微生物限度檢驗(yàn)操作規(guī)程

1、*有限公司質(zhì)量管理標(biāo)準(zhǔn)文件共3頁(yè) 第1頁(yè)文件名稱(chēng)微生物限度檢驗(yàn)操作規(guī)程文件編號(hào)編制人編制日期修訂人修訂日期審核人審核日期批準(zhǔn)人批準(zhǔn)日期版本號(hào)制作份數(shù)生效日期頒發(fā)部門(mén)分發(fā)部門(mén)1. 目的規(guī)范菌落總數(shù)檢驗(yàn)操作，確保檢驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)有效。2. 適用范圍適用于本公司菌落總數(shù)檢驗(yàn)操作規(guī)程。4.依據(jù)檢驗(yàn)規(guī)程參照GB 4789.2-2016食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 菌落總數(shù) 測(cè)定。4.內(nèi)容4.1菌落總數(shù)定義：食品檢樣經(jīng)過(guò)處理，在一定條件下（如培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度、和培 養(yǎng)時(shí)間等）培養(yǎng)后，所得每g（ml）檢樣中形成的微生物菌落總數(shù)。4.2 儀器與材料：除微生物實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下4

2、.2.1 恒溫培養(yǎng)箱：36C 1C4.2.2 冰箱：2C-5 C，4.2.3 恒溫水浴鍋：46C 1C，4.2.4 天平：感量為0.1g，4.2.5均質(zhì)器4.2.6無(wú)菌吸管：1ml （具有0.01ml刻度）、10ml （具有0.1ml刻度）或微量移液器及 吸頭。4.2.7無(wú)菌錐形瓶：容量瓶250ml、500ml4.2.8無(wú)菌培養(yǎng)皿：直徑90mm4.2.9 pH計(jì)或pH比色管或精密pH試紙4.2.10放大鏡或菌落計(jì)數(shù)器微生物限度檢驗(yàn)操作規(guī)程共 3頁(yè)第6頁(yè)4.3 培養(yǎng)基和試劑4.3.1平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基4.3.2虎紅培 養(yǎng)基4.3.3硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基4.4 操作步驟：4.4.1樣品稀釋?zhuān)?.4

3、.1.1（1） 半固體、固體樣液制作：稱(chēng)取 25g樣品置盛有225ml0.85%的無(wú)菌生理鹽水內(nèi)， 8000r/min-10000r/min 均質(zhì)1min-2min，或放入盛有0.85%的無(wú)菌生理鹽水的無(wú)菌均質(zhì) 袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1min-2min，制成1:10的樣品。（2）液體樣品，以無(wú)菌吸管吸取 25ml樣品置盛有225ml0.85%的無(wú)菌生理鹽水的無(wú)菌 錐形瓶（瓶?jī)?nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無(wú)菌玻璃珠） 或其他無(wú)菌容器中，充分振搖或置于機(jī)械振 蕩器中振搖，充分混勻，制成1:10的樣品勻液。4.4.1.2用1 mL無(wú)菌吸管或微量移液器吸取1： 10樣品勻液1 mL，沿管壁緩慢注于 盛有9mL稀釋

4、液的無(wú)菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用一支無(wú)菌吸管反復(fù)吹打使其混合均勻，制成 1： 100的樣品勻液。4.4.1.3按441.2操作程序，制備10倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用 一次1 mL無(wú)菌吸管或吸頭。4.4.1.4根據(jù)對(duì)樣品污染狀況的估計(jì)，選擇 2個(gè)-3個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣 品可包括原液），在進(jìn)行10倍遞增稀釋時(shí)，每個(gè)稀釋度分別吸取1 mL樣品勻液加人兩個(gè)無(wú)菌平皿內(nèi)。同時(shí)分別取1mL稀釋液加人兩個(gè)無(wú)菌平皿作空白對(duì)照。4.4.1.5及時(shí)將15 mL-20 mL冷卻至46C的平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基（可放置于 46C 1C 恒溫水浴箱中保溫）傾注平

5、皿，并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使其混合均勻。4.4.2培養(yǎng)：4.4.2.1樣品提?。涵傊毯?，將平板翻轉(zhuǎn)，36C 1C培養(yǎng)48h2h。4.4.2.2如果樣品中可能含有在瓊脂培養(yǎng)基表面彌漫生長(zhǎng)的菌落時(shí)，可在凝固后的瓊脂表面覆蓋一薄層瓊脂培養(yǎng)基（約4 mL），凝固后翻轉(zhuǎn)平板，按4.4.1.1條件進(jìn)行培養(yǎng)。4.4.3菌落計(jì)數(shù)：4.4.3.1可用肉眼觀察，必要時(shí)用放大鏡或菌落計(jì)數(shù)器，記錄稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的菌落數(shù) 量。菌落計(jì)數(shù)以菌落形成單位（CFU ）表示。443.2選取菌落數(shù)在30 CFU-300 CFU之間、無(wú)蔓延菌落生長(zhǎng)的平板計(jì)數(shù)菌落總數(shù)。 低于30 CFU的平板記錄具體菌落數(shù)，大于 300 CFU的可記錄為多不

6、可計(jì)。每個(gè)稀釋 度的菌落數(shù)應(yīng)采用兩個(gè)平板的平均數(shù)。4.4.3.3其中一個(gè)平板有較大片狀菌落生長(zhǎng)時(shí)，則不宜采用，而應(yīng)以無(wú)片狀菌落生長(zhǎng)的 平板作為該稀釋度的菌落數(shù)；若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很 均勻，即可計(jì)算半個(gè)平板后乘以2，代表一個(gè)平板菌落數(shù)。4.4.3.4當(dāng)平板上出現(xiàn)菌落間無(wú)明顯界線(xiàn)的鏈狀生長(zhǎng)時(shí)，則將每條單鏈作為一個(gè)菌落計(jì) 數(shù)。4.5結(jié)果計(jì)算：4.5.1若只有一個(gè)稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)，計(jì)算兩個(gè)平板菌落數(shù)的平 均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每克（或毫升）中菌落總數(shù)結(jié)果。4.5.2若有兩個(gè)連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)時(shí)，按下式計(jì)算:Z CN

7、=（n0.1 n2）d式中：N樣品中菌落數(shù)；c 平板（含適宜范圍菌落數(shù)的平板）菌落數(shù)之和；山一一第一稀釋度（低稀釋倍數(shù)）平板個(gè)數(shù)；n2 第二稀釋度（高稀釋倍數(shù)）平板個(gè)數(shù)；瓦C(n i 0.1 n2)dd稀釋因子（第一稀釋度）；示例:稀釋度1:100 （第一稀釋度）1:1000 （第二稀釋度）菌落數(shù)（CFU）232,24433,3523224433 35 二 247272 (0.1 2) 10-4.5.3若所有稀釋度的平板上菌落數(shù)均大于 300CFU則對(duì)稀釋度最高的平板進(jìn)行計(jì)數(shù), 其他平板可記錄為多不可計(jì)，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計(jì)算。4.5.4所有稀釋度的平板菌落數(shù)均小于 30CFU則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。4.5.5若所有稀釋度（包括液體樣品原液）平板均無(wú)菌落生