2022年活化部分凝血活酶時間(APTT)測定

1、 深圳市沙井人民醫(yī)院檢驗科文件編號：SJ/QS-26-OP-XY-059版本版次：A/01臨床血液作業(yè)指導(dǎo)書生效日期：第 1 頁 ，共 2 頁活化局部凝血活酶時間測定APTT1. 工程名稱: 活化局部凝血活酶時間(Activated Partial Thromboplastin Time,APTT)2.檢驗?zāi)康?.1手術(shù)前的檢測2.2 DIC的協(xié)診2.3抗凝藥物治療監(jiān)測2.4凝血因子檢查2.5循環(huán)血液中抗凝物質(zhì)和一些疾病協(xié)診等3.檢驗原理：3.1檢測原理:全自動血凝儀測定,散射光凝固法檢測確定量的血漿樣本50l經(jīng)過一定時間3min溫育后，參加局部凝血活酶時間反響試劑50l，加溫1min，參加0

2、.025MCaCl250l，加溫4min,采用波長660nm的光照射反響物，通過測量散射光光強(qiáng)度的改變來測定凝血過程(纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白)中的濁度變化,從散射光光強(qiáng)度的測定可得凝集曲線，反響物凝固的時間即活化局部凝血活酶時間。3.2反響方法學(xué)溯源:37條件下,以鞣花酸激活因子和,以腦磷脂(局部凝血活酶)代替血小板,在Ca2+參與下,觀察貧血小板血漿凝固所需時間,即為活化局部凝血活酶時間,是內(nèi)源凝血系統(tǒng)較敏感和常用的篩選試驗.4.性能參數(shù)4.1重復(fù)性:CV2%4.2分析和計算參數(shù):報告單位 秒(S)4.3樣本量:50ul,試劑量:50ul激活劑,50ul CaCl24.4檢驗時間:在最長檢

3、驗時間之內(nèi)測出結(jié)果,標(biāo)準(zhǔn)設(shè)置最長檢驗時間:190秒4.5精細(xì)度范圍:1.36.0%5原始樣品系統(tǒng):血漿6.容器和添加劑類型容器采用真空負(fù)壓專用抗凝管,添加劑類型為0.109M枸櫞酸鈉7.試劑及配套品7.1激活劑:Cephaloplastin試劑(Dade Actin Activated Cephaloplastin Reagent)商標(biāo):德靈(DADE BEHRING)7.1.2包裝規(guī)格:10×2ml貨號:B4218-17.1.4成分:腦磷脂(從枯燥兔腦粉中提取)參加含有緩沖液、穩(wěn)定劑和防腐劑的1.0×10-4M的鞣花酸溶液7.1.5使用方法:液體試劑,直接使用7.1.6儲

4、存:未開封試劑28貯存到說明書上有效期，開蓋后28有效期7天,不能冰凍。未被污染的試劑穩(wěn)定期是：283年、18251年、372天;7.2氯化鈣溶液(Calcium Chloride Solution)商標(biāo):德靈(DADE BEHRING)7.2.2包裝規(guī)格:10×15ml7.2.3貨號:ORHO377.2.4成分:0.025mol/L的氯化鈣溶液7.2.5使用方法:液體試劑,直接使用.7.2.6儲存:沒開蓋試劑放28存放至試劑瓶上有效期.開蓋后28有效期7天.7.3清洗液(Clean I):用于測定過程中的吸樣針沖洗7.3.1商標(biāo):希森美康(Sysmex)7.3.2包裝規(guī)格:50ml

5、貨號:GSA500A7.3.4成分:1%次氯酸鈉及活性成分7.3.5使用方法;液體試劑,直接使用7.3.6儲存:沒開蓋試劑放28存放至包裝有效期,開蓋后放于儀器內(nèi)有效期僅存4小時7.4校準(zhǔn)質(zhì)控血漿(Ci-Trol)商標(biāo): 德靈(DADE BEHRING)7.4.2貨號:Level 1(Normai),291070 10×1ml Level 2(Abnormal),291071 10×1ml Level 3(Abnormal),291072 10×1ml7.4.3使用方法:1ml蒸餾水溶解置室溫15分鐘后使用7.4.4儲存:室溫:2h, 28:4h,冷凍分裝保存:-

