食品中有毒有害物質(zhì)的分析課件

1、2022-3-8食品中有毒有害物質(zhì)的分析1食品中有毒有害物質(zhì)的分析食品中有毒有害物質(zhì)的分析氣相色譜氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)和液相色譜的應(yīng)用質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)和液相色譜的應(yīng)用1，飼料中-興奮劑（鹽酸克侖特羅）的分析2. NDMA （N-亞硝胺）的測定3. 海產(chǎn)品中的藥物殘留的分析4. 醬油中的氯丙醇的分析2022-3-8食品中有毒有害物質(zhì)的分析2GC/MSD 或 HPLC-UV法飼料中鹽酸克侖特羅(Clenbuterol)的測定2022-3-8食品中有毒有害物質(zhì)的分析3鹽酸克侖特羅(Clenbuterol) 鹽酸克侖特羅是一種腎上腺素興奮劑，主要用于防治人，畜支氣管哮喘和支氣管痙攣，治療劑量較低。 在飼

2、料中添加鹽酸克侖特羅具有營養(yǎng)再分配作用，提高飼料報酬，提高瘦肉率的效果。 鹽酸克侖特羅在肌肉特別是在內(nèi)臟中會有高濃度的殘留，對人與動物的肝，腎及神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生危害。 歐盟最早頒布法規(guī)禁止其作為飼料添加劑使用，美國和加拿大也禁用，我國農(nóng)業(yè)部亦發(fā)文作出同樣規(guī)定。2022-3-8食品中有毒有害物質(zhì)的分析4鹽酸克侖特羅CHOHCH2NHC(CH3)3 HClNH2ClCl白色結(jié)晶粉末，可從SIGMA 公司購買，可溶于水。2022-3-8食品中有毒有害物質(zhì)的分析5GC/MSD 方法樣品中的鹽酸克侖特羅經(jīng)提取，凈化，衍生化，采用AGILENT5973N GC/MSD SCAN 方式進行測定，外標法定量。方法

3、回收率為92%-99%， 檢出限為低于0.2 ppm。2022-3-8食品中有毒有害物質(zhì)的分析6樣品處理樣品處理提取提?。猴暳蠘悠?0克加50ml 0.01mol/L HCl溶液超聲清洗器萃取30min,離心10 min上清液如有必要，重復(fù)一次2022-3-8食品中有毒有害物質(zhì)的分析7樣品處理樣品處理凈化凈化上清液加2.0 ml 5 mol/L NaOH溶液，加入10 ml 氯仿,振蕩萃取。60水浴中真空蒸發(fā)氮氣吹干重復(fù)二次衍生化加 1.0 ml氯仿溶解，再加入 0.1ml乙酸酐衍生試劑。氮氣吹干，加0.5 ml 氯仿溶解2022-3-8食品中有毒有害物質(zhì)的分析8色譜與質(zhì)譜條件色譜與質(zhì)譜條件色

4、譜條件色譜條件：HP5MS 30m X 0.25mm X 0.25um 進樣口：250，不分流，進樣量2ul， 柱溫：120（3min）20/min 220 （10 min) 質(zhì)譜條件：質(zhì)譜條件：EI源，接口溫度源，接口溫度280 ，質(zhì)量掃描范圍，質(zhì)量掃描范圍50500AMU 溶劑延遲：溶劑延遲：3min。2022-3-8食品中有毒有害物質(zhì)的分析9Clenbuterol 的標準質(zhì)譜圖的標準質(zhì)譜圖2022-3-8食品中有毒有害物質(zhì)的分析10HPLC 法法采用反相高效液相色譜法用水相和有機相二次提取飼料中的鹽酸克侖特羅，可減少飼料中雜質(zhì)的干擾。UV檢測器，C18柱回收率在8595，檢出限 提高選擇

