脫程序中最后階段時(shí)間必須 與run time符合，單擊OK,選擇FiIe > SaVe AS保存方法,單擊 LOad MethOd ,平衡液相。3. 5. 2建立樣品列表 在MaSSIynX主窗口，選擇 FiIeNe

12、W建 立一個(gè)空白的表SamPIeIiSt o輸入文件名FiIe Name ,樣品信息 FiIe TeXt ,雙擊MS FiIe ,選擇質(zhì)譜方法,雙擊Inlet File,選 擇液相方法，在BOttle中輸入樣品瓶的位置,在InjeCt VOlUme 中輸入進(jìn)樣體積，可右鍵Add,增加樣品表的行數(shù)，保存樣品表： FiIe > SaVe AS 。3. 6數(shù)據(jù)采集和處理3. 6. 1.選中要釆集的樣品，單擊RUn > Start ,選擇ACqUire SamPIe Data only,單擊OK開始進(jìn)樣并采集。3. 6. 2在采集過程中，可查看色譜圖，點(diǎn)擊ChrOmatOgram窗口，點(diǎn)

13、擊Real-time UPdate icon .如I果不能見整個(gè)TIC圖,單擊DefaUIt Range圖標(biāo)。如果方法中包括多個(gè)通道，可通過Display > MaSS查 看 如果方法中包扌舌多個(gè)檢測器或多個(gè)Function,可通過DiSPIay > TIC查看3.6.3處理多個(gè)FUnCtiOn的數(shù)據(jù) 如果質(zhì)譜方法中有多個(gè) FUnCtiOnJ 如有三個(gè) FUnCtion,如想看第二個(gè) FUnCtiOnJ MS SCan 的數(shù)據(jù)。3. 6. 3. 1在色譜圖窗口，點(diǎn)擊DiSPIay > TIC,選中MS SCan ,選擇 Add trace ,單擊 OKo3. 6. 3. 2如

14、想查第二個(gè)Function, DaUghter SCan質(zhì)譜圖,在色譜 圖中，選擇 DiSPIay > TIC,選擇 SCanWaVeDS Add trace ,單擊 OKO3. 6. 3. 3.選擇PrOCeSS > COmbine SPeCtra.分別用右鍵輸入信號 和本底噪音. 單擊OK.得到DaUghter SCan的質(zhì)譜圖，單擊 PrOCeSS > Smooth,單擊 OKo3.7數(shù)據(jù)處理-外標(biāo)定量法3. 7. 1 在 MaSSlynX 主頁面單擊 T ar get 1 ynx/Ed i t method,出現(xiàn)定量 方法編輯對話框，單擊新建方法圖標(biāo)，新建一個(gè)定量方法

15、。3. 7. 2單擊Add new COmPOUnd （添加新的化合物）圖標(biāo)，添加一個(gè)新 的化合物。3. 7. 3 單擊菜單欄 UPdate,選中 QUantitatiOn IOn 和 COmPOUnd Name （前面打勾）在MaSSlynX主頁面，打開中等偏下低濃度標(biāo)準(zhǔn)品的色 譜圖，DiSPIay/Mass ChrOmatOgranI選出要定量的化合物的離子對， 一般強(qiáng)度高的化合物用來做為定量離子，另一個(gè)離子對則作為確證離 子，用鼠標(biāo)右鍵在定量離子對色譜圖上拉一下，則COmPOUnd name, ACqUiSition FUnCtion Number, QUantification Tra

16、ce, PrediCted RetentiOn Time和RetentiOn Time WindOW將自動(dòng)輸入到定量方法 中。注意：在色譜圖上拉的時(shí)候，要遵循兩個(gè)原則，拉的位置要以色 譜峰的峰尖左右對稱，拉的寬度要超過峰的起點(diǎn)和終點(diǎn)。3. 7.4單擊工作曲線圖標(biāo)，在工作曲線設(shè)置頁面，填入 COnCentratiOn UnitS:濃度單位，例如 ng/ml, ug/kg, ppb, PPnl 等 o COnCentration Of Standard: LeVeI -選擇 Cone. A。 POIynOmiaI TyPe -選擇Linear.（可根據(jù)自己行業(yè)的規(guī)定） CaIibratiOn Or

17、igin_ 選擇 exclude （排除原點(diǎn)），include （包含原 點(diǎn)），force（強(qiáng)制過原點(diǎn)）Weithting FUnCtion（權(quán)重）_l/x （根據(jù) 自己行業(yè)規(guī)定）PrOPagate CaIibratiOn ParameterS_如果所有的化 合物均用相同的工作曲線的參數(shù)，選YeS3. 7. 5打開積分參數(shù)列表，選中APeX TraCk EnabIed（打勾，YES ） , IrItegration WindOW EXtent 輸入 2 , 選中 PrOPagate IntegratiOn ParameterS （打勾），如果色譜峰并不是很對稱的色譜 圖，可先在色譜圖上先設(shè)定參