6、20<2周,-70<6個月8.校準(zhǔn)程序:儀器的驗證和光路系統(tǒng)校正 儀器的驗證由生產(chǎn)商、代理商指定工程師和我科共同完成.燈泡大約半年更換一次,光路系統(tǒng)的校正由代理商完成.9.程序步驟:9.1標(biāo)本采集與要求9.1.1標(biāo)本采集:抽取靜脈血1.8ml,參加到含0.2ml109mmol/L(1:9)的枸櫞酸鈉溶液抗凝真空試管中,并輕輕顛倒10次使之充分混勻,不得有凝塊、不得形成泡沫,總量不得超過2.0±0.2ml,并在試管上做好標(biāo)識.采血應(yīng)防止溶血和脂血,故患者應(yīng)盡量空腹和防止在輸入脂肪乳過程中或其后8小時內(nèi)采血.采血后2小時內(nèi)送到檢驗科,需要運輸時應(yīng)在低溫條件下運輸.采集標(biāo)本時宜

7、“一針見血,以防止組織損傷,外源性凝血因子進(jìn)入針管,最好不與其它實驗一起采集,否那么由于標(biāo)本的分配、分裝而使血液停留在針管的時間延長.9.1.2不合格標(biāo)本的處理 對凝固、有凝塊、嚴(yán)重溶血、重度黃疸、脂血、采血量不符合要求、無條碼或無標(biāo)識等不合格的標(biāo)本,距采集時間超過2小時并且沒有按要求儲存的標(biāo)本,按程序文件?樣品核收、登記和保存程序?處理9.1.3標(biāo)本保存檢測應(yīng)在標(biāo)本采集后2小時內(nèi)完成,28保存不超過4小時,別離后的血漿-20以下密封可保存2周.需長期保存的標(biāo)本在-70下不超過6個月,且只能凍融1次，分析前在37迅速解凍，以減低凝血因子的消耗，解凍后立即測試。分析后的標(biāo)本不保存.9.2檢測前準(zhǔn)

8、備 采樣后應(yīng)盡快別離血漿(60分鐘內(nèi)進(jìn)展),將標(biāo)本1500×g(3000r/min)離心10分鐘,務(wù)使血小板去除;.在進(jìn)展質(zhì)控物和病人標(biāo)本分析檢測前,進(jìn)展儀器狀態(tài)和試劑檢查,確保準(zhǔn)備完好后才能進(jìn)展分析.并將檢查結(jié)果記錄在相應(yīng)的儀器設(shè)備使用記錄表上.9.3病人標(biāo)本的檢測9.3.1開機(jī):開CA1500儀器左側(cè)電源開機(jī)后儀器進(jìn)展自檢、預(yù)熱,當(dāng)屏幕上顯示Ready時可以進(jìn)展試驗9.3.2每日針沖洗:在主屏幕上選Rinse Probe,然后按下Execute進(jìn)展針沖洗9.3.3準(zhǔn)備試劑:按照儀器試劑位置設(shè)定,把上述每項的試劑準(zhǔn)備好,放在相應(yīng)的位置9.3.4準(zhǔn)備反響杯:翻開儀器頂部反響杯儲存槽,

9、查看反響杯是否足夠,需及時添加9.3.5準(zhǔn)備標(biāo)本;將離心好的樣本放在相應(yīng)的樣本架上(一個架子可放10個樣本),準(zhǔn)備好放在進(jìn)樣器上9.3.6輸入試驗工程:按下主菜單上的Work List鍵,在試驗工程鍵點擊APTT,使APTT工程下顯示“-變?yōu)椤?按“或“將需要測試標(biāo)本如上操作選擇;9.3.7輸入樣本號:按下ID No.Entry,按順序輸入樣本的序號或病人的病歷號9.3.8開場檢測:待一切準(zhǔn)備工作就緒,按下屏幕右上角START鍵,儀器開場檢測9.3.9查看結(jié)果:返回主屏幕,檢測的工程如果由“變?yōu)椤罢f明此試驗已經(jīng)完成,然后按下Stored Date(儲存結(jié)果)鍵,屏幕會換到結(jié)果顯示界面,按下邊第

10、一個菜單Graph,查看凝集曲線、吸光度、結(jié)果等,檢查是否有Error錯誤信息,有錯誤報警的標(biāo)本需考慮重測9.3.10關(guān)機(jī)前沖洗針:關(guān)機(jī)前需要洗針,按下Rinse Probe,然后按下Execute9.3.11關(guān)機(jī):回到主屏幕下,切斷儀器電源.10.質(zhì)量控制程序:.10.1質(zhì)控物準(zhǔn)備用1ml蒸餾水溶解一瓶Dade Control質(zhì)控血漿,輕輕顛倒混勻約5秒,置于室溫30分鐘,用前搖勻即可,不要劇烈振搖.將未用完的質(zhì)控血漿在室溫保存2小時、284小時、-20以下冰箱中可保存24小時10.2上機(jī)檢測將質(zhì)控標(biāo)本參加樣品杯,上機(jī)檢測.具體操作詳見CA1500血液凝固分析儀作業(yè)指導(dǎo)書10.3質(zhì)控規(guī)那么1