5、性和靈敏度提高選擇性和靈敏度20 attograms / ul of Octafluoronaphthaleneacquired using LVI with ECNI MS on 5973(44,000 molecules / ul )33332022-3-8食品中有毒有害物質(zhì)的分析34PCI+SIM +LVI PCI+SIM +LVI 技術(shù)分析技術(shù)分析NDMANDMA20 20 fg/uLfg/uL200 200 fg/uLfg/uLPCI-NHPCI-NH3 3-SIM chromatograms -SIM chromatograms of 50 uL injections of NDM

6、A of 50 uL injections of NDMA standards in CHstandards in CH2 2ClCl2 2 . . Applying a concentration & recovery Applying a concentration & recovery factor of 500,factor of 500, 200 fg/ul = 0.4ng/l (0.4 ppt) 200 fg/ul = 0.4ng/l (0.4 ppt) 20 fg/ul = 0.04ng/l (40 ppq)20 fg/ul = 0.04ng/l (40 ppq)

7、34342022-3-8食品中有毒有害物質(zhì)的分析35NDMANDMA分析的線性及重現(xiàn)性分析的線性及重現(xiàn)性NDMA quantitation curve from 20 fg/ul to 4000 fg/ulr2 =0.999ConcentrationRSD Ratio 75/92 RSD Response (Area)202.9%2.4%402.2%3.2%2000.7%0.8%20000.7%1.7%40000.3%0.9%Reproducibility in 75/92 m/z ratio and response (n=5)Reproducibility in 75/92 m/z rat

8、io and response (n=5)for concentrations of NDMA from 20 to 4000 fg/for concentrations of NDMA from 20 to 4000 fg/ulul35352022-3-8食品中有毒有害物質(zhì)的分析36結(jié)論結(jié)論 Apex ProSep Preseparation InletApex ProSep Preseparation Inlet Behaves as a Chromatographic Zone Inlet SystemBehaves as a Chromatographic Zone Inlet Sys

9、tem Performs separations in Performs separations in arge arge olume olume nlet modesnlet modes Increased analytical integrity, lowered column and detector maintenance, etc.Increased analytical integrity, lowered column and detector maintenance, etc. Work with authentic samples and a wide variety of

10、matrices Work with authentic samples and a wide variety of matrices has shown the ProSep to be very reproducible and robust. has shown the ProSep to be very reproducible and robust. Injection (1 to 125 ul) is rapid so sample throughput is high. Injection (1 to 125 ul) is rapid so sample throughput i

11、s high. 36362022-3-8食品中有毒有害物質(zhì)的分析37水產(chǎn)品中土霉素、四環(huán)素、金霉素殘留量水產(chǎn)品中土霉素、四環(huán)素、金霉素殘留量的測定方法的測定方法本方法為HPLC方法，最低檢出濃度為0.05mg/kg、0.05mg/kg、0.1mg/kg。原理：原理： 樣品經(jīng)提取，SPE純化，微孔膜過濾，直接進樣，用反相色譜分離，UV檢測，外表法定量。出峰順序為土霉素、四環(huán)素、金霉素。2022-3-8食品中有毒有害物質(zhì)的分析38樣品預(yù)處理樣品預(yù)處理，稱取稱取5.00g肉樣于肉樣于50ml離心管中離心管中加入5高氯酸溶液20ml，勻漿10分鐘，振蕩提取10分鐘，以4000r/min離心10分鐘，取

12、上清液用0.45um濾膜過濾,在離心管殘渣中再加入5%高氯酸溶液10ml,重復(fù)操作一次,合并.上清液上清液2022-3-8食品中有毒有害物質(zhì)的分析39上清液上清液過Sep-C8柱(10ml甲醇、10ml 15EDTA2Na溶液、20ml蒸餾水活化）過30ml蒸餾水洗去雜質(zhì)，10ml甲醇洗脫洗脫液洗脫液40水浴中氮氣吹，濃縮至1ml0.45um濾膜過濾樣品溶液樣品溶液2022-3-8食品中有毒有害物質(zhì)的分析40分析條件分析條件儀器條件儀器條件：HP1100 UV 檢測器色譜條件：色譜條件：柱ZOBRBAX SB18，4.6mm X 250mm,ODS-C18(HP) 檢測波長:355nm 柱溫:

