禽流感疫苗研究進(jìn)展 (2).docx

1、禽流感疫苗研究進(jìn)展白寧七孫尚芬2,姜振國(guó)21.75安市長(zhǎng)安區(qū)杜曲街道蓄牧爵醫(yī)站，陜西西安710104；2.西安市長(zhǎng)安區(qū)動(dòng)物疾病族防控制中心，陜西西安710000摘要蹤述了目苛世界上的主妥禽流感疫苗，會(huì)病毒滅活疫苗、減在活疫苗、總因工程亞單位疫苗、DNA疫苗、RNA復(fù)制于疫苗、重組璃毒活栽體疫苗、反向遣傳苗、具有交義保護(hù)枚的通用流感疫苗、細(xì)胞苗和件裁因植物疫苗的研究進(jìn)展，為研制出工藝簡(jiǎn)單、成本低廉、保護(hù)力強(qiáng)的禽流感疫苗提供了參考。作者簡(jiǎn)介白寧(1980-),男，陜西長(zhǎng)安人，助理尊成坤，從事動(dòng)物疫病防拉工作,E-n»ail：bainingvetc收稿日期2012-02-11關(guān)鍵詞禽流感病

2、毒;戎苗；研究進(jìn)展中圖分類(lèi)號(hào)S834文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A禽流感(AvianInfluenza,AI)是由正黏病毒科流感病毒屬A型流感病毒引起的一種禽類(lèi)烈性傳染性疾病，可導(dǎo)致家禽、各種野鳥(niǎo)、特別是遷徙水禽的感染，被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(0IE)確立為A類(lèi)傳染病。1878年.Per-roncito首次報(bào)道禽流感病毒(AIV)在意大利雞群中暴發(fā)，隨后在世界各地均有AI暴發(fā)和流行的報(bào)道，給養(yǎng)禽業(yè)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失自1959年以來(lái)，全世界共暴發(fā)了20多次高致病性禽流感(HPAI)。尤其是1997年發(fā)生在我國(guó)香港的禽流感感染人事件及2005年青海湖大量遷徙水鳥(niǎo)感染H5N1死亡事件，更加引起人們對(duì)該病的關(guān)注OA型流感

3、病毒具有典型的宿主特異性，通常感染禽類(lèi)并使其致病的多為H5、H7和H9亞型，但由于流感病毒抗原經(jīng)常發(fā)生變異，旦不具有交叉保護(hù)性，給禽流感的防治帶來(lái)極大的困難。而目前禽流感的危害引起了世界各國(guó)的高度重視，嘗試采取不同的措施來(lái)預(yù)防和控制禽流感。在眾多的防控方法中，疫苗免疫占重要地位。然而由于A(yíng)型流感病毒的高度變異性，各亞型的復(fù)雜性決定了目前傳統(tǒng)疫苗的文章編號(hào)2095-3305(2012)02-062-04保護(hù)力無(wú)法達(dá)到期望效果。為此，筆者將目前世界上主要禽流感疫苗的研究進(jìn)展綜述如下，旨在為研制出工藝簡(jiǎn)單、成本低廉、保護(hù)力強(qiáng)的疫苗提供參考。1全病毒滅活疫苗全病毒滅活疫苗一般是用甲醛滅活的禽流感病毒雞

4、胚尿饕液，輔以佐劑制成的油乳劑疫苗。該疫苗安全性好，具有良好的免疫保護(hù)作用，可制備多價(jià)疫苗，且各亞型之間不產(chǎn)生免疫干擾。試驗(yàn)證明,滅活全病毒疫苗不會(huì)出現(xiàn)毒力返強(qiáng)和變異現(xiàn)象，能夠經(jīng)受同種亞型AIV的攻擊，能為雞群提供良好的免疫保護(hù)。目前，我國(guó)H5、H7亞型禽流感滅活疫苗已研制成功，并取得了良好的免疫保護(hù)效果。但與此同時(shí)，全病毒滅活疫苗也存在一定的問(wèn)題，如疫苗免疫效果是由滅活疫苗的注射劑骨和疫苗中的抗原量決定的，因此滅活苗注射的病毒量要比活疫苗高出許多倍。且制備滅活苗還必須添加佐劑，其生產(chǎn)還需要大量的雞胚，成本非常高，這在禽流感大流行的情況下，雞胚的供應(yīng)將會(huì)成為疫苗生產(chǎn)的一個(gè)限制因素。此外，由Re