11、0.3.1質(zhì)控圖正常分布規(guī)律各點應(yīng)分布在均值的兩側(cè),95.45%數(shù)據(jù)落在x±2s內(nèi),99.73%數(shù)據(jù)落在x±3s內(nèi).10.3.2質(zhì)控圖失控規(guī)那么a)一個質(zhì)控物的測定結(jié)果超過x±3s(13s規(guī)那么)；b) 一個質(zhì)控物的測定結(jié)果連續(xù)2次超過x2s或x-2s(22s規(guī)那么)C) 一個質(zhì)控物的測定結(jié)果連續(xù)2次測定其中1次超過x2s另1次超過x-2s(R4s規(guī)那么)d) 一個質(zhì)控物的測定結(jié)果連續(xù)4次超過x+1s或x-1s(41s規(guī)那么)e)連續(xù)10次質(zhì)控物結(jié)果都在均數(shù)的同一側(cè)10x規(guī)那么f)連續(xù)5次測定結(jié)果漸增或漸減5T規(guī)那么10.4室內(nèi)質(zhì)控分析與失控處理10.4.1質(zhì)控結(jié)

12、果分析檢測人員對質(zhì)控結(jié)果進(jìn)展分析,在發(fā)現(xiàn)質(zhì)控數(shù)據(jù)違背質(zhì)控規(guī)那么后,通知組長,協(xié)助處理.組長分析該失控信號的真?zhèn)?并做出是否發(fā)出與測定質(zhì)控品相關(guān)的那批病人標(biāo)本檢驗報告的決定,必要時由檢驗科主任處理.檢測人員填寫失控報告.10.4.2失控原因分析極其處理過程失控信號的出現(xiàn)受多種因素的影響,包括操作上的失誤,試劑、校準(zhǔn)品或質(zhì)控品的失效,儀器維護(hù)不良以及采用的質(zhì)控規(guī)那么、控制限范圍、一次測定的質(zhì)控標(biāo)本數(shù)等.解凍的質(zhì)控血漿一定要先混勻再吸出至樣品杯中,操作時間嚴(yán)格按作業(yè)指導(dǎo)書進(jìn)展.所以,室內(nèi)質(zhì)控失效時.首先要查明失控原因,然后隨機(jī)挑選出一定比例的病人標(biāo)本進(jìn)展重新測定,對失控做出恰當(dāng)?shù)呐袛?失控的處理原那

13、么見程序文件?內(nèi)部質(zhì)量控制管理程序?10.5質(zhì)控標(biāo)本檢測完畢后,及時將質(zhì)控血漿放回冰箱,-20以下密封保存24小時.11.干擾和穿插反響 多種藥物如雙香豆素、鏈激酶、尿酶、口服避孕藥、雌激素、天門冬酰胺酶、鈉絡(luò)酮等可影響PT結(jié)果,如出現(xiàn)異常結(jié)果,需做進(jìn)一步實驗以確定導(dǎo)致異常的原因,溶血、黃疸、脂血標(biāo)本或混濁樣本影響結(jié)果,應(yīng)重新采血.血標(biāo)本與抗凝劑比例不當(dāng)也影響檢測結(jié)果.當(dāng)紅細(xì)胞比積過大(>0.55)或過小(<0.20)可影響測定結(jié)果,這時枸櫞酸鈉的用量為V=0.00185×V1×(1.00-)×100 (注:V-枸櫞酸鈉用量, V1-血量ml,-紅細(xì)胞

14、比積)有以下濃度的物質(zhì)存在時,對APTT的干擾小于10%標(biāo)本類型甘油三酯(mg/dL)血色素(mg/dL)結(jié)合膽紅素mg/dL正常不正常780605505208361012.結(jié)果計算程序的原理由儀器測定反響物凝固的時間即為活化局部凝血活酶時間13.生物參考區(qū)間: 21.1-36.5 S患者結(jié)果超過正常對照10S上有臨床意義14.患者檢驗結(jié)果的可報告區(qū)間21124秒15.警告/危急值A(chǔ)PTT：20S 或80S16.實驗室解釋16.1APTT常用于內(nèi)源性凝血系統(tǒng)、因子的篩選及肝素抗凝治療的監(jiān)測16.2 APTT延長：見于先天性凝血因子缺乏如血友病甲、乙，接觸因子、缺乏、VWF等；多種凝血因子缺乏如