13、37 流速:0.8ml/min 進樣量: 30ul 流動相: 乙晴/0.01M/磷酸二氫鈉溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH2.5) 26:74 (V/V)2022-3-8食品中有毒有害物質(zhì)的分析41酸水解植物蛋白調(diào)味液中三氯丙醇的測定酸水解植物蛋白調(diào)味液中三氯丙醇的測定1. 三氯丙醇問題的提出三氯丙醇問題的提出: - 1988年年Velisek等在醬油中發(fā)現(xiàn)一種有機成分等在醬油中發(fā)現(xiàn)一種有機成分-氯丙醇以來氯丙醇以來, 引起了食品學(xué)界的高度重視引起了食品學(xué)界的高度重視. - 1991年年Collier等對氯丙醇的形成機理做了進一步的研究等對氯丙醇的形成機理做了進一步的研究; - 1993年世界衛(wèi)生組織對氯

14、丙醇的毒性提出了警告年世界衛(wèi)生組織對氯丙醇的毒性提出了警告; - 1995年歐共體委員會食品科學(xué)分年歐共體委員會食品科學(xué)分(ECSCFF)對氯丙醇的毒理作了對氯丙醇的毒理作了 評價評價,并指出氯丙醇作為一種致癌物并指出氯丙醇作為一種致癌物,其最低閥值應(yīng)為不檢出為宜其最低閥值應(yīng)為不檢出為宜.2022-3-8食品中有毒有害物質(zhì)的分析422.氯丙醇的來源氯丙醇的來源一一.脂質(zhì)脂質(zhì): 蛋白質(zhì)水解可用酸水解和堿水解,但是堿水解會引起精氨酸、胱氨酸及部分賴氨酸被破壞，因此工業(yè)上是采取濃鹽酸水解植物蛋白質(zhì)或動物蛋白質(zhì)的方法來生產(chǎn)的。在原料植物/動物蛋白質(zhì)中有脂質(zhì),主要有三酰甘油酯類和甘油磷酯類,而這些脂質(zhì)在

15、濃鹽酸中會發(fā)生水解反應(yīng),產(chǎn)生氯丙醇.二二.某些環(huán)氧樹脂某些環(huán)氧樹脂: 以表氯丙醇為單體制成的環(huán)氧樹脂已廣泛地應(yīng)用在涂料,粘結(jié)劑及乙烯樹脂的穩(wěn)定劑,環(huán)氧樹脂是目前食品工業(yè)中的主要包裝材料之一,而表氯丙醇可水解為3-氯丙醇.三三.其他來源其他來源: 袋泡茶的包裝袋;以含氯的凝聚劑作為水的凈化劑;以3-氯-1,2-環(huán)丙烷來加工的變性淀粉.酸水解植物蛋白調(diào)味液中三氯丙醇的測定酸水解植物蛋白調(diào)味液中三氯丙醇的測定2022-3-8食品中有毒有害物質(zhì)的分析43 國別 資料來源 1,3-二氯-2-丙醇 2,3-二氯-1-丙醇 2-氯-1,3-丙醇 3-氯1,2 丙醇 德國標準 SKS 0.05ppm 0.1

16、ppm 未提及 0.05ppm美國食品 FCC 0.05ppm 未提及 未提及 1ppm用化學(xué)品法規(guī)(FCC) 英國食品 FAC 0.05ppm 未提及 未提及 0.01ppm 顧問委員會FAC瑞士 0.05ppm 未提及 未提及 10ppm 中國 未提及 未提及 未提及 1ppm* 部分國家對部分國家對3-氯丙醇的限量氯丙醇的限量2022-3-8食品中有毒有害物質(zhì)的分析44醬油中醬油中3-氯丙醇的分析方法氯丙醇的分析方法 醬油是微生物發(fā)酵產(chǎn)物，成分很復(fù)雜，國外普遍采用毛細管色譜法進行測定，即使這樣也會因為分離效果不好而影響分析結(jié)果的可靠性。通過研究發(fā)現(xiàn)，將樣品用苯基硼酸衍生化處理，轉(zhuǎn)化為易揮

17、發(fā)的物質(zhì)，正己烷抽提后，用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀的選擇離子監(jiān)測方法測定，提高了分辨率，且干擾少，靈敏度高，操作簡單，結(jié)果準確可靠。2022-3-8食品中有毒有害物質(zhì)的分析45實驗部分實驗部分1.試劑試劑衍生化試劑配制：稱取10g苯基硼酸，溶于38ml丙酮和2ml蒸餾水的混合液中。標準試劑配制：稱取25mg 3-氯-1，2-丙二醇，用200g/L NaCl溶液定容至250ml，得到100mg/L的標準溶液。然后分別移取0.1ml，1ml，10ml至100ml容量瓶中，用200g/L NaCl溶液定容至刻度，即得0.1，1，10mg/L標準溶液。 苯基硼酸，丙酮，正己烷，氯化鈉均為分析純。2022-

18、3-8食品中有毒有害物質(zhì)的分析46 取樣品或標準溶液5.0ml 置于10ml 帶塞試管中，加入1.0ml 衍生化試劑，搖勻后，置于90恒溫箱中反應(yīng)20 min，停止加熱，冷卻后加入3.0ml 正己烷，強力振蕩1min，離心，取上層清夜進行GC/MS分析。2樣品衍生化處理樣品衍生化處理2022-3-8食品中有毒有害物質(zhì)的分析47 氣相色譜：HP6890氣相色譜，HP-1的30m250m0.1m石英毛細管柱，載氣為高純氦氣，柱溫100，升溫速率15/min升至250，進樣口溫度250，柱前壓50Kpa。 質(zhì)譜：HP5973 GC/MS氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，EI離子源，電子能量70 eV，離子源溫度

19、230，四極桿溫度150，接口溫度280，電子倍增器電壓2100 V，檢測方式SIM監(jiān)測離子 m/z 147。氣相色譜氣相色譜-質(zhì)譜測定條質(zhì)譜測定條件件2022-3-8食品中有毒有害物質(zhì)的分析48 3-CPD產(chǎn)生機理：在酸水解法生產(chǎn)醬油的過程中，植物蛋白酸水解時伴隨發(fā)生脂肪水解而產(chǎn)生丙三醇，丙三醇在鹽酸作用下繼續(xù)反應(yīng)形成3-氯-1，2-丙二醇 植物蛋白 3.結(jié)果與討論結(jié)果與討論HClCH2CHCH2OHOHOHHClOHOH2CHCH2CHCl2022-3-8食品中有毒有害物質(zhì)的分析49按上述實驗條件分別進行標準溶液及樣品溶液分析，以外標法計算3-CPD含量。3-氯-1，2-丙二醇苯基硼酸衍生

20、物的質(zhì)譜圖見圖1。其基峰為m/z 147。我們選擇m/z 147進行SIM法，可獲得滿意的分離效果，其色譜總離子流圖見圖，保留時間為3.31min 的峰即為3-氯-1，2-丙二醇苯基硼酸衍生物。我們分析了幾種市面上的國產(chǎn)醬油，測定結(jié)果見表?？梢钥闯?，大部分醬油的3-CPD含量大大高于1.010-6，嚴重影響人體健康。樣品名稱 3-CPD含量(/10-6)樣品名稱 3-CPD含量(/10-6) 生抽A 0.4 老抽A 0.5 生抽B 82.5 老抽B 125.8 生抽C 220.7 老抽C 158.52022-3-8食品中有毒有害物質(zhì)的分析50405060708090100110120130140150160170180190200210020000400006000080000100000120000140000160000180000200000220000240000260000m/z-AbundanceScan 1156 (3.255 min): 071718.D (-)14791104196775143117631311591391781672081883-氯氯-1，2-丙二醇苯基硼酸衍生物質(zhì)譜圖