5、searchProgressofAvianInfluenzaVaccineBAI>6ngetal(AnimalHusbandryandVeterinaryStationofDuquStreetinXi'an,Xi'an.Shaanxi710014)AbstractResearchprogressofmainavianinfluenzavaccineintheworldtoday,includinginactivatedvirusvaccine,liveattenuatedvaccine,geneticengineeringsubunitvaccine,DNAvaccine

6、,RNAreplicon-basedvaccine,recombinantvirusliving-carriervaccine,reversegeneticsvaccine,crossprotectivevaccine,cellvaccineandtransgenicplantvaccinewasreviewed.Thestudyprovidesreferenceforthepreparationofa-vianinfluenzavaccinewiththeadvantagesofsimpleprocedure,lowcostandstrongprotectiveefficacy.Keywor

7、dsAvianinfluenzavirus;Vaccine;Researchprogress于接種滅活苗的機(jī)體也會(huì)產(chǎn)生針對(duì)病毒內(nèi)部結(jié)構(gòu)蛋白，如NP的特異性抗體，而這類(lèi)抗體是在進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)杳時(shí)的主要判定指標(biāo)，因此滅活苗的應(yīng)用將導(dǎo)致無(wú)法區(qū)分自然感染雞和疫苗接種雞，從而干擾AIV疫情的也測(cè)和流行病學(xué)的調(diào)查。2減毒活疫苗減毒活疫苗是指將野毒株感染雞胚，并在2526氣下連續(xù)傳代得到減毒毒株，即冷適應(yīng)株，該病毒只能在25弋左右復(fù)制，不能在37%T傳代，之后使用該弱毒株免疫使機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫。多項(xiàng)人體和動(dòng)物研究證實(shí)，冷適應(yīng)毒株生物學(xué)性質(zhì)有很好的穩(wěn)定性。弱毒流感疫苗與滅活疫苗的免疫后抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)率都存50%7

8、0%,能夠有效控制流感的流行；對(duì)群體免疫的意義更加重大，對(duì)表面抗原發(fā)生轉(zhuǎn)移的流行株病毒有一定的保護(hù)作用逆。但冷適應(yīng)減毒活疫苗與其他流感病毒可能發(fā)生基因重配得到毒力恢復(fù)的重配株病毒，此外，冷適應(yīng)減毒活疫苗在免疫缺陷患者中使用有致病的風(fēng)險(xiǎn)。3基因工程亞單位疫苗基因工程亞單位疫苗是指利用DNA重組技術(shù)，將編碼病原微生物保護(hù)性抗原基因?qū)胧苄菥?如大腸桿菌)或細(xì)胞，使其在受體中高效表達(dá)，分泌保護(hù)性抗原肽鏈，提取保護(hù)性肽段加入佐劑后免疫動(dòng)物進(jìn)而引起機(jī)體特異性免疫反應(yīng)。血凝素(Hemagglutinin,HA)是構(gòu)成愈流感病毒囊膜纖突的主要成分之一，在病毒吸附及穿膜過(guò)程中起關(guān)鍵作用，可刺激機(jī)體產(chǎn)生中和抗休

9、，為禽流感病毒中最為重要的保護(hù)性抗原。隨著分子克隆技術(shù)的發(fā)展，可將HA基因連接到載體質(zhì)粒上，然后導(dǎo)入表達(dá)系統(tǒng)中進(jìn)行擴(kuò)增和表達(dá)。試驗(yàn)證明，采用H5重組HA佐劑疫苗免疫的痛類(lèi)在攻毒后不排毒。劉明構(gòu)建了桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體，分別表達(dá)了禽流感病毒H5N1的HA基因和NA基因，用這些表達(dá)產(chǎn)物免疫SPF雞，結(jié)果表明，用相同亞型強(qiáng)毒攻擊后,rBacH5免疫組、rBacNl免疫組的保護(hù)率分別為90%、50%,rBacH5和rBacNl聯(lián)合免疫組的保護(hù)率為90%；HA+NA聯(lián)合免疫組只需免疫1次就能取得HA單獨(dú)免疫2次的效果。利用真核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)相應(yīng)的禽流感病毒表面蛋白，如HA、NA和M2,表達(dá)產(chǎn)物純化后作為疫苗。