18、數(shù)，積分，好積分參數(shù)滿意之后， process/integrate,/COPy ,在 Targetlynx r1 Edit/Past 就可 將其粘貼到TargetIynX方法中。建議用APeX TraCk積分方法， SmOOth 方法建議用 SmOOth iteration 1, SmOOth Width 2。重復(fù)上面 的過程，把其他幾個(gè)化合物的信息全部加入，保存方法：File/Save As,保存到當(dāng)前項(xiàng)目的MethDB文件夾中，正確的SamPIeIiSt表格 模板，除了前面進(jìn)樣時(shí)的選項(xiàng)之外，還要有SamPIe type, ConA,等 選中要處理的樣晶，單擊PrOCeSS Samples,

19、出現(xiàn)下圖的對話框，確 保選中，Integrate、SamPIe , CaIibrate Standard , QUantify SamPIeJ選擇剛才編輯的TargetIynX方法，單擊OK后,出現(xiàn)定量結(jié) 果對話框?？筛鶕?jù)自己的需要，用鼠標(biāo)右鍵，Chang COIUmn Order 來增加或減少SUnImary中的選項(xiàng)。3. 8關(guān)機(jī)程序3.8. 1日常關(guān)機(jī)：3.8. 1.1如果流動(dòng)相中有緩沖鹽必須先將緩沖鹽換成水，灌注2分 鐘，流速設(shè)為0. 2mlnin, 80%水相，沖洗至少30分鐘，換成80%有 機(jī)相，沖洗至少20分鐘，停流速，水相，沖洗至少30分鐘，換成 80%有機(jī)相，沖洗至少20分鐘，

20、停流速，柱溫為室溫。3.8. 1.2關(guān)質(zhì)譜：主界面mass tune或者電腦下面儀器圖標(biāo)界面 左側(cè)偏上 fluidicsflow State 選擇為 waste、關(guān)氮?dú)?，mass tune界面或者電腦下面儀器圖標(biāo)工具欄第6個(gè)> 關(guān)高壓mass tune界面右 下角> 等待去溶劑氣溫度降低至100度以下mass tune界面或者電腦 下面儀器圖標(biāo)左側(cè)偏上。ES+sourcetemperaturedesolvation >關(guān)氮?dú)?，點(diǎn)擊氮?dú)獍l(fā)生器開啟開關(guān)。3. 8. 2徹底關(guān)機(jī)3. 8. 2. 1先完成日常關(guān)機(jī)3. 8. 2. 2 泄真空：tune Page > VaCUUn

21、I > Ventyes > 等待渦輪分子泵轉(zhuǎn)速降到10以下,massIynx主界面左側(cè)instrument -MaSS tune 界面左側(cè)偏上 diagnostics VaCUUm SOUrCe turbo SPeed%3. 8. 2. 3退出軟件，其他界面先退出，主界面最后退出3. 8. 2. 4關(guān)質(zhì)譜電源 > 關(guān)所有UPLC電源，計(jì)算機(jī)電源,儀器三個(gè) 電源順序無所謂，關(guān)氮?dú)獍l(fā)生器，氮?dú)狻?. 8. 2. 5如果有UPS,關(guān)閉UPS電源，計(jì)算機(jī)電源。4日常維護(hù)、保養(yǎng)及注意事項(xiàng)4. 1儀器室要保持整潔、干凈、無塵；配套設(shè)施布局合理。4.2儀器室溫度應(yīng)相對穩(wěn)定，一般應(yīng)控制在20

22、-25°C,保持恒溫；相 對濕度最好為50-70%,室內(nèi)應(yīng)備有溫度計(jì)和濕度計(jì)，一般采用空調(diào)和 吸濕機(jī)調(diào)節(jié)溫度和濕度。4.3氣壓過濾機(jī)械泵油，停止樣品采集、停止流動(dòng)相、關(guān)閉高壓、 關(guān)閉所有氣流，關(guān)閉離子源內(nèi)的真空隔離閥。用一字鏢絲刀順時(shí)針方 向擰開機(jī)械泵上的GaS BallaSt閥四分之一圈，運(yùn)行30分鐘后再把 GaS BalIaSt閥旋轉(zhuǎn)到原來關(guān)閉的位置。對于ESI源，至少每星期做 一次，對于APCl源，每天做一次。4.4開高壓之前一定要先開氮?dú)?，關(guān)氮?dú)庵耙欢ㄒ汝P(guān)高壓。4.5 ESl離子化與溶劑密切相關(guān)，在使用某些溶劑和添加物需要注 意以下幾個(gè)方面：三氟乙酸(TFA)多用于蛋白質(zhì)和多肽分析，但對 ESl