15、嚴(yán)重肝病、維生素K缺乏、DIC、纖溶亢進(jìn)等；血液中有抗凝物質(zhì)存在如凝血因子抑制物、狼瘡抗凝物、華法林或肝素水平增高，F(xiàn)、F及F、F缺乏，大量輸入庫血。16.3 APTT縮短：見于DIC高凝期和妊娠高血壓綜合癥等高凝狀態(tài)以及血栓前狀態(tài)、血栓性疾病。16.4 是監(jiān)測肝素治療的首選指標(biāo)。要注意APTT測定結(jié)果必須與肝素治療范圍的血漿濃度呈線性關(guān)系，否那么不宜使用。一般在肝素治療期間，APTT維持在正常對照的1.53.0倍為宜.16.5對內(nèi)源凝血途徑因子(、)缺乏較CT敏感(血小板異常不影響APTT)能檢出:C小于25%的輕型血友病.對凝血酶原、纖維蛋白原缺乏那么不夠敏感,故APTT延長的最常見疾病為

16、血友病.此時可進(jìn)一步做糾正試驗,即于患者血漿中參加1/4量的正常新鮮血漿、硫酸鋇吸附血漿或正常血清(試劑參見凝血酶原消耗試驗的糾正試驗),再做APTT,如正常血漿和吸附血漿能糾正延長的結(jié)果而血清不能糾正,那么為因子缺乏;如吸附血漿不能糾正,其余兩者都能糾正,那么為因子缺乏;如三者都不能糾正,那么為病理性循環(huán)抗凝物質(zhì)。17.平安性防護(hù)措施17.1在操作儀器時應(yīng)按照儀器作業(yè)指導(dǎo)書進(jìn)展操作,防止受傷、觸電等17.2在進(jìn)展維護(hù)和檢查工作時,請帶上橡膠手套,使用專用的工具和部件,在工作完成后,用消毒液清洗雙手,以免發(fā)生感染17.3在處理血樣時應(yīng)小心慎重,應(yīng)始終戴上橡膠手套,以防止發(fā)生細(xì)菌感染,假設(shè)樣本濺

17、入眼睛或者傷口,須用大量清水沖洗,并立即就診17.4在處理廢液以及裝卸相關(guān)部件時,請勿接觸廢液.如果其中包含血樣,可能導(dǎo)致感染發(fā)生.如果無意接觸血液,首先用消毒液清洗,然后用肥皂清洗17.5在處理試劑時:如果試劑不慎落入眼睛,立即用大量清水沖洗,并承受治療;如果不慎吞入試劑,立即向醫(yī)生求助,喝入大量清水,并盡量嘔出吞入試劑;如果試劑沾上皮膚或者手,用大量清水沖洗;在丟棄廢液和消耗品時,請按照處理醫(yī)療、傳染性、工業(yè)性廢水的步驟進(jìn)展處理,如果其中含有血樣,可能導(dǎo)致細(xì)菌感染.18.變異的潛在來源18.1冷凍血漿可減低APTT對狼瘡抗凝物以及對、HMWK、PK缺乏的靈敏度；室溫下，F(xiàn)易失去活性，因此恰

18、當(dāng)?shù)臉?biāo)本處理非常重要。18.2高脂血癥可使APTT延長18.3抗凝劑：草酸鹽、EDTA、肝素不適用于APTT檢查18.4標(biāo)本采集處理不當(dāng),如血與抗凝劑未充分混勻，出現(xiàn)凝塊，有組織液混入,混勻時過分用力使標(biāo)本溶血，造成結(jié)果變異。如果抽血過慢或不太順利,可能激活凝血系統(tǒng),試驗結(jié)果將會顯示凝血因子活性增高,如果采血時產(chǎn)生泡沫,可能導(dǎo)致纖維蛋白原和V因子及因子變性.18.5纖溶藥物的影響如雙香豆素、鏈激酶、尿酶等，超劑量使用肝素。18.6FDP增加使凝固時間延長。18.7其他藥物的影響如口服避孕藥、雌激素、天門冬酰胺酶、鈉絡(luò)酮等。18.8所有與標(biāo)本接觸的試管、吸管等均采用塑料或硅化處理的19. 參考文獻(xiàn)19.1 葉應(yīng)嫵.王毓三等?全國臨床檢驗操作規(guī)程?第三版，東南大學(xué)出版