10、這種亞單位疫苗是病毒粒子的一部分，但不含核酸，具有很好的安全佐，也能刺激機(jī)體產(chǎn)生足夠的免疫力。但亞單位疫苗免疫原性低、持續(xù)時(shí)間短，需要與佐劑合用，成為該疫苗發(fā)展的限制因素。4DNA疫苗DNA疫苗又琮核酸疫苗,是利用重組DNA技術(shù)將保護(hù)性抗原蛋白的基因克隆到真核表達(dá)載體卜，在被直接導(dǎo)入到動(dòng)物體內(nèi)后，保護(hù)性抗原蛋白基因表達(dá)的抗原蛋白經(jīng)過(guò)內(nèi)源性呈給免疫系統(tǒng)，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性的體液免疫和細(xì)胞免疫反應(yīng)。流感病毒是最早用于基因免疫研究的模型。與傳統(tǒng)疫苗相比,DNA疫苗具有許多優(yōu)點(diǎn)。首先,DNA疫苗可誘導(dǎo)長(zhǎng)期或終生免疫；其次，其抗原合成和遞呈過(guò)程與病原體的自然感染很相似，抗原蛋白經(jīng)內(nèi)源性合成后轉(zhuǎn)運(yùn)到紹胞表

11、面，再通過(guò)MHC-I和MHC-II類(lèi)分子直接遞呈給免疫系統(tǒng)，特別是特異性CD8+T淋巴細(xì)胞CTL的免疫反應(yīng)，這些是一般疫苗不可相比擬的；再次，其可同時(shí)引起特異性體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答，增強(qiáng)機(jī)體保護(hù)力；另外，其對(duì)不同亞型的病原體具有交叉抵抗作用，且DNA疫苗基本沒(méi)有毒性逆轉(zhuǎn)的可能，不存在減毒疫苗那樣可能在體內(nèi)毒力回升后致病的危險(xiǎn)；同時(shí)，該疫苗易于實(shí)現(xiàn)聯(lián)合免疫，且其免疫原性較單一，只有編碼所需抗原的血凝素基因?qū)爰?xì)胞后得以表達(dá)，而質(zhì)粒載體沒(méi)有免疫原性，可反復(fù)使用，無(wú)散毒和疾原毒力返強(qiáng)的威脅；最后，其質(zhì)雖易于控制和評(píng)價(jià)，。NA序列可知，純化工藝簡(jiǎn)便，生產(chǎn)迅速、成本低廉，穩(wěn)定性好，便于運(yùn)輸和保存，不需

12、要冷藏。但DNA疫苗的研制和開(kāi)發(fā)才剛剛起步.還有很多關(guān)鍵問(wèn)題亟待解決。首先,所用載體多具有抗生素抗忤，導(dǎo)致被免疫的機(jī)體可能會(huì)對(duì)相應(yīng)的抗生素產(chǎn)生抗體，給一些常見(jiàn)的細(xì)菌性疾病的防治帶來(lái)了困難。第二，目前所研制的DNA疫苗體內(nèi)免疫保護(hù)力還不是很強(qiáng)，這可能與DNA疫苗在機(jī)體內(nèi)的生存和表達(dá)有關(guān)，很有可能是大部分質(zhì)粒被機(jī)體當(dāng)作異物降解，或載體在動(dòng)物體內(nèi)表達(dá)效率不高而降低了DNA疫苗的免疫效果。DNA疫苗正在給免疫預(yù)防治療領(lǐng)域帶來(lái)一場(chǎng)根本性的變革，但在DNA疫苗應(yīng)用于人體之前，還有許多問(wèn)題未完全解決，如疫苗的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、制劑、效用、生產(chǎn)工藝和安全性等。另外,外源核酸是否會(huì)被整合到染色體中引起機(jī)體的癌變及自身免

13、疫反應(yīng)等問(wèn)題，還沒(méi)有確切的結(jié)論，同時(shí)疫苗誘發(fā)的免疫反應(yīng)強(qiáng)度較弱，因此，還需要大量及長(zhǎng)期的考察。5RNA復(fù)制子疫苗RNA復(fù)制子疫苗利用源自病毒的能夠自主復(fù)制的RNA,其結(jié)構(gòu)蠶白基因由外源抗原基因取代，保留了非結(jié)構(gòu)蛋白(RNA復(fù)制酶)基因。RNA復(fù)制酶可使RNA載體在細(xì)胞質(zhì)中高水平復(fù)制，并實(shí)現(xiàn)外源抗原基因的高水平表達(dá)，可同時(shí)誘導(dǎo)細(xì)胞免疫和體液免疫應(yīng)答。大量雙鏈RNA可誘導(dǎo)被感染細(xì)胞凋亡，宿主細(xì)胞的凋亡有利于免疫系統(tǒng)識(shí)別外源抗原。RNA復(fù)制子疫苗克服了傳統(tǒng)疫苗和普通DNA疫苗存在的缺點(diǎn)，具有抗原表達(dá)效率高、安全忤好、應(yīng)用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)，因而被視為一種具有良好發(fā)展前景的疫苗形式。6重組病毒活載體疫苗活載

14、體疫苗是指將病原體的抗原保護(hù)性基因和基因缺失的病毒載體相連接，將制備的含有目的基因的活病毒直接免疫動(dòng)物引起機(jī)體特異性免疫反應(yīng)的疫苗。目前常用的病毒載體有痘病毒、腺病毒、皰疹病毒和逆轉(zhuǎn)錄病毒等，而研究酸多的是利用痘病毒進(jìn)行禽流感活載體疫苗的構(gòu)建表達(dá)HA的重組病毒,該病毒可在體內(nèi)復(fù)制，表達(dá)HA蛋白，從而誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)AIV的免疫保護(hù)力。國(guó)內(nèi)進(jìn)行禽流感活載體疫苗的研究集中在哈爾濱獸醫(yī)研究所，2003年0拓。等構(gòu)建了能同時(shí)表達(dá)H5N1亞型HA基因和NA基因的重組禽痘病毒(Fowlpoxvirus,FPV)重組疫苗，攻毒結(jié)果顯示該疫苗具有良好的免疫保護(hù)性。2004年，喬傳玲等將表達(dá)H5亞型禽流感病毒H

15、A和NA基因的rFPV以不同劑量分別經(jīng)翅下刺珅、肌肉注射、皮下注射、點(diǎn)眼及滴鼻途徑接種于4周齡SPF雞，結(jié)果表明，該疫苗經(jīng)翅下刺種、肌肉注射、皮下注射途徑接種的SPF雞，能夠誘導(dǎo)其產(chǎn)生HI抗體；用100LD«的HPAIV/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)毒株攻擊后，免疫雞無(wú)發(fā)病和死亡。重組病毒所表達(dá)的外源基因在機(jī)體內(nèi)隨載體病毒的復(fù)制而表達(dá)，因此具有不影響疫情監(jiān)測(cè)、安全性高、生產(chǎn)成本低等優(yōu)點(diǎn)。然而,Swaye等研究表明，表達(dá)H5亞型禽流感病毒HA的重組雞痘病毒對(duì)未經(jīng)雞痘免疫的肉種雞和白來(lái)航雞可提供很好的免疫保護(hù)作用，而先用雞痘免疫，再用重組雞痘病毒免疫，則會(huì)大大降低

16、免疫保護(hù)作用甚至導(dǎo)致免疫失敗。因此，禽流感重組痘病毒疫苗應(yīng)避免用于經(jīng)痘病毒疫苗免疫的或自然感染野毒痘病毒的或母源抗體較高的雞群，否則將不能誘導(dǎo)對(duì)禽流感的良好免疫應(yīng)答。7反向遺傳苗反向遺傳苗是指運(yùn)用反向遺傳學(xué)方法從CDNA水平上獲得缺失的病毒粒子，該病毒粒子感染細(xì)胞時(shí)，能在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)病毒蛋白但不能形成有感染力的病毒粒子，進(jìn)而使機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)流感病毒的免疫。利用該技術(shù)獲得的減毒AIV,不僅能產(chǎn)生保護(hù)性抗體，且能誘導(dǎo)很強(qiáng)的細(xì)胞免疫，在組織培養(yǎng)物中生長(zhǎng)良好，是一種很有發(fā)展前途的活疫苗。盧建紅等設(shè)計(jì)帶有BsmBkBsal或Aarl酶切位點(diǎn)的引物，用RT-PCR擴(kuò)增了H9N2亞型禽流感病毒的8個(gè)基因全長(zhǎng)片段

17、，克隆入雙向轉(zhuǎn)錄/表達(dá)載體PHW2000,并在PB2.PB1和NA基因中共引入了3個(gè)沉默突變標(biāo)簽，將其2個(gè)表面基因(HA和NA基因)加上任意1個(gè)內(nèi)部基因，其他5個(gè)內(nèi)部基因來(lái)自A/WSW33,進(jìn)行了6種3+5組合形式的基因重排，將相應(yīng)組合的轉(zhuǎn)錄/表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染COS-1細(xì)胞，均產(chǎn)生了預(yù)期組合、有感染性的H9N2亞型流感病毒，表明親緣關(guān)系遙遠(yuǎn)的流感病毒可互相獲取基因片段產(chǎn)生重蛆病毒，提示表面結(jié)構(gòu)基因和單個(gè)內(nèi)部基因不足以限制H9N2亞型麗流感病毒在哺乳動(dòng)物細(xì)胞上的宿主范圍，同時(shí)也驗(yàn)證了構(gòu)建的8個(gè)轉(zhuǎn)錄/表達(dá)載體均能有效工作，為進(jìn)一步研究H9N2亞型禽流感病毒基因的結(jié)構(gòu)與功能、窿流感病毒與宿主之間的關(guān)系

18、打下了基礎(chǔ)。8具有交叉保護(hù)性的通用流感疫苗-種理想的禽流感疫苗應(yīng)是無(wú)論在禽流感大流行期間，還是過(guò)渡階段，對(duì)各種亞型的流感病毒都有效。A型流感病毒蛋白中較為保守的蛋白為NP和M,是誘導(dǎo)具有交叉保護(hù)性CTL反應(yīng)的特定多肽，因此從理論上講，研究交叉保護(hù)性疫苗有2條途徑。Neirynck等嘗試將保守M2蛋白的膜外區(qū)域(M2e)融合到B型肝炎病毒的核心蛋白上，在大腸桿菌中表達(dá)來(lái)構(gòu)建一種通用疫苗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，腹腔內(nèi)或肌肉注射純化的M2HBC蛋白到小鼠體內(nèi)能提供90%、100%的保護(hù)，其產(chǎn)生的中和抗體具有廣譜性，對(duì)抗A型流感病毒感染的持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)等特點(diǎn)。但如此小的表面抗原是否能對(duì)機(jī)體對(duì)流感病毒的感染提供足夠的保

19、護(hù)，還有待進(jìn)一步和更大規(guī)模的驗(yàn)證問(wèn)。Park等用田醛滅活的流感全病毒疫南經(jīng)鼻腔免疫小鼠發(fā)現(xiàn)，該疫苗能抵御8種不同亞型流感病毒的攻擊，表現(xiàn)出免疫效力的廣譜性；研究培果還顯示,交叉保護(hù)是由于NP基因刺激產(chǎn)生的CTL反應(yīng)引起的*李永清等用研制的M2基因重組馬立克氏病病毒(MDV1)免疫1日齡SPF雞后,從第14天起免疫雞開(kāi)始產(chǎn)生抗體.到第21天時(shí),83%的雞已產(chǎn)生了抗體.為禽流感交叉保護(hù)型疫苗的研究提供了依據(jù)峰9細(xì)胞苗目前，市場(chǎng)上滅活流感疫苗是用雞胚生產(chǎn)的，所以必須及時(shí)充足的供應(yīng)高質(zhì)it雞胚才能保證生產(chǎn)。而用細(xì)胞替代雞胚具有很大的優(yōu)勢(shì)，因?yàn)榧?xì)胞生產(chǎn)的過(guò)程將更快，更易進(jìn)行質(zhì)堂控制和更大規(guī)模的生產(chǎn)。將病

20、毒在無(wú)血清甚至無(wú)蛋白的培養(yǎng)基培養(yǎng)，將明顯減少微生物的感染以及對(duì)雞胚卵清蛋白的過(guò)敏通過(guò)哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的流感病毒制備的滅活疫苗，比雞胚制備的能誘導(dǎo)更多的血清抗體，從而提供更強(qiáng)的保護(hù)"氣目前用于制備流感疫苗的哺乳動(dòng)物細(xì)胞主要是MDCK細(xì)胞和Vero細(xì)胞。10轉(zhuǎn)基因植物疫苗轉(zhuǎn)基因植物疫苗是借助植物遺傳鑄化載體將抗原基因?qū)胫参?使其在植物中表達(dá).生產(chǎn)出能使機(jī)體獲得特異抗病能力的疫苗。植物遺傳轉(zhuǎn)化的受體系統(tǒng)、載體系統(tǒng)和遺傳轉(zhuǎn)化方法，是轉(zhuǎn)基因植物基因工程疫苗生產(chǎn)技術(shù)的關(guān)鍵。轉(zhuǎn)基因植物疫苗具有以下優(yōu)勢(shì):表達(dá)產(chǎn)物具有較好的免疫原性及生物活性；口服植物疫苗能誘導(dǎo)黏膜免疫反應(yīng)；植物細(xì)胞的細(xì)胞壁可起到生

21、物膠囊的作用，更好地刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫反應(yīng)；生產(chǎn)簡(jiǎn)便、成本低廉，不需要冷藏和低溫運(yùn)輸;安全性好,無(wú)外源性病原污染等。宋長(zhǎng)征等利用轉(zhuǎn)基因馬鈴薯表達(dá)AIV的HA蛋白，結(jié)果顯示，用轉(zhuǎn)基因馬鈴薯生產(chǎn)口服AIV疫苗具有較好前景網(wǎng)。11抗獨(dú)特型抗體疫苗抗獨(dú)特型抗體疫苗是根據(jù)JerneNK的免疫網(wǎng)絡(luò)學(xué)說(shuō)研制的眼。一些抗獨(dú)特型抗體能夠和抗體的補(bǔ)位結(jié)合并在空間結(jié)構(gòu)上模擬抗原表位，這類(lèi)抗體可替代抗原作為診斷抗原檢測(cè)機(jī)體的抗體水平，還可作為疫苗免疫動(dòng)物，使動(dòng)物產(chǎn)生免疫應(yīng)答.，抵抗相應(yīng)病原體的侵襲。李寶全等首次用純化的雞抗H9亞型AIV免疫球筮白(IgG)作為抗原免疫家兔，制備兔源的多克隆抗獨(dú)特型抗體(Pab2)

22、,同時(shí)免疫小鼠，制備分泌抗AIV獨(dú)特型單克隆抗(Mab2),試驗(yàn)顯示，所制備的2種獨(dú)特型抗體均能競(jìng)爭(zhēng)性抑制雞抗AIVIgG與AIV的結(jié)合，并能誘發(fā)SPF雞產(chǎn)生血凝抑制抗體。該試驗(yàn)表明，單克隆和多克隆抗獨(dú)特型抗體均能對(duì)免疫雞產(chǎn)生保護(hù)作用E】。,考文獻(xiàn)DJALEXANDER.Anoverviewoftheepidemiologyofavianinfluenza(J).Vaccine,2007,25(30):5637-5644.1 MKOBAYASHI,TTOYODA,A1SHI-HAMA.InfluenzavirusPB1proteinistheminimalandessentialsubunit

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24、gzhen,JJANGYongping,etal.ProtectionofchickensagainsthighlylethalH5N1andH7N1avianinfluenzaviruseswitharecombinantfowlpoxvimsco-expressingH5haemag-giutininandN1neuraminidasegenesJJ.12新型禽流感疫苗與展望目前，新型的禽流感疫苗包括冷適應(yīng)流感弱毒疫苗、基因工程活流感病毒疫苗、復(fù)制缺陷型流感病毒疫苗、RNA復(fù)制子疫苗、表位疫苗、轉(zhuǎn)基因植物疫苗、沙門(mén)氏菌DNA口服疫苗等間。隨著分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)和免疫學(xué)手段的不斷更新，更

25、多、更有效的疫AvianPathology,2003,32(1):25-31.7胡建和，王青，就柏林.禽流感病毒新型疫苗的研充進(jìn)展J.生物技術(shù)通報(bào)，2010(8):35-39.(8|DESWAYNE,JRBECK,NKINNY.FailureofarecombinantfowlpoxvirusvaccinecontaininganavianinfluenzahemagglutiningenetoprovideconsistentprotectionagainstinfluenzainchickenspreimmunizedwithafowlpoxvaccineJ.AvianDiseases,2000,44(1):132-137.9盧建紅，部衛(wèi)星，龍進(jìn)學(xué)，等.H9N2禽流感病毒反向遺傳系統(tǒng)轉(zhuǎn)錄/表達(dá)我體的構(gòu)建和臉位/中國(guó)滿(mǎn)毒學(xué).2005(4):388-392.|10沈志強(qiáng).禽液.感疫苗的研究進(jìn)展J今日富牧善醫(yī).2009：40-41.(11)CHPARK,H