流式細(xì)胞儀上機(jī)前樣品的準(zhǔn)備

1、流式細(xì)胞儀上機(jī)前樣品的準(zhǔn)備一、 樣本的制備：1、 細(xì)胞需懸浮于培養(yǎng)基或PBS中（含1%的血清或0.5%的BSA）；上機(jī)前需用200目篩網(wǎng)過濾細(xì)胞，為了避免細(xì)胞粘連，可以添加1mmol/LEDTA。2、 如果分選后的細(xì)胞用于繼續(xù)培養(yǎng)，需確保樣本無菌，可適量添加抗生素。3、 推薦樣品體積為200-500L。用于分析的樣品推薦濃度為0.5-5×106cells/mL，用于分選的樣本推薦濃度為106-107cells/mL。為提高分選的速率，可以先準(zhǔn)備盡量濃的樣本（大于107cells/mL），上機(jī)后根據(jù)分選效率再用培養(yǎng)基或緩沖液稀釋成合適的濃度。二、 分選需準(zhǔn)備的材料：1、 接收細(xì)胞的液體

2、：完全培養(yǎng)基、血清、適合細(xì)胞存活的自制緩沖液、裂解液。2、 接收的容器：1.5mL Eppendorf管（至少加入100L液體）、5ml BD Falcon 352054流式管（至少加入1mL液體）、15mL離心管（至少加入2 mL液體）、96孔培養(yǎng)板（加入100L培養(yǎng)基）、PCR管（板）（加入4-10L預(yù)擴(kuò)增液）。3、 每次上機(jī)需要準(zhǔn)備空白對(duì)照（未染色的樣本）、同型對(duì)照和每一種熒光通道的單染樣品來調(diào)節(jié)電壓和補(bǔ)償（在其他儀器上獲取的電壓值和補(bǔ)償值不通用）；為了圈門精確及驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，用戶可以準(zhǔn)備FMO對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照。4、 用戶可以在分析（選）前把其他儀器上的流式圖發(fā)給工作人員，為分析（選）做更充分

3、的準(zhǔn)備。5、 使用96孔PCR板接收單細(xì)胞的用戶需要攜帶未使用的96孔PCR板及透明的封板膜。小型激光直寫儀使用須知1，圖紙要求最好使用L-edit繪制，使用其他繪圖軟件繪制的版圖提交前轉(zhuǎn)化成GDS II格式；2，儀器直寫的最小尺寸為2微米，設(shè)計(jì)時(shí)需注意線寬及間距；3，現(xiàn)平臺(tái)提供3寸、4寸掩膜，圖紙大小應(yīng)控制在6*6cm和9*9cm。自動(dòng)化移液工作站使用須知1，由客戶提供移液過程中所需的96孔板、384孔板等板材，槍頭可有償使用平臺(tái)提供各型號(hào)槍頭也可以自行提供；2，移液過程中不得手動(dòng)進(jìn)行板材移動(dòng)及更換，需暫停時(shí)可通過軟件操作或使用安全棒接觸光幕；高通量活細(xì)胞工作站使用須知1，由客戶提自行制備樣品，平臺(tái)現(xiàn)有3種不同規(guī)則的適配器，測(cè